Un<em&gt; In-vitro</em&gt; Preparazione dei neuroni enterici isolati e glia dal plesso mienterico del topo adulto

Tricia H. Smith; Joy Ngwainmbi; John R. Grider; William L. Dewey; Hamid I. Akbarali

doi:10.3791/50688

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Articolo metodologico

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DOI:

10.3791/50688

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7 agosto 2013

Tricia H. Smith¹ , Joy Ngwainmbi¹ , John R. Grider² , William L. Dewey¹ , Hamid I. Akbarali¹

¹Pharmacology and Toxicology, Virginia Commonwealth University, ²Physiology and Biophyics, Virginia Commonwealth University

In questo articolo

Sommario

Dimostriamo un protocollo di coltura cellulare per lo studio diretto dei componenti neuronali e gliali del sistema nervoso enterico. Un neurone / cultura mista glia su vetrini è preparato dal plesso mienterico di topo adulto fornendo la possibilità di esaminare singolo neurone e la funzione glia di elettrofisiologia, immunoistochimica, Ecc.

Abstract

Il sistema nervoso enterico è una vasta rete di neuroni e glia funzionare la lunghezza del tratto gastrointestinale che controlla funzionalmente motilità gastrointestinale. Una procedura per l'isolamento e la coltura di una popolazione mista di neuroni e glia dal plesso mienterico è descritto. Le colture primarie possono essere mantenuti per più di 7 giorni con connessioni di sviluppo tra i neuroni e glia. La striscia di muscolo longitudinale con l'allegata mienterico plesso è spogliato dal muscolo circolare sottostante dell'ileo mouse o del colon e sottoposto a digestione enzimatica. In condizioni di sterilità, l'isolata popolazione neuronale e gliale sono conservati all'interno del seguente centrifugazione pellet e placcato su vetrini. Entro 24-48 ore, si verifica crescita dei neuriti e neuroni può essere identificato da marcatori pan-neuronale. Dopo due giorni di cultura, isolati neuroni potenziali d'azione di fuoco, come osservato da studi di patch clamp. Inoltre, glia enterica può anche essere indicanied di GFAP colorazione. Una rete di neuroni e glia in stretta apposizione forma entro 5 - 7 giorni. Neuroni enterici possono essere individualmente e direttamente studiati utilizzando metodi come l'immunoistochimica, elettrofisiologia, imaging del calcio, e la PCR singola cellula. Inoltre, questa procedura può essere eseguita in animali geneticamente modificati. Questa metodologia è semplice da eseguire e poco costoso. Nel complesso, questo protocollo espone i componenti del sistema nervoso enterico in modo facilmente manipolata in modo da poter meglio scoprire la funzionalità del ENS in stati normali e malattie.

Introduzione

Il sistema nervoso enterico (ENS) è vasta rete di nervi e glia che corre per tutta la lunghezza del tratto gastrointestinale (GI). L'ENS controlla funzionalmente tutti gli aspetti della digestione, tra cui la peristalsi, l'assorbimento di liquidi / secrezione, sensazione di stimoli, ecc (per una rassegna vedi ^1). Esso contiene oltre 500 milioni di neuroni, più che trovato nel midollo spinale, e contiene ogni classe neurotrasmettitore presente nel cervello. Inoltre, l'ENS è unico in quanto può funzionare senza riflesso input dal sistema nervoso centrale ^2. Comprensione della ENS è cruciale, non solo per capire il suo normale ....