Articolo metodologico
Plasticità neuronale è una caratteristica del tratto gastrointestinale (GI) sempre più riconosciuta, ma non sufficientemente compreso. Qui, nell'esempio di disturbi pancreatici umani, presentiamo un neuroplasticity saggio in vitro per lo studio della plasticità neuronale nel tratto GI a livello sia morfologica e funzionale.
Neuroplasticità è una caratteristica intrinseca del sistema e gastrointestinale (GI) innervazione nervoso enterico in condizioni patologiche. Tuttavia, il ruolo fisiopatologico delle neuroplasticità nei disturbi gastrointestinali rimane sconosciuto. Nuovi modelli sperimentali che consentono la simulazione e la modulazione di GI neuroplasticità possono consentire maggiore apprezzamento per il contributo della neuroplasticità in particolare le malattie gastrointestinali come il cancro del pancreas (PCA) e pancreatite cronica (CP). Qui vi presentiamo un protocollo per la simulazione della neuroplasticità del pancreas in condizioni in vitro utilizzando neonato gangli delle radici dorsali di ratto (DRG) e plesso mioenterico (MP) neuroni. Questo approccio dual-neurone permette non solo il controllo di entrambi neuroplasticità organo intrinseca ed estrinseca-, ma rappresenta anche un valido strumento per valutare la morfologia neuronale e gliale e di elettrofisiologia. Inoltre, consente la modulazione funzionale dei contenuti del microambiente forniti per studiare la loro IMPACt sulla neuroplasticità. Una volta stabilito, il presente saggio neuroplasticity porta il potenziale di essere applicabile allo studio della neuroplasticità in qualsiasi organo GI.
Alterazioni nei gastrointestinale (GI) morfologia del nervo e la densità hanno catturato l'attenzione di gastroenterologi e patologi per molto tempo, ma la loro rilevanza per la fisiopatologia delle malattie gastrointestinali rimane sconosciuta 1-3. Infatti, alcuni disturbi gastrointestinali molto comuni come la gastrite, esofagite da reflusso, colite, diverticolite e appendicite sono associati ad un aumento della densità innervazione nelle aree di tessuto infiammato 1. Tuttavia, nessuna vera attenzione è stata finora versati ai meccanismi e significato della neuroplasticità nel tratto GI. Sei nervi GI morfologicamente alterati differiscono ....
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Tutte le procedure sperimentali animali nel protocollo seguono le linee guida per la cura degli animali della Technische Universität München, Germania.
1. Media / Estratto di preparazione
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Neuroplasticità morfologica
Nella fascia di età indicata di ratti neonati (P2-12) e le densità di semina, MP e DRG neuroni già costruiscono reti neuronali dense dopo 48 ore (Figura 2A). Confronto di densità neurite tra neuroni coltivati in CaP, CP, e estratti NP rivela maggiore densità neuriti dei neuroni DRG PCA o estratti CP rispetto estratti NP (Figura 2A) 5. Abbiamo particolarmente preferiamo i neuroni MP per misure su singoli neuro.......
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Il presente protocollo ha lo scopo di illustrare la metodologia alla base del pancreas test neuroplasticità in vitro che è stato sviluppato recentemente dal nostro gruppo per studiare i meccanismi di neuroplasticità in PCa e CP 5. Il protocollo prevede una procedura in tre giorni, che può essere facilmente applicato una volta l'artista ha maturato un'esperienza sufficiente per l'isolamento e la cultura del DRG e MP neuroni. Inoltre, esso rappresenta un valido strumento per studiare la rea.......
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Gli autori non hanno interessi in gioco e senza informazioni finanziarie.
Tutti gli autori hanno contribuito alla creazione e la validazione del test presentato e al progetto del manoscritto.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Bromidrato di poli-D-lisina | Sigma-Aldrich | P1149 | |
| Ornitina/laminina | Sigma-Aldrich | P2533/L4544 | |
| 13 mm Vetrini coprioggetti | Merck | Per l'uso in piastre a 24 pozzetti | |
| Dismembranator S | Sartorius | ||
| Anticorpo anti-beta-III-tubulina | Millipore | MAB1637 | concentrazione 1:200 |
| Anticorpo anti-GFAP | DAKO | M0761 | Concentrazione 1:400 |
| Tampone RIPA + inibitore | Qualsiasi fornitore | ||
| Mezzo neurobasale | Gibco/Life Sciences | 21103-049 | |
| Integratore di B-27 | Gibco/Life Sciences | 17504044 | La qualità del B-27 è nota per dipendere dal numero di lotto |
| Gentamicina/Metronidazolo | Qualsiasi fornitore | ||
| Minimo essenziale medium | Gibco/Life Sciences | 31095-029 | |
| Hank' s Soluzione salina bilanciata (HBSS) | Gibco/Life Sciences | 24020133 Migliora l'attività della collagenasi quando contiene Ca/Mg | |
| Collagenasi di tipo II | Worthington Biochemical | CLS-2 | Ottenere lotti con almeno 200 U/mg |
| di attività Tripsina-EDTA 0,25% | Gibco/Life Sciences | 25200056 | |
| 4% Paraformaldeide | Qualsiasi fornitore | ||
| analizza software | Olympus |
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