L'accessorio bulbo olfattivo mouse (AOB) è stato difficile studiare nel contesto della codifica sensoriale. Qui, dimostriamo una dissezione che produce un vivo preparazione franco in cui i neuroni AOB rimangono funzionalmente collegati agli ingressi periferici, facilitando la ricerca di elaborazione delle informazioni dei feromoni mouse e cairomoni.
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Articolo metodologico
Ex Vivo preparati della lampadina vomeronasale Organo e accessori olfattivo intatto
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il sistema olfattivo accessorio mouse (AOS) è un percorso sensoriale specializzato per rilevare gli odori volatili sociali, feromoni, e cairomoni. Il primo circuito neurale nel pathway AOS, chiamato il bulbo olfattivo accessorio (AOB), svolge un ruolo importante nello stabilire comportamenti sesso tipico come l'aggressività territoriale e accoppiamento. Questo piccolo circuito (<1 mm 3) possiede la capacità di distinguere gli stati comportamentali unici, come il sesso, tensione, e lo stress da spunti chemiosensoriali nelle secrezioni ed escrezioni di conspecifici. Mentre l'organizzazione compatta di questo sistema offre opportunità uniche per la registrazione da grandi porzioni del circuito contemporaneamente, ricerca di elaborazione sensoriale nel AOB rimane impegnativo, in gran parte dovuto alla sua posizione svantaggiosa sperimentalmente nel cervello. Qui, dimostriamo una dissezione più stadi che rimuove il AOB intatto all'interno di un singolo emisfero del mouse cranio anteriore, lasciando collegareioni ad entrambi i vomeronasali periferica neuroni sensoriali (VSNs) e circuiti neuronali locali intatti. La procedura espone la superficie AOB dirigere ispezione visiva, facilitando elettrofisiologica e registrazioni ottiche da elementi circuitali AOB in assenza di anestetici. Dopo l'inserimento di una cannula sottile nell'organo vomeronasale (VNO), che ospita le VSNs, si può esporre direttamente la periferia agli odori sociali e feromoni durante la registrazione di attività a valle nella AOB. Questa procedura consente indagini controllate in AOS elaborazione delle informazioni, che possono far luce sui meccanismi che legano l'esposizione feromone a cambiamenti nel comportamento.
Introduzione
Elaborazione sensoriale nel cervello dei mammiferi si estende in genere più circuiti neuronali reciprocamente collegate, ciascuna delle quali estrae particolari caratteristiche da input sensoriali. In percorsi sensoriali, elaborazione delle informazioni precoce è di vitale importanza per la percezione e il comportamento normale. Nel sistema olfattivo accessorio (AOS), il bulbo olfattivo accessorio (AOB) è il principale circuito neurale che collega la periferia sensoriale alle strutture a valle che determinano l'equilibrio ormonale 1,2, aggressività 3, e l'eccitazione 4. Come tale, l'elaborazione delle informazioni all'....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sono stati condotti secondo protocolli approvati dal Sud Institutional Animal Care ed uso commissione UT, e sono stati scelti in modo da minimizzare lo stress, il disagio e il dolore provato dagli animali sperimentali.
1. Dissezione Camera
Una camera di dissezione costume e piccolo, sottile tavola di plastica sono necessari per ottenere i migliori risultati (Figura 1). Costruire o ottenere tale camera in anticipo di tentare questo protocollo.
2. Dissezione Solutions
- Preparare 1 L di liquido cerebrospinale artificiale standard (aCSF) p....
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Risultati
Raggiungere il successo con questa preparazione richiede pratica estesa, e ha diverse fasi in cui si può fallire. Ci si dovrebbe aspettare da richiedere molti tentativi prima di raggiungere il successo. È richiesta la camera di dissezione personalizzata per il completamento di questo protocollo, e deve essere ottenuto prima di avviare le fasi successive della dissezione. Il disegno della camera illustrato nella figura 1 è sufficiente per questo scopo, e può essere realizzato in materia plastica relativa.......
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Discussione
L'ex vivo di preparazione VNO-AOB descritto in questo protocollo è una valida alternativa alla anestetizzato in vivo 5-7 e acuta fetta vivo 17 esperimenti di funzione AOB. A differenza acuti esperimenti fetta AOB, che espongono anche elementi circuitali per le registrazioni elettrofisiologiche e ottici, questa preparazione conserva tutte le afferenze sensoriali e collegamenti intra-AOB. Anche se questo può anche essere detto di anestetizzato negli approcci vivo, la pr.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno significativi conflitti di interesse da dichiarare.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata sostenuta da R00 DC011780 (JPM: NINDS, NIH), F30 DC011673 (GFH: NINDS, NIH) e fondi di avvio UT Southwestern (JPM).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Forbici dritte Strumenti per | le scienze | 14002-14 | |
| Forbici per | 14060-10 Forbici per le scienze 14060-10 | ||
| per | scienze 14061-10 | ||
| Pinze Adson | Strumenti per le scienze 11006-12 | ||
| # 3 Manico per bisturi | Strumenti per le scienze 10003-12 | ||
| #11 Lame per bisturi | Fisher Scientific | 3120030 | |
| Lame per rasoio dritte in acciaio al carbonio | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Piastra di Petri da 35 mm | Fisher Scientific | 08-772-21 | |
| Camera di dissezione | personalizzata | N/A | Vedi Figura 1 |
| Tavola di plastica Delrin 0,6 cm x 1,5 cm x 0,1 cm | Custom | N/A | |
| Dow Corning Silicone Grasso sottovuoto | Fisher Scientific | 146355D | |
| #5 Pinze, Studente | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| #5 Pinze, Biologie Tip | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| #5 Pinze, Studente | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Vannas Spring Forbici | Fine Science Strumenti | 15000-08 | |
| 1/16" Maschio Luer | Cole-Parmer | EW-45505-00 | |
| 1/16" Tubo | Fisher Scientific | 14-171-129 | |
| Due tonnellate epossidica | Grainger | 5E157 | |
| ValveBank Kit di perfusione pressurizzata | AutoMate Scientific | 09-16 | |
| ValveLink controller digitale/manuale | AutoMate Scientific | 01-18 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | vari | |
| KCl | Sigma-Aldrich | vari | |
| CaCl2 diidrato | Sigma-Aldrich | vari | |
| MgCl2 esaidrato | Sigma-Aldrich | vari | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | vari | |
| NaH2PO4 | Sigma-Aldrich | various | |
| myo-inositolo | Sigma-Aldrich | vari | |
| Na-piruvato | Sigma-Aldrich | vari | |
| Na-ascorbato | Sigma-Aldrich | vari | |
| HEPES buffer | Sigma-Aldrich | vari | |
| Glucosio | Sigma-Aldrich | vari |
Riferimenti
- Bruce, H. M. An exteroceptive block to pregnancy in the mouse. Nature. 184, 105(1959).
- Bellringer, J. F., Pratt, H. P., Keverne, E. B. Involvement of the vomeronasal organ and prolactin in pheromonal induction of delayed implantation in mice. J Reprod Fertil....
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Ristampe e permessi
