Ultra-ultrasuoni ad alta frequenza è un potente strumento di imaging dal vivo per esaminare anomalie cardiache nei piccoli animali. La sua invasività consente di mantenere lo stato fisiologico di embrioni. Qui, vi mostriamo l'uso di M-mode ultrasuoni per misurare le frequenze cardiache di embrioni a E18.5 in utero.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
In utero Misurazione della frequenza cardiaca in mouse da non invasiva ecocardiografia M-mode
In questo articolo
Sommario
Abstract
Cardiopatie congenite (CHD) è la causa infettiva più frequente di morte alla nascita. L'incidenza di CHD va 4-50 / 1, 000 nascite (Malattia e stime regionali lesioni, Organizzazione Mondiale della Sanità, 2004). Ambulatori che spesso compromettono la qualità della vita sono necessari per correggere i difetti cardiaci, ricordandoci l'importanza di trovare le cause di CHD. Modelli di topo mutante e tecnologia di imaging dal vivo sono diventati strumenti essenziali per studiare l'eziologia di questa malattia. Anche se i metodi avanzati permettono l'imaging dal vivo di cuori anomali negli embrioni, gli stati fisiologici e emodinamici di quest'ultimo sono spesso compromesse a causa di procedure chirurgiche e / o lunghi. Noninvasive immagini ecografiche, tuttavia, può essere utilizzato senza chirurgicamente esporre gli embrioni, mantenendo quindi la loro fisiologia. Qui, usiamo semplice ecografia M-mode per valutare le frequenze cardiache di embrioni a E18.5 in utero. La rilevazione dei tassi anormali del cuore è davvero un buon indicatoretor di disfunzione del cuore e, quindi, costituisce un primo passo verso l'identificazione di difetti di sviluppo che possono portare a insufficienza cardiaca.
Introduzione
CHD è la causa infettiva più comune di morte alla nascita 1. Interventi chirurgici multipli sono spesso necessari per correggere i difetti strutturali nei soggetti la cui qualità della vita può rimanere compromessa 1. I bambini con CHD sviluppano frequentemente disturbi neurologici, anche se non hanno subito un intervento chirurgico, indicando importante in utero conseguenze sullo sviluppo 2,3. Entrambi i fattori genetici e ambientali, come l'esposizione a virus o agenti chimici (alcol) durante la gravidanza, causa CHD. Studiare le contributori genetici è ancora nella sua fase iniziale, ma in rapida crescita. Per identifi....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutte le procedure indicate in questo protocollo sono state approvate dal Comitato Animal Care IRCM.
1. Sistema a ultrasuoni e la stazione di preparazione
- Avviare il sistema di imaging ad ultrasuoni e collegare la sonda e l'unità di controllo fisiologia secondo le istruzioni del produttore (Figura 1). Scegli cardiaca programma di misurazione e la sonda che corrisponde al trasduttore 30 MHz.
- Riempire il revolver del la sonda con acqua deionizzata. Evitare le bolle d'aria in quanto interferiscono con risoluzione di immagini. Posizionare la sonda con il lato maniglia sul suo supporto vicino alla ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Il suddetto metodo è stato usato per valutare l'impatto della presenza o assenza della furina serina proteasi in cellule endoteliali su frequenze cardiache di embrioni di topo a E18.5 in utero. Furin appartiene alla famiglia delle convertasi proprotein (PC) che i precursori delle proteine fendere dopo residui basici. Furin e suoi substrati sono proteine secretorie e scissione possono verificarsi nel Golgi, endosomi o sulla superficie cellulare. Substrati chiave di furin includono TGFb, e fattori TGFb-li.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Ecocardiografia M-mode è un metodo efficace e semplice per misurare in utero frequenze cardiache di embrioni di topo. Trasduttori disponibili in commercio offrono una risoluzione sufficiente per visualizzarne i piccoli cuori pulsanti. Così, essi consentono la misurazione della frequenza cardiaca estremamente preciso, rispetto ad altri metodi quali misurazione impulsi, e possono sostituire microscopia video ad alta risoluzione. Tuttavia, gli strumenti attuali non consentono l'analisi simultanea di tutti gli .......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Ringraziamo Manon Laprise per la formazione in ecocardiografia e Ann Chamberland per scattare le foto esposte nelle figure 1 e 2. Questo lavoro è stato sostenuto dal Canadian Institutes of Health Research Grant MOP 44363 e Canada Chair 950-216.684.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Partner farmaceutici di isoflurano | del Canada Inc. | CP0406v2 | 1-cloro-2,2,2-trifluoroetiletil difluorometil etere |
| Gel per ultrasuoni | Parker Laboratories Inc. | Elettrodo in gel trasparente | |
| Parker Laboratories Inc. | Spectra 360 | ||
| Gel oftalmico | Novartis | Tear-Gel | |
| Crema depilatoria | Church Dwight Co., Inc. | Nair | |
| Tagliacapelli | |||
| Scambio di garza/cotone | Q-tips | ||
| Pennarello | |||
| Alta risoluzione In vivo Sistema di imaging a ultrasuoni | Visual Sonics | Vevo770 | |
| 30 MHz Trasduttore | Visual Sonics | RMV707B | |
| Piattaforma di imaging e unità di controllo per fisiologia | Visual Sonics | ||
| Anesthetic System | Cyprane North America Inc. | ||
| Lampada |
Riferimenti
- Hoffman, J. I., Kaplan, S. The incidence of congenital heart disease. J. Am. Coll. Cardiol. 39, 1890-1900 (2002).
- Miller, S. P., et al. Abnormal brain development in newborns with congenital heart disease. N. Engl. J. Med. 357, 1928-1938 (2007).
- Bru....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
