Il modello di resezione del nervo tibiale è un modello ben tollerato, validato e riproducibile di atrofia del muscolo scheletrico. Il protocollo chirurgico modello è descritto e dimostrato in C57Black6 topi.
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Articolo metodologico
Resezione del nervo tibiale - Un modello standardizzato per Denervation indotta scheletrico atrofia muscolare nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il modello di resezione del nervo tibiale è un modello ben tollerato, validato e riproducibile di denervazione indotta atrofia del muscolo scheletrico nei roditori. Benché originariamente sviluppato e ampiamente utilizzato nel ratto causa delle sue grandi dimensioni, il nervo tibiale nei topi è abbastanza grande da poter essere facilmente manipolato con uno schiacciamento o transezione, lasciando i rami peroneale e surale del nervo sciatico intatto e preservando così i loro muscoli bersaglio. Così, questo modello offre i vantaggi di indurre minore morbilità e impedimento della deambulazione rispetto al modello resezione del nervo sciatico e permette anche ai ricercatori di studiare i fisiologici, cellulare e molecolare dei meccanismi biologici che regolano il processo di atrofia muscolare nei topi geneticamente modificati. Il nervo tibiale fornisce il gastrocnemio, soleo e muscoli plantare, quindi la sua recisione permette lo studio del muscolo scheletrico denervato composto da fibre a contrazione rapida di tipo II e / o tipo di contrazione lenta iofibre. Qui mostriamo il modello recisione del nervo tibiale nel topo C57Black6. Valutiamo l'atrofia del muscolo gastrocnemio, come un muscolo rappresentante, a 1, 2 e 4 settimane dopo la denervazione misurando pesi muscolari e l'area specifica il tipo di fibra trasversale su paraffina sezioni istologiche immunocolorate per una rapida contrazione della miosina.
Introduzione
Denervazione del muscolo scheletrico, a causa di una lesione traumatica dei nervi periferici, malattie o intervento farmacologico, comporta l'immediata perdita della funzione contrattile del muscolo volontario. Muscle inizia in concomitanza ad atrofizzarsi e questa atrofia è reversibile se tempestivo, reinnervazione di buona qualità si verifica 1,2. In assenza di reinnervazione, myofiber atrofia progredisce, e cambiamenti biologici irreversibili nel muscolo si verifica con fibrosi muscolare e morte miofibre. Qui mostriamo il modello nervo tibiale resezione, un modello di denervazione indotta-atrofia del muscolo scheletrico e la fibrosi, nei topi. Quest....
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Protocollo
Prima di utilizzare questo modello, i ricercatori devono aver ricevuto l'approvazione per il protocollo chirurgico dall'uso degli animali della loro istituzione organo di governo. Il modello è approvato dal Consiglio di etica della ricerca, Hamilton Health Sciences Corporation, McMaster University (AUP # 10-04-24) e viene effettuata in stretta conformità con le raccomandazioni del Consiglio canadese sulla cura degli animali.
1. Topo Preparazione
- Pesare il mouse. Indurre l'anestesia con il 5% isoflurano o 2% alotano. Il circuito utilizzato dovrebbe garantire un'adeguata scavenging dell'anestetico per protegge....
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Risultati
Recisione del nervo tibiale denervates gastrocnemio, soleo e muscoli plantare del polpaccio. Qui valutiamo lo sviluppo di atrofia nel muscolo gastrocnemio, come un muscolo rappresentante. Muscolo gastrocnemio è stato raccolto da 2-3 mesi vecchi C57Black 6 topi (Jackson Laboratories) denervati per 1, 2, o 4 settimane. Pesi muscolari diminuiscono progressivamente (figura 1), così come l'area di sezione trasversale di tipo II fibre muscolari a contrazione rapida (Figura 2), nel t.......
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Discussione
Il nervo modello di resezione tibiale di atrofia del muscolo scheletrico denervazione-indotta è un modello comunemente impiegato e ben convalidato nei ratti. Abbiamo adattato questo modello per l'uso in topi, che consente al ricercatore di sfruttare la presenza di topi geneticamente ingegnerizzati e studiare il processo di atrofia muscolare in vivo, in assenza di proteine fondamentali per la regolazione della massa muscolare 7,8. I muscoli gastrocnemio e soleo, sia denervato in questo modello, .......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interesse sono dichiarate.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal partenariato Cihr neuromuscolare della ricerca (JNM - 90.959; al Jaeb).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagenti e Materiali | |||
| 10-0 Sutura in nylon | Ethicon | 2850G | |
| 5-0 Sutura Vicryl | Ethicon | J553G | |
| Equipment | |||
| Spring Forbici per microdissezione | Strumenti chirurgici fini | 15021-15 | |
| Pinze ultra fini | Fine Surgical Strumenti | 11370-40 | |
| Micro portaaghi non bloccabile (driver) | Strumenti chirurgici di precisione | 12076-12 | |
| Divaricatore a molla | Strumenti chirurgici di precisione | 17000-02 |
Riferimenti
- Fu, S. Y., Gordon, T. Contributing factors to poor functional recovery after delayed nerve repair: prolonged denervation. J. Neurosci. 15, 3886-3895 (1995).
- Kobayashi, J., Mackinnon, S. E., Watanabe, O., Ball, D. J., Gu, X. M., Hunter, D. A., Kuzon, W. M.
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Ristampe e permessi
