I macrofagi sono da tempo riconosciuti come una componente critica delle risposte immunitarie innate e adattative. La recente esplosione di conoscenze relative agli aspetti evolutivi, genetici e biochimici dell'interazione tra macrofagi e microbi ha rinnovato l'attenzione scientifica ai macrofagi. Questo articolo descrive un metodo per differenziare macrofagi da midollo osseo di topo.
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Articolo metodologico
Derivate dal midollo osseo macrofagi Production
In questo articolo
Sommario
Abstract
I macrofagi sono componenti critici delle risposte immunitarie innate e adattative, e sono la prima linea di difesa contro gli invasori stranieri a causa delle loro potenti attività microbicida. I macrofagi sono ampiamente distribuiti in tutto il corpo e sono presenti negli organi linfoidi, fegato, polmoni, tratto gastrointestinale, sistema nervoso centrale, le ossa e la pelle. A causa della loro ripartizione, partecipano in un'ampia gamma di processi fisiologici e patologici. I macrofagi sono cellule altamente versatile in grado di riconoscere alterazioni microambientali e per mantenere l'omeostasi tissutale. Numerosi agenti patogeni si sono evoluti meccanismi per utilizzare i macrofagi come cavalli di Troia per sopravvivere, replicarsi in, e infettare sia gli esseri umani e gli animali e per diffondere in tutto il corpo. La recente esplosione di interesse per gli aspetti evolutivi, genetici e biochimici delle interazioni ospite-patogeno ha rinnovato l'attenzione scientifiche per quanto riguarda i macrofagi. Qui, descriviamo unprocedura per isolare e coltivare macrofagi da midollo osseo murino che fornirà un gran numero di macrofagi per studiare le interazioni ospite-patogeno nonché altri processi.
Introduzione
Un aspetto significativo della funzione dei macrofagi è il loro ruolo nella immunità innata e adattativa. A causa della loro capacità di fagocitare particelle inerti, batteri o parassiti, i macrofagi sono una prima linea di difesa contro gli invasori stranieri. Una volta interiorizzato, i microbi sono degradati all'interno phagolysosomes. I macrofagi anche inviare segnali di reclutamento per e gli antigeni presenti di altre cellule immunitarie come i linfociti T. I macrofagi sono derivati da monociti. Monociti sorgono nel midollo osseo da cellule staminali mieloidi e migrano sangue periferico e vari tessuti dove si differenziano in macrofagi. Si stima che un to....
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Protocollo
Dichiarazione Etica
Il protocollo per la gestione degli animali è stato approvato dal nostro Comitato Etico istituzionale Animal "Conseil Scientifique du Centre de Formation et de Recherche Sperimentale Médico-Chirurgical" (CFREMC, permesso Progetto 10-300.122.013 a Eric Ghigo) da Aix-Marseille University in accordo con le regole di Décret N ° 87-848 del 1987/10/19. Gli esperimenti sono stati condotti presso la Faculté de Médecine de la Timone (permesso Sperimentazione numero 13,385 a Eric Ghigo).
1. Materiali e Culture Media Preparazione
- Sterilizzare due pinze, due forbici, due lame chirurgiche, un mo....
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Risultati
Lo scopo di questo metodo era di ottenere facilmente un gran numero di macrofagi in pochi giorni. La preparazione di cellule di midollo osseo è illustrato in Figura 1. Le ossa della zampa posteriore sono stati raccolti e fracassato in un mortaio. Una volta che i macrofagi residenti sono stati rimossi dalla preparazione di cellule di midollo osseo, cellule del midollo osseo sono state incubate con GM-CSF (giorno 0). Dopo 3 giorni, le cellule, che erano intorno e nonadherent prima cultura, iniziano a diff.......
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Discussione
Il protocollo qui descritto dettaglia un metodo per produrre un gran numero di BMDMs. BMDM sono cellule primarie e hanno la funzione e le proprietà dei macrofagi differenziati da monociti biologico perché ci sono maturo, in contrasto con linee cellulari di macrofagi, che sono immaturi. BMDMs possono essere utilizzati per lo screening genetico (RNAi), screening di farmaci, studi funzionali, studi di interazione ospite-patogeno e molte altre aree di indagine.
La procedura qui presentata è molt.......
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Dichiarazioni
Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dal CNRS (PICS 2012-2014 a EG), e da una sovvenzione della Regione Campania (LR n.5, 28.03.2002 a Giovanna Mottola). Filippo Conti è un collega della Cooperazione Scientifica Fondazione'' Infectiopole Sud''. Nicola Boucherit è un collega del Ministero francese per la Ricerca e la Tecnologia. Le fonti di finanziamento hanno avuto alcun ruolo nel disegno dello studio, raccolta dati, analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco Life Technologies | 21969-035 | |
| Siero fetale di vitello | Gibco Life Technologies | 10270 | |
| Penicillina/Streptomicina | Gibco Life Technologies | 15070 | |
| Glutammina | Gibco Life Technologies | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Lisi dei globuli rossi tampone | Sigma | R7757 | |
| Filtro cellulare 70 μ m Nylon | BD Falcon | 352350 | |
| Filtro cellulare 40 μ m Nylon | BD Falcon | 352340 | |
| provette da 50 ml | qualsiasi fornitore | n/a | |
| provette da 15 ml | qualsiasi fornitore | n/a | |
| piastre di Petri (100/20 mm) | qualsiasi fornitore | n/a | |
| piastre di Petri trattate con coltura (35/10 mm) | qualsiasi fornitore | n/a |
Riferimenti
- Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
- Van Furth, R. Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderm....
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Ristampe e permessi
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