La malattia di Parkinson è una malattia neurodegenerativa che deriva dalla degenerazione dei neuroni dopaminergici nel sistema nervoso centrale, causando difetti di locomozione. Modelli rotenone malattia di Parkinson in Drosophila. Questo documento delinea due saggi che caratterizzano le carenze locomozione sia spontanee e spaventare-indotte causate da rotenone.
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Articolo metodologico
Metodi di caratterizzare spontanea e startle indotta Locomozione in un rotenone-indotta malattia di Parkinson Modello di
In questo articolo
Sommario
Abstract
La malattia di Parkinson è una malattia neurodegenerativa che deriva dalla degenerazione dei neuroni dopaminergici nel sistema nervoso centrale, soprattutto nella substantia nigra. La malattia provoca deficit motori, che presentano come rigidità, tremori e demenza negli esseri umani. Rotenone è un insetticida che provoca il danno ossidativo inibendo la funzione della catena di trasporto degli elettroni nei mitocondri. Viene anche usato per modellare la malattia di Parkinson in Drosophila. Le mosche hanno una intrinseca geotactic risposta negativa, che obbliga loro di salire verso l'alto dopo essere stato sorpreso. È stato stabilito che rotenone causa di mortalità e di locomozione difetti iniziali che inficiano la capacità delle mosche 'a salire dopo che sono stati sfruttati verso il basso. Tuttavia, l'effetto di rotenone sul movimento spontaneo non è ben documentata. Questo studio delinea due test di throughput sensibili, riproducibili, e alti per caratterizzare carenze rotenone-indottalocomozione e locomozione spontanea-lungo termine a breve termine startle-indotta in Drosophila. Questi test possono essere adattati facilmente per caratterizzare altri modelli di Drosophila di difetti di locomozione e l'efficacia degli agenti terapeutici.
Introduzione
Carenze Locomotion sono un sintomo principale della malattia di Parkinson e sono in gran parte causati dal deterioramento dei neuroni dopaminergici della substantia nigra 1. Rotenone è un insetticida chetonici che è stata ampiamente studiata per modellare deficit motori del Parkinson in Drosophila 2-6. Rotenone provoca danno ossidativo bloccando la via della fosforilazione ossidativa, che provoca in ultima analisi, la morte cellulare 7. Neuroni dopaminergici sono più inclini alla tossicità rotenone, rendendo gli effetti della chimica basata principalmente motore 2,7. Per indurre i sintomi della malattia di Parkinso....
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Protocollo
1 Drosophila Startle indotta Assay Locomotion
- Trattamento di droga
- Sedare immobilizzare il numero desiderato (circa 8-12) di 1-3 giorno-vecchio maschio vola con CO 2 e trasportarli a fiale contenenti il cibo-farmaco integrato. Nota: Un altro anestetico ad esempio, etere o ghiaccio possono essere usati per sedare le mosche per consentire il conteggio e la manipolazione.
- Consenti mosche per recuperare da sedazione per 20 minuti (o fino al recupero) con la fiala in posizione orizzontale (per evitare di rimanere bloccati mosche sul cibo) e quindi posizionare il flacone in posizione verticale in un buio 12 ore, 12....
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Risultati
Drosophila Startle indotta Assay Locomotion
Di tipo selvatico, Canton-S, mosche mostrato una robusta risposta geotactic negativa con solo circa il 88% e il 5% di mosche nelle sezioni superiore e inferiore, rispettivamente, dell'apparato doppio flaconcino dopo 30 sec (Figura 1). Le mosche esposte a 125 mM e 250 mM rotenone per 3 giorni hanno mostrato una lieve diminuzione del numero di mosche nella sezione superiore e leggero aumento del.......
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Discussione
In questo studio, descriviamo due procedure di misurazione sia locomozione spontanea a lungo termine e di locomozione startle indotta a breve termine in un rotenone indotta Drosophila modello della malattia di Parkinson. Si può anche misurare queste caratteristiche locomozione in mosche esposti ad altri agenti farmacologici noti per modello di malattia di Parkinson, per esempio paraquat 14, modelli genetici della malattia di Parkinson ad esempio, alfa-sinucleina mutanti 15,
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare Qiuli Wang, Language Resource Center, Colby College, per l'assistenza tecnica con l'elaborazione video e Eric Thomas, dipartimento di musica, Colby College, per fornire la musica di sottofondo. Questo progetto è stato sostenuto da sovvenzioni dal Centro Nazionale per la Ricerca Risorse, INBRE (P20RR016463-12), l'Istituto Nazionale per la General Medical Sciences (P20 GM103423-12), i cittadini Institutes of Health and Science Division di Grant, Colby College (STA). JL e LWM sono stati supportati da sovvenzioni dal Fondo Estate Scholar, Colby College.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Fiale strette standard | Genesee Scientific | 32-120 | |
| Rotenone | Sigma | R8875 | Conservare in congelatore, preparare fresco per ogni esperimento |
| Dimetilsolfossido (DMSO) | Sigma | D8418 | Solvente per rotenone |
| Drosophila istantanea media | Carolina Biological | Formula 4-24 | |
| Monitor dell'attività della Drosophila (DAM) | Tricinetica | DAM2 | trikinetics.com |
| Tubi DAM | tricinetici | 5 X 65 mm | |
| Ricetta per Rotenone + cibo (dose 125 mM) | Preparare 62,5 mM di soluzione madre di rotenone in DMSO sciogliendo 25 mg di rotenone in 1 ml di DMSO; Per una dose di 125 mM, aggiungere 10 mM di brodo di rotenone in DMSO a 5 ml di acqua. |
Riferimenti
- Olanow, C. W., Tatton, W. G. Etiology and pathogenesis of Parkinson's disease. Annual review of neuroscience. 22, 123-144 (1999).
- Coulom, H., Birman, S. Chronic exposure to rotenone mod....
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Ristampe e permessi
