Streptococcus pneumoniae è il patogeno principale che causa una grave polmonite acquisita in comunità e responsabile per oltre 2 milioni di decessi in tutto il mondo. L'impatto dei fattori batterici implicati in palestra o virulenza può essere monitorato in tempo reale in un mouse polmonite o batteriemia modello acuta con batteri bioluminescenti.
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Articolo metodologico
A seguito in tempo reale l'impatto dei fattori di virulenza pneumococco in un acuto mouse Polmonite modello tramite batteri bioluminescenti
In questo articolo
Sommario
Abstract
La polmonite è uno dei principali problemi sanitari in via di sviluppo e paesi industrializzati ed è associata ad una considerevole morbilità e mortalità. Nonostante i progressi nella conoscenza di questa malattia, la disponibilità di unità di terapia intensiva (ICU), e l'uso di agenti antimicrobici potenti e vaccini efficaci, i tassi di mortalità restano elevati 1. Streptococcus pneumoniae è il patogeno principale della polmonite acquisita in comunità (CAP) e una delle cause più comuni di batteriemia nell'uomo. Questo patogeno è dotato di un armamentario di adesine-superficie a vista e fattori di virulenza che contribuiscono alla polmonite e malattia pneumococcica invasiva (IPD). La valutazione del ruolo in vivo di fattori di forma fisica o di virulenza batterica è della massima importanza per svelare S. meccanismi di patogenicità pneumoniae. Modelli murini di polmonite, batteriemia e meningite vengono utilizzati per determinare l'impatto dei fattori pneumococco a difrenti fasi dell'infezione. Qui si descrive un protocollo per il monitoraggio in tempo reale diffusione pneumococcica nei topi dopo intranasale o infezioni intraperitoneale con batteri bioluminescenti. I risultati mostrano la moltiplicazione e la diffusione di pneumococchi nel tratto respiratorio inferiore e sangue, che può essere visualizzata e valutata utilizzando un sistema di imaging e il software di analisi di accompagnamento.
Introduzione
Infezioni del tratto respiratorio causate da virus o batteri rimangono uno dei problemi acquisite in comunità o cliniche più comuni in tutto il mondo provocando circa un terzo di tutte le morti in tutto il mondo. Le specie batteriche chiave sono Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae 2. Tuttavia, queste specie batteriche sono normalmente costituenti comuni delle naturali flora del tratto respiratorio. Così carrozza batterica è anche di certo rischio di malattia invasiva e seconda dello stato immunitario o predisposizioni degli individui. La colonizzazione asintomatica è attivato per infezioni invasive. Streptococcus pneumon....
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Protocollo
Gli esperimenti di infezione animale qui descritte devono essere eseguite in stretta conformità con la (ad esempio diritto europeo della Sanità della Federazione di animali da laboratorio Science Associations (FELASA)) locale e internazionale, linee guida e regolamenti per l'uso di animali vertebrati. Gli esperimenti devono essere approvati dal consiglio etico locale e Istituzionale Comitato Animal Care. Tutti gli esperimenti con S. pneumoniae in laboratorio o le infezioni animali sono condotti in una classe II biosicurezza Cabinet.
1. Preparazione della infettiva stock di Bioluminescent Pneumocococi
- Prepa....
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Risultati
L'acquisizione e l'assorbimento della metionina è di importanza centrale per pneumococchi per mantenere la forma fisica nella loro nicchia ospitante 32,33. La metionina ABC trasportatore lipoproteina è codificato in D39 dal DOCUP 0151 _ gene (TIGR4: sp_0149) e nominato MetQ 32. Pneumococchi ulteriormente produrre enzimi della biosintesi della metionina (D39: Spd_0510 - Spd_0511; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, mete e MetF). La mancanza di metionina in un mezzo chimicamente defini.......
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Discussione
Tutti gli esperimenti condotti su animali devono essere approvati dalle autorità locali e di etica commissioni. In esperimenti di infezione in vivo la carica batterica nelle varie nicchie che ospitano animali infetti deve essere determinato in vari momenti dopo l'infezione. In queste condizioni sperimentali, gli animali devono essere sacrificati prima che l'isolamento dei batteri dal sangue, rinofaringe, il lavaggio bronchoalvelar o organi come i polmoni, milza e cervello. Per calcolare il numero .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
La ricerca in laboratorio è stata sostenuta da sovvenzioni da parte del Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, DFG HA 3125/4-2) e il Ministero federale dell'Istruzione e della Ricerca (BMBF) Genomica Infezione Medical (FKZ 0315828A) a SH.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Todd Hewitt brodo | Carl Roth, Karlsruhe, Germania | X936.1 | |
| Estratto di lievito | Carl Roth, Karlsruhe, Germania | 2363.2 | |
| Piastre di agar sanguigno | Oxoid, Wesel, Germania | PB5039A | |
| Kanamycin | Carl Roth, Karlsruhe, Germania | T832.2 | |
| Eritromicina | Sigma-Aldrich,Taufkirchen, Germania | E6376 | |
| Siero fetale bovino (FBS) | PAA Laboratories, Coelbe, Germania | A11-151 | |
| Topi CD-1, femmina | Charles River, Sulzfeld, Germania | CD1SIFE06W08W | topi CD-1 femmine, da sei a otto settimane di età |
| Ketamin 500 mg, soluzione iniettabile Curamed | Schwabe-Curamed, Karlsruhe, Germania | . | |
| Rompun 2%, soluzione iniettabile | Bayer Animal Health, Monheim, Germania | ||
| BD Plastipak Siringhe da 1 ml | Becton Dickinson, Heidelberg, Germania | 300015 | siringhe Luer-Lok sterili con ago |
| Punte per caricatore di gel | PeqLab | 81-13790 | Mµ ltiFlex Tips |
| Ialuronidasi | Sigma-Aldrich | H3884-100mg | Ialuronidasi Tipo IV-S da test bovino |
| Ossigeno | Aria Liquida, Dü sseldorf, Germania | M1001L50R2A001 | |
| Isoflurano | Baxter, Unterschleiß heim, Germania | ||
| pGEM-T Easy | Promega, Mannheim, Germania | ||
| Oligonucleotidi | Eurofins MWG, Ebersberg, Germania | ||
| Kit Qiaprep Spin Midiprep | Qiagen, Hilden, Germania | 27104 | |
| Kit di purificazione del DNA per PCR | Qiagen, Hilden, Germania | 28106 | |
| Living Image 4.1 software | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germania | ||
| Pinza per sistema di anestesia a gas XGI-8 | Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germania | ||
| Sistema di imaging a spettro IVIS | Calibro Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germania | ||
| Biofotometro | Eppendorf AG, Amburgo, Germania |
Riferimenti
- Niederman, M. S., et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).
- WHO,
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Ristampe e permessi
