Comunemente utilizzati, sono descritti metodi altamente accessibili per l'esame migrazione cellulare e l'invasione in vitro. Il primo metodo è il saggio chiusura della ferita cella che misura la motilità cellulare. Il secondo metodo è il transwell migrazione e invasione test che valuta la chemiotassi e la capacità invasiva delle cellule.
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Articolo metodologico
Nella migrazione delle cellule in vitro e saggi Invasion
In questo articolo
Sommario
Abstract
La migrazione è una proprietà chiave delle cellule vive ed è fondamentale per il normale sviluppo, la risposta immunitaria e i processi patologici come le metastasi del cancro e l'infiammazione. I metodi per esaminare la migrazione cellulare sono molto utili e importanti per un'ampia gamma di ricerche biomediche come la biologia del cancro, l'immunologia, la biologia vascolare, la biologia cellulare e la biologia dello sviluppo. Qui usiamo la migrazione e l'invasione delle cellule tumorali come esempio e descriviamo due saggi correlati per illustrare i metodi comunemente usati e facilmente accessibili per misurare questi processi. Il primo metodo è il saggio di chiusura della ferita per coltura cellulare in cui viene generato un graffio su un monostrato cellulare confluente. La velocità di chiusura della ferita e la migrazione cellulare possono essere quantificate scattando foto istantanee con un normale microscopio invertito a diversi intervalli di tempo. Il comportamento migratorio cellulare più dettagliato può essere documentato utilizzando il sistema di microscopia time-lapse. Il secondo metodo descritto in questo articolo è il saggio di migrazione e invasione cellulare transwell che misura la capacità della motilità e dell'invasività cellulare verso un gradiente chemio-attrattivo. Il nostro obiettivo è quello di descrivere questi metodi in modo altamente accessibile, in modo che le procedure possano essere eseguite con successo nei laboratori di ricerca, anche solo con una configurazione di base della biologia cellulare.
Introduzione
La motilità è una caratteristica essenziale di cellule vive. La migrazione cellulare è coinvolto nella concezione della vita, lo sviluppo embrionale, la risposta immunitaria, e molti processi patologici quali metastasi del cancro e l'infiammazione 1-9. Pertanto, i metodi per lo studio delle cellule comportamento migratorio sono strumenti di ricerca molto utili per una vasta gamma di discipline nelle scienze biomediche, biologia, bioingegneria, e campi correlati.
Lo studio della migrazione cellulare nella ricerca sul cancro è di particolare interesse come la principale causa di morte nei pazienti affetti da cancro è correlat....
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Protocollo
1. Cella Cultura ferita Chiusura Assay
- Staccare le cellule dalla piastra di coltura tissutale con 0,25% di soluzione di tripsina-EDTA. Cellule pellet in un tubo da 15 ml di centrifugazione, aspirare il surnatante e risospendere le cellule in coltura. Piatto il numero appropriato di cellule in una piastra da 6 pozzetti per il 100% di confluenza in 24 ore.
Nota: Le prove possono essere necessari per determinare il tempo e il numero di cellule per raggiungere il 100% di confluenza causa del tipo di cellula e la dimensione del pozzo utilizzato (ad esempio, 1 x 10 6 cellule di melanoma B16F10 vengono seminate in un pozzetto di una 6 pozzetti 2....
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Risultati
La chiusura dosaggio ferita e il saggio migrazione delle cellule transwell qui presentata sono stati eseguiti utilizzando cellule di topo B16F10 melanoma come sistema modello. Nel saggio chiusura della ferita, B16F10 cellule sono state seminate in una piastra di coltura tissutale da 6 pozzetti e coltivate al 100% di confluenza in 24 ore. Una ferita di circa 700 micron di larghezza è stata generata utilizzando un puntale e la chiusura della ferita (la migrazione cellulare) è stato registrato utilizzando la microscopia ti.......
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Discussione
La migrazione cellulare è un aspetto importante studiare nella ricerca sul cancro e può anche essere applicato a studi guarigione sviluppo, immunologici e ferita. La coltura cellulare ferita saggio di chiusura e la migrazione delle cellule transwell e invasione saggi di rivelare le informazioni dettagliate dei comportamenti migratori delle cellule e può essere utilizzato per studiare i meccanismi molecolari della migrazione cellulare 1,2,10,14. Il nostro studio ha utilizzato questi saggi di motilità cellulare.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano Mike Myles, Sam Saunders e C.W. Elton dell'ECU Multimedia & Technology Services per aver fornito assistenza nella produzione video. Ringraziamo il sostegno finanziario del North Carolina Biotechnology Center, Golfers against Cancer, Brody Brothers Endowment Fund, American Heart Association e ECU/Vidant Cancer Research and Education Fund (LVY e M.J.R.).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s modificato Eagle medium (DMEM) | Gibco | 11995-073 | |
| Siero fetale bovino (FBS) | Gemini | 100106 | |
| Albumina sierica bovina (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | |
| Tripsina EDTA 0,25% | Gibco | 25200-056 | |
| Dulbecco' soluzione salina tamponata con fosfato (DPBS) | Gibco | 14190-250 | |
| Crystal violet | Sigma | C0775-100G | Disciolto in acqua allo 0,2% |
| Tampone di dissociazione cellulare | Gibco | 13151-014 | |
| Incubatore per colture cellulari | Thermo Fisher Scientific | Model # 3145 | |
| Cappa di biosicurezza SterilGARD | The Baker Company, Inc. | Modello # VBM-600 | |
| EVOS Fl microscopio invertito | Thermo Fisher Scientific | Modello # AMF-4302-US | |
| Piastra per coltura tissutale | Becton Dickinson | 353046 | Il numero di catalogo varia a seconda del tipo di piastra di coltura |
| Inserto Corning Transwell | Fisher | 07-200-150 | Il numero di catalogo varia a seconda della dimensione dei pori della membrana |
Riferimenti
- Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor. Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).
- Hall, A. The cytoskeleton and cancer. Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).
- Lau....
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Ristampe e permessi
