Descriviamo la fabbricazione di pellet ormonali compressi, nonché sottocutanea impianto chirurgico in topi. Questa strategia può essere combinato con la crescita di cellule e tessuti xenotrapianti sotto la capsula renale di topi nudi atimici valutare cancerogenesi ormonale e regolazione della crescita prostatica benigna.
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Articolo metodologico
Renale Capsule xenotrapianto e sottocutanea Pellet impianto per la valutazione di carcinogenesi della prostata e dell'iperplasia prostatica benigna
In questo articolo
Sommario
Abstract
Nuove terapie per due malattie comuni della prostata, il cancro alla prostata (PRCA) e iperplasia prostatica benigna (BPH), dipendono in modo critico sugli esperimenti che valutano la loro regolazione ormonale. Ormoni sessuali steroidei (in particolare androgeni ed estrogeni) sono importanti in PRCA e BPH, si sonda i loro rispettivi ruoli nell'indurre la crescita della prostata e carcinogenesi in topi con esperimenti usando pellet ormonali compressi. Ormonali e / o droga pellet sono facilmente realizzati con una pressa pellet, e chirurgicamente impiantati nel tessuto sottocutaneo dell'host topo maschio. Noi descriviamo anche un protocollo per la valutazione della carcinogenesi ormonale combinando sottocutanea dell'ormone pellet impianto con xenotrapianto di cellule ricombinanti prostata sotto la capsula renale di topi immunocompromessi. Inoltre, l'ormone sottocutanea pellet impianto, in combinazione con la capsula renale xenotrapianto di tessuto di BPH, è utile per capire meglio regolazione ormonale del prost benignamangiato la crescita, e per testare nuove terapie mirate sesso steroidi percorsi ormonali.
Introduzione
Il cancro della prostata (PRCA) e iperplasia prostatica benigna (BPH) sono significativi oneri sanitari. PRCA è il secondo tumore solido più frequente negli uomini ed una delle principali cause di cancro legate morte 1. BPH è anche molto diffusa tra gli uomini più anziani, e si stima che la manifestazione clinica di BPH, sintomi delle basse vie urinarie (LUTS), interesserà 50-90% degli uomini 2. Mentre androgeni ed estrogeni sono noti per essere importanti in PRCA e BPH, la nostra comprensione dei meccanismi ormonali che sono alla base della carcinogenesi e la crescita rimane incompleto 3,4. Modelli animali semplici e geneticamente tr....
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Protocollo
1. Preparazione di Compressed ormone / Drug Pellet
- Questa procedura deve essere eseguita in una cappa di sicurezza chimica mentre indossa un camice da laboratorio, guanti, mascherina, occhiali di sicurezza, e il cofano. Per evitare la contaminazione incrociata, è fondamentale che l'apparecchiatura che crea pellet è completamente pulito con etanolo al 70% prima e dopo la fabbricazione di ciascun tipo di pellet.
- Utilizzando una bilancia analitica e pesare la carta, misurare quantità desiderata di polvere di ormone / droga. Circa il 5% di materiale in più si raccomanda di accogliere la perdita durante la pressatura.
- Alcuni ormoni / far....
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Risultati
A seconda ipotesi da testare, capsula renale xenotrapianto di tessuti o cellule ricombinanti può essere eseguita isolatamente o in combinazione con l'impianto sottocutaneo ormone pellet. Uno schema di un esperimento ipotetica che unisce esperimento capsula xenotrapianto renale con ormone sottocutanea pellet impianto è illustrato in Figura 1. Una varietà di sostanze in polvere e / o cristallini possono essere utilizzati nella fabbricazione di pellet compressi con la stampa pellet. Figur.......
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Discussione
Questo documento e il protocollo descritto nel presente documento descrivono la produzione di ormone compressa e / o pellets droga, e la procedura chirurgica per l'impianto sottocutaneo pellet di topi. A seconda della domanda di ricerca da affrontare, questa tecnica può essere eseguita singolarmente, o in combinazione con capsula renale xenotrapianto di cellule della prostata innesti ricombinanti o xenotrapianti tessuto della prostata, che sono tecniche ampiamente utilizzate nella ricerca prostata 17-19. .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare tutti i membri del laboratorio di Ricke, passati e presenti. Ringraziamo Calvin Patten, Jr., DVM e Brigitte Raabe, DVM, per i commenti utili per quanto riguarda il protocollo. Vorremmo riconoscere il NIDDK, NCI, e NIEHS per il loro sostegno finanziario per questi studi: R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764. TMN è un tirocinante nel Programma di Formazione Medica Scientist presso l'Università di Rochester finanziato dal NIH T32 GM07356, il NIH sotto Ruth L. Kirschstein Nazionale Research Service Award F30DK093173 supporta anche questo progetto. CDV è supportato da T32CA157322 e ABT è supportato dal T32ES007015 presso l'Univer....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Pressa per pellet | PARR Industries | 2815 | 3mm Punch & Set di matrici |
| Bilancia analitica | Ohaus | 1918302 | Voyager o altro |
| bruciatore Bunsen | Fisher Scientific | 03-962Q | |
| Microscopio da dissezione | Leica | L2 | |
| Deltaphase Pad Kit (cera riscaldabile) | Braintree Scientific | 39DP | Alternativa a un termoforo elettrico |
| Sterilizzatore a corde calde | F.S.T.18000-45 | ||
| Vaporizzatore di isoflurano | Supera Anesthesia Innov | VAP3000 | |
| Camera di induzione | Supera Anesthesia Innov | RES644 | |
| F/AIR Canister | Supera Anesthesia Innov | 80120 | |
| Collettore a 4 porte | Supera Anesthesia Innov | RES536 | |
| Circuiti di respirazione | Supera Anesthesia Innov | CIR529 | |
| Raccordi di ingresso/uscita | Supera Anesthesia Innov | VAP203/4 | |
| Pressione Reg/Manometro | Supera Anesthesia Innov | OXY508 | |
| Flussimetro di ossigeno | Supera Anesthesia Innov | OXY660 | |
| Tubo trasparente da 21 mm | Supera Anesthesia Innov | 301-150 | |
| Cono nasale per topi piccoli | Supera Anesthesia Innov | ACC526 | |
| Camice chirurgico sterile | Midwest Vet Supply | 350.79866.2 | |
| Maschera chirurgica | Midwest Vet Supply | 350.50111.2 | 2 strati con passanti per le orecchie |
| Garza sterile | Midwest Vet Supply | 001.14100.2 | Guanti sterili 2 x 2 pollici |
| Kimberly Clark | 55092 | ||
| Bouffant | Midwest Vet Supply | 001.27100.2 | |
| Applicatore di punta in cotone | Midwest Vet Supply | 001.06220.2 | |
| Scrub chirurgico Wash | Midwest Vet Supply | 733.80010.3 | |
| Campi sterili (fenestrati) | General Econopak, Inc | 88VCSTF | |
| REAGENTS | |||
| Cholesterol | Sigma-Aldrich | C-3292 | |
| Testosterone Proprionato | Sigma-Aldrich | T-1875 | |
| 17β-estradiolo | Sigma-Aldrich | E-2758 | |
| Isoflurano | Midwest Vet Supply | 193.33161.3 | |
| Carprofene | Midwest Vet Supply | 193.70200.3 | Iniettabile (Rimadyl) |
| Betadine | Webster Veterinary | 07-836-3379 | |
| Soluzione salina sterile | Midwest Vet Fornitura | 193.74504.3 | NaCl 0.9%, iniettabile |
| STRUMENTI CHIRURGICI | |||
| Forbici dritte affilate/smussate | Strumenti scientifici fini (FST) | 14054-13 | |
| Pinza Graefe (Seghettata, Dentata, Curva) | F.S.T. | 11055-10 | |
| Forbici per iride fini | F.S.T. | 14090-09 | |
| Graefe bisturi | F.S.T. | 10071-12 | |
| Dumont #5 pinza | F.S.T. | 11251-20 | |
| Porcellana Pasteur | Scientific | S67050 | " lunghezza |
| pinza Graefe (seghettata, curva) | F.S.T. | 11052-10 | |
| Pinza Graefe (seghettata, diritta) | F.S.T. | 11050-10 | |
| Vicryl Suture | Midwest Vet Supply | 295-92100.2 | 4-0, FS-2, |
| portaaghi assorbibile con azione a forbice | FST | ||
| Clip per ferite | Braintree Scientific | ACS CS | Può utilizzare clip da 7 mm o 9 mm |
| Reflex Wound Clipper | F.S.T. | 12031-09 | Corrisponde con la dimensione della clip della ferita |
| Would Clip Remover | F.S.T. | 12033-00 | universale |
| per sterilizzazione | F.S.T. | 20810-01 | Qualsiasi contenitore autoclavabile andrà bene |
| Siringa con ago | BD | 148292C | 1cc, 25Gx1 |
| Ear Tag Applicator | National Band Tag Co. | 1005s1 | Alternativa all'intaglio dell'orecchio |
| Piccoli Animali Ear Tags | National Band Tag Co. | Codice 1005-1 |
Riferimenti
- Cancer Facts Figures. 4, American Cancer Society. (2010).
- McVary, K. T. BPH: epidemiology and comorbidities. Am. J. Manag. Care. 12, S122-S128 (2006).
- Nicholson, T. M., Ricke, W. A.
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Ristampe e permessi
