Un metodo per la sintesi di titanio e vanadio agenti antitumorali-vie sensitive è descritto, insieme con la valutazione della loro attività citotossica verso la linea di cellule di cancro umano dal saggio MTT.
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Articolo metodologico
Antitumorali metallo Complessi: Sintesi e citotossicità valutazione da parte del saggio MTT
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Titanio (IV) e vanadio (V) complessi sono agenti antitumorali molto potenti. Una sfida nella loro sintesi si riferisce alla loro instabilità idrolitica; quindi la loro preparazione deve essere condotta in atmosfera inerte. Valutazione dell'attività antitumorale di questi complessi può essere ottenuto mediante il saggio MTT.
Il saggio MTT è un saggio colorimetrico basato sulla redditività riduzione enzimatica della molecola MTT a formazano quando è esposto a cellule vitali. Il risultato della riduzione è un cambiamento di colore della molecola MTT. Misure di assorbanza relativi a un controllo determinano la percentuale rimanente cellule tumorali vitali dopo il loro trattamento con diverse concentrazioni di un composto in esame, che si traduce per l'attività antitumorale componenti ei valori di IC 50. Il saggio MTT è molto comune negli studi di citotossicità grazie alla sua precisione, rapidità e relativa semplicità.
Qui abbiamo preinviato un protocollo dettagliato per la sintesi di farmaci a base di metallo sensibile dell'aria e la misurazione della vitalità cellulare, compresa la preparazione delle piastre delle celle, incubazione dei composti con le cellule, misure di vitalità usando il saggio MTT, e determinazione dei valori di IC 50.
Introduzione
La chemioterapia è ancora uno dei principali cicli di trattamenti impiegati in clinica per varie malattie tumorali, e quindi grande quantità di ricerca è condotta in tutto il mondo con l'obiettivo di sviluppare nuovi e migliori farmaci antitumorali. Tali studi principalmente iniziano a livello chimico, con la progettazione e la preparazione di composti, seguita da valutazione biologica delle proprietà citotossiche in vitro. La vitalità cellulare può essere valutata da vari saggi che forniscono informazioni sulle attività cellulare 1-2.
Cisplatino è un esempio di un complesso di platino che è ampiamente utilizzato c....
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Protocollo
- Preparazione del V (V) complesso (Figura 2); 18 condotta passaggi 1.1-1.4 in un glove-box, se un glove-box non è disponibile, passare alla alternativa passaggi 2 (2.1-2.6).
- Sciogliere 0,42 mmol dei leganti H 2 L in THF anidro e aggiungerlo a una soluzione sotto agitazione di quantità equivalenti di VO (O i Pr) 3 in THF.
- Mescolare la miscela di reazione a temperatura ambiente per 15 min, e rimuovere le sostanze volatili sotto vuoto.
- Aggiungere esano freddo e rimuoverlo sotto vuoto. Una polvere viola scuro deve essere ottenuta con una resa quantitativa.
- Pesare 8 mg del composto ottenuto i....
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Risultati
I complessi sono stati preparati sulla base delle procedure stabilite 18,28 e la loro purezza può essere valutata mediante analisi NMR ed elementare.
I dati ricevuti dal saggio MTT viene analizzata per valutare la citotossicità del composto 18,21. In primo luogo, viene eseguita la sottrazione del valore di assorbanza del bianco di controllo da tutti gli altri valori. In secondo luogo, il valore del controllo del solvente THF è impostato su 100% vitalità, come è stato ag.......
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Discussione
Il metodo descritto in questo manoscritto unisce la sintesi chimica con saggio biologico vitalità cellulare. Come con tutti i metodi biologici relativi cellule vitali, è fondamentale per lavorare in una cappa laminare, e mantenere condizioni di sterilità, compreso l'uso di solventi organici sterili. Inoltre, la preparazione e lo stoccaggio di farmaci a base di metallo idroliticamente instabile devono essere effettuate in condizioni inerti, per i quali dovrebbero essere utilizzati tecniche vano portaoggetti o di line.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Ringraziamenti
Il finanziamento è stato ricevuto dal Consiglio europeo della ricerca nell'ambito del Settimo programma quadro della Comunità europea (FP7/2007-2013) / ERC accordo di sovvenzione no [239603]
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagent/Material | |||
| Siero fetale bovino (FBS) | Biological Industries | 04-007-1A | |
| Hexane AR | Gadot | 830122313 | Essiccato utilizzando un sistema di essiccazione a solvente |
| HT-29 linea cellulare | ATCC | HTB-38 | |
| Isopropanolo AR | Gadot | 830111370 | |
| L-glutammina | Biological Industries | 03-020-1B | |
| MTT | Sigma-Aldrich | M5655-1G | |
| Antibiotici penicillina/streptomicina | Biological Industries | 03-031-1B | |
| RPMI-1640 con rosso fenolo con L-glutammina | Sigma-Aldrich | R8758 | |
| RPMI senza rosso fenolo | Biological Industries | 01-103-1A | |
| Tetraidrofurano (THF) AR | Gadot | 830156391 | essiccato utilizzando un sistema di essiccazione a solvente |
| Ti(OiPr)4 | Sigma-Aldrich | 205273-500ML | sensibile all'umidità |
| Tripsina/EDTA | Biological Industries | 03-052-1B | |
| VO(OiPr)3 | Sigma-Aldrich | 404926-10G | umidità sensitive |
| Equipment | |||
| Pipetta a 12 canali 30-300 μ l | Pipetta Thermo Scientific | ||
| a 12 canali 5-50 μ l | Finnpipette | ||
| 75 cm2 pallone | NUNC | 156472 | |
| piastra a 96 pozzetti con coperchio (fondo piatto) | NUNC | 167008 | |
| CO2 Legante per incubatore | APT.line C150 | ||
| Controcamera | Marienfeld-Superior | 650030 | |
| Eppendorf fiala | KARTELL | ||
| Scatola a guanti | M. Braun | ||
| Cappa a flusso laminare | ADS LAMINAIRE | OPTIMALE 12 | |
| Spettrofotometro lettore di micropiastre | Bio-Tek | El-800 | |
| Microscopio | Nikon | Eclipse TS100 | |
| Pipetta 20-200 μ l | Pipetta Finnpipette | ||
| 5-50 μ l | Pipetta |
Riferimenti
- Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development. Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).
- Hatok, J., et al. In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor ce....
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Ristampe e permessi
