Negli ultimi anni, endoscopi di nuova generazione sono emersi come importanti ausili di ricerca diagnostici per la valutazione colite murina e tumori colorettali. Presentiamo qui un protocollo dettagliato per la valutazione endoscopica di infiammazione e tumori colorettali nei topi, nonché un sistema di punteggio romanzo che utilizza gli identificatori decimali per documentare la gravità endoscopica di colite e tumori colorettali.
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Articolo metodologico
La colonscopia flessibile in topi per valutare la gravità della colite e colon-retto Tumori Utilizzo di un sistema Validated endoscopica Scoring
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'uso della moderna endoscopia per scopi di ricerca ha notevolmente facilitato la nostra comprensione di patologie gastrointestinali. In particolare, l'endoscopia sperimentale è stato molto utile per gli studi che richiedono valutazioni ripetute in un singolo animale da laboratorio, come quelli valutazione dei meccanismi di malattia intestinale infiammatoria cronica e la progressione del tumore colorettale. Tuttavia, i metodi utilizzati negli studi sono molto variabili. Almeno tre sistemi di punteggio endoscopici sono stati pubblicati per la colite murina e pubblicato protocolli per la valutazione dei tumori colorettali non tengono conto della presenza di concomitante infiammazione del colon. Questo studio sviluppa e convalida un sistema riproducibile punteggio endoscopico che integra valutazione sia infiammazione e tumori simultaneamente. Questo nuovo sistema di punteggio ha tre componenti principali: 1) la valutazione della portata e della gravità di infiammazione del colon-retto (basata sui risultati perianali, la trasparenza del wall, sanguinamento delle mucose e lesioni focali), 2) la registrazione quantitativa delle lesioni tumorali (sugli rete e grafico a barre), e 3) ordinamento numerico di casi clinici per la loro rilevanza patologica e la ricerca basata su unità decimali con categorie assegnate delle lesioni osservate e complicanze endoscopiche (identificatori decimali). Il video e manoscritto qui presentati sono stati preparati, seguendo protocolli IACUC approvati, per permettere agli investigatori di segnare i propri topi sperimentali utilizzando una metodologia endoscopica ben validato e altamente riproducibile, con l'opzione di sistema per differenziare distale di colite endoscopico prossimale (D-PECS ).
Introduzione
Endoscopia murino è stato eseguito come strumento di ricerca utile per oltre un decennio 1-3. Ad oggi, la maggior parte degli studi che impiegano endoscopia murini hanno utilizzato endoscopi rigidi, anche se alcuni hanno anche utilizzato sigmoidoscopia flessibile. Endoscopia murini offre risultati immediati e una valutazione più oggettiva del grado di normalità intestinale, la gravità dell'infiammazione, e la progressione del tumore rispetto alle misure indirette, come la perdita di peso corporeo, diarrea, e istologia (che è ottimale quando le lesioni sono di leopardo), mentre offrendo approfondimenti sulla salute generale del colon. Più in particolare....
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Protocollo
1. Impostazione del sistema Endoscopia
- Impostare il sistema di endoscopia prima di anestetizzare i topi, seguendo le istruzioni del produttore. Utilizzare un ureteroscopio video progettato per gli esseri umani di questo protocollo (Figura 1). Il diametro esterno del tubo di inserimento è 9,9 Fr (3,3 mm), la sua estremità distale è 8,5 Fr (2,8 mm), e il diametro interno del canale strumentazione è 6 Fr (1,2 mm).
- Sebbene l'uso di endoscopi non sono stati collegati a trasmissione di malattie [9], sterilizzare l'endoscopio e lente con etanolo al 70% o 10 con tecniche appropriate quando si lavora con microrganismi s....
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Risultati
Il protocollo e le immagini presentate in questo studio sono stati preparati con una Olympus URF-V endoscopio flessibile 14 e NBI 11,15. Le immagini video sono state salvate in formato MPEG-2 e le immagini in formato JPG, TIF, PNG, o in formato DICOM con un massimo di 1.280 x 1.024 pixel, valori di memorie portatili USB flash standard. NBI aumenta il contrasto visivo dei tessuti-emoglobina contiene. Luce normale e di imaging NBI sono caratteristiche fondamentali per illustrare l'anatomia normale de.......
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Discussione
Ci sono diverse considerazioni per quanto riguarda la modifica e la risoluzione dei problemi della tecnica endoscopica nei topi. Aspetti critici della procedura che deve essere padroneggiato durante l'uso di endoscopia flessibile includono la regolazione del volume d'aria necessario per prevenire distensione addominale e compromissione respiratoria del mouse, e gli aspetti tecnici minori del controllo della vista con il coordinamento dei controlli angolazione e di coppia . Controllo di coppia è importante ridurr.......
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Dichiarazioni
Non finanziaria o conflitto di interessi resi noti.
Ringraziamenti
Un grazie speciale a Sarah Kossak, Mitchell Guanzon, Sung Yeun Yang e Li Guo Jia, per la loro collaborazione durante la valutazione endoscopica dei loro animali da esperimento.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Isoflurano, USP | Webster Veterinary | ||
| Lubrificante chirurgico | Savage laboratories | surgilube, 0281-0205-45 | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Thermo Scientific | SH30256 | |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Blu di metilene 1% Soluzione acquosa | Fisher | Science Education S96393 | |
| Ureteroscopio digitale flessibile | Olympus America | URF-V | |
| Centro sistema video | Olympus America | VISERA Pro OTV-S7 Pro | |
| Sorgente luminosa allo xeno | Olympus America | VISERA Pro CLV-S40 Pro | |
| Videoregistratore | MediCapture, Inc. | MediCap USB200 | |
| Pinze flessibili per biopsia | Olympus America | FBC-3115 | |
| Macchina per anestesia | Euthanex Corporation | EZ-7000 Classic System |
Riferimenti
- Huang, E. H., et al. Colonoscopy in mice. Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).
- Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing....
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Ristampe e permessi
