Modelli di spontanea carcinoma renale (RCC) progressione della malattia metastatica possono essere usate per valutare i trattamenti in un ambiente clinicamente rilevante. Questo protocollo dimostra procedure diverse per l'impianto ortotopico di cellule tumorali del rene, la corretta nefrectomia, e, infine, delinea una guida necroscopico per il punteggio visiva e bioluminescente di carico metastatico e localizzazione.
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Articolo metodologico
Modellazione di Carcinoma renale metastatico spontanea (MRCC) in topi dopo nefrectomia
In questo articolo
Sommario
Abstract
Una delle sfide chiave per una migliore sperimentazione di nuove terapie sperimentali in carcinoma a cellule renali (RCC) è lo sviluppo di modelli che ricapitolano fedelmente la progressione della malattia metastatica-precoce e tardiva fase. Modelli di tumore impianto tipici utilizzano ectopica o ortotopico impianto tumore primario, ma pochi comprendono la malattia metastatica spontanea sistemica che imita la clinica. Questo protocollo descrive i passaggi chiave per sviluppare la progressione della malattia RCC mette in scena simile ai pazienti. In primo luogo, esso utilizza un mouse linea cellulare tumorale altamente metastatico in un modello singenici visualizzare ortotopico impianto delle cellule tumorali. I metodi includono l'impianto superficiale e interna nello spazio sub-capsulare con celle combinate con Matrigel per evitare perdite e la diffusione precoce. Accanto descrive le procedure per escissione del tumore-cuscinetto rene (nefrectomia), con la critica cure pre-e post-chirurgica del mouse. Infine, si delinea i passi necessari per monitorare e valutaremicro-e macro-progressione della malattia metastatica, tra cui l'imaging bioluminescente e fornisce una guida dettagliata necroscopia visiva di segnare distribuzione malattia sistemica. L'obiettivo di questa descrizione protocollo è facilitare l'uso diffuso di clinicamente rilevanti modelli RCC metastatico a migliorare il valore predittivo di futuri test terapeutico.
Introduzione
La principale causa di mortalità nei pazienti con carcinoma a cellule renali (RCC) è la malattia metastatica sistemico che si verifica in genere dopo la rimozione chirurgica di un tumore primario crescente nel rene. Tuttavia, ben pochi modelli tumorali preclinici che valutano terapeutica sperimentale nei topi includono la malattia metastatica, e ancora meno fedelmente ricapitolano le fasi cliniche della crescita localizzata, la chirurgia, e spontaneo iniziazione micro-metastasi e la progressione 1-3. Questo divario nei test è diventato sempre più importante nella valutazione di nuove terapie come a volte sorprendenti effetti anti-tumorali visto in modelli ....
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Protocollo
1. Ortotopico Rene Tumore impianto
- Cell Culture
- Prima di impianto ortotopico, crescere le cellule del mouse Renca LUC come un monostrato al 75% di confluenza.
- Seguendo tripsinizzazione e risospensione in 5% FBS contenente supporti, centrifugare le cellule a 1.000 rpm, 4 ° C per 5 minuti, ripetendo 3 volte per lavare in PBS. Poi sospendere nuovamente le cellule in mezzi privi di siero ad una concentrazione di 5 x 10 4 Renca LUC / 5 dei media privo di siero microlitri.
Nota: A seconda della variante o linea cellulare utilizzata, le cellule possono essere risospese in un rapporto 1:1 di matrigel e....
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Risultati
La figura 1A mostra uno schema che illustra le procedure descritte in questa sintesi protocollo. Diversi fattori importanti devono essere considerati per ogni passaggio. Ad esempio, nel passo 1 mostra due metodi per sub-capsulare impianto del tumore cellule nel rene. Le cellule tumorali possono essere impiantati nello spazio sub-capsulare con un piccolo bianco-bolla confermando il posizionamento localizzata di cellule con perdite evitate grazie attenta rimozione dell'ago e tampone eccesso fuoriuscit.......
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Discussione
Lo scopo di questo protocollo è quello di valutare metastasi spontanea clinicamente rilevante utilizzando un modello di topo tumore singenici per descrivere le tecniche di impianto / resezione. Attualmente, la maggior parte degli studi preclinici che valutano nuove terapie sperimentali non comprendono lo studio della malattia metastatica e solo pochi ricapitola le fasi di crescita del tumore primario, la resezione chirurgica, e l'eventuale spontanea diffusione metastatica. Ad oggi, modelli murini geneticamente (GEMM.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Siamo grati al laboratorio del Dr. Robert S. Kerbel (Università di Toronto, Sunnybrook Research Institute, Toronto, Canada) per l'assistenza tecnica e la competenza nello sviluppo di questa procedura. Vorremmo anche ringraziare il Dott. Sandra Sexton e il Roswell Park Cancer Institute Dipartimento di Laboratorio risorse animali. Questo lavoro è stato sostenuto da un premio da Roswell Park Alliance Foundation (a JMLE).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DMEM-glucosio alto con Pyr. E L-Glutammina | Corning | 10-013-CV | |
| FBS | Invitrogen | 10437-028 | |
| 0,25% Tripsina EDTA | Corning | 25-053-CL | |
| 1x DPBS senza Calcio & Magnesio | Corning | 21-031-CV | |
| Matrigel | BD Biosciences | 354234 | deve essere tenuto sul ghiaccio |
| Unguento oftalmico lubrificante per lacrime artificiali | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Tagliabordi tascabile per animali domestici | Braintree scientific | CLP9931B | |
| Tampone imbevuto di alcol | VWR | 326895 | |
| Tampone per soluzione Betadine | VWR | 67618-152-01 | |
| MICRO DISSEZIONE sissors dritto, smussato - lame da 25 mm - 4,5" | Southpointe chirurgica | RS-5982 | |
| Pinze per iris, seghettate, curve, lunghe 10 cm | Kent scientific | INS15915 | bisogno di due di queste |
| 10 µ l Siringa Hamilton | Hamilton | 7635-01 | |
| 30 G, 45 gradi, ago RN | Hamilton | 7803-07 | |
| Appicatore sterile con punta in cotone | VWR | 10805-144 | |
| Kit cauterico ad alta temperatura | Kent scientific | INS500392 | |
| 5-0 rivestito Vicryl, ago da taglio convenzionale | Ethicon | J834 | |
| Reflex clip per clip da 7 mm | Kent scientific | INS500343 | |
| Clip per reflex, 7 mm, non sterili | Kent scientific | INS500344 | |
| Pinza per la rimozione, lunga 12 cm | Kent scientific | INS500347 | |
| 0,9% Cloruro di sodio | Baxter Healthcare | 2B1322 | |
| Buprenorfina 0,01 mg/ml | |||
| 25 G 5/8" ago | VWR | BD305122 | |
| 1 ml siringa senza ago | VWR | BD309659 | |
| D-luciferina | oro Bio tecnologia | LUCK-1G |
Riferimenti
- Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics. Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).
- Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H.
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Ristampe e permessi
