Piccole tecniche di imaging consentono di animali esami diagnostici seriali e interventi terapeutici in vivo. Recentemente, l'ambito di applicazione è notevolmente ampliato e comprende attualmente la valutazione dello sviluppo del tumore del colon, la guarigione delle ferite e il monitoraggio di infiammazione. Questo protocollo illustra le diverse potenziali applicazioni di endoscopia murino.
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Articolo metodologico
Murino Endoscopia per In Vivo Guarigione Imaging Multimodale di Cancerogenesi e valutazione della ferita intestinale e infiammazione
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Modelli murini sono ampiamente utilizzati per studiare la patogenesi delle malattie umane e di valutare le procedure diagnostiche e interventi terapeutici preclinico. Tuttavia, valida valutazione di alterazioni patologiche spesso richiede l'analisi istologica, e quando eseguita ex vivo, richiede la morte dell'animale. Quindi in impostazioni sperimentali convenzionali, intra-individuali esami di follow-up sono raramente possibili. Pertanto, lo sviluppo di endoscopia murino in topi vivi consente agli investigatori per la prima volta sia per visualizzare direttamente la mucosa gastrointestinale e anche ripetere la procedura per monitorare alterazioni. Esistono numerose applicazioni per in vivo murino endoscopia, tra cui lo studio infiammazione intestinale o la guarigione delle ferite, ottenendo biopsie della mucosa più volte, e per amministrare localmente agenti diagnostici o terapeutici che utilizzano cateteri di iniezione in miniatura. Più di recente, l'imaging molecolare ha esteso mo diagnostica per immaginidalities che permettono il rilevamento specifico di molecole bersaglio distinti utilizzando photoprobes specifiche. In conclusione, l'endoscopia murino è emerso come una nuova tecnologia all'avanguardia per la sperimentazione diagnostica imaging in vivo e può avere un impatto significativo sulla ricerca preclinica in vari campi.
Introduzione
Modelli animali hanno notevolmente arricchito la nostra comprensione di numerose patologie intestinali. Il topo di laboratorio (Mus musculus) è emerso come un modello animale privilegiata nella ricerca biomedica per la sua abbondante informazione genetica e genomica ed è prontamente disponibile in transgenici e knockout ceppi. Oltre a migliorare la comprensione della malattia patogenesi, modelli animali sono soprattutto utilizzati per testare farmaci candidati, nonché interventi diagnostici o terapeutici preclinici. Tuttavia, nonostante la varietà di modelli murini che mimano la malattia umana, molte opzioni diagnostiche e interventistiche che vengono abitua....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) in base alla legge sulla protezione degli animali tedesca.
1. Materiali e setup sperimentale
- Cura degli animali
- Utilizzare femminile o topi maschi di qualsiasi ceppo di peso da 20 a 25 g ed ospitarli in base alla legislazione locale la cura degli animali.
- Alimentare i topi con chow speciale per roditori e applicare chow senza erba medica almeno tre giorni prima di fluorescenza esami per ridurre al minimo endoluminale auto-fluorescenza.
- Fornire autoclavato bere acqua ad libitum.<....
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Risultati
Nel monitoraggio in vivo di intestinale guarigione delle ferite
Durante l'endoscopia di routine, le ferite della mucosa sono state indotte meccanicamente da pinze in miniatura biopsia con un diametro di 3 francese (pari a 1 mm; Figura 1A). Successivamente, la guarigione delle ferite è stata monitorata mediante esami endoscopici quotidiani e quantificato dalla misura della ferita residua utilizzando software di editing di immagini, ad esempio, ImageJ
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Discussione
Epiteliale guarigione delle ferite è un processo continuo. Esfoliazione fisiologico continuo delle cellule superficiali all'interno della mucosa gastrointestinale si verifica che richiedono la rigenerazione frequente delle cellule epiteliali 16. Di conseguenza, la guarigione della ferita ha un enorme impatto su diverse patologie tra cui le ulcere gastrointestinali e perdita anastomotica 17 18. La valutazione di sfondo molecolare così come potenziali farmaci candidati per stimolare la guarigione.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo Sonja Dufentester e Elke Weber per l'assistenza tecnica di esperti. Ringraziamo Faekah Gohar per la correzione delle bozze del manoscritto e Stefan Brückner per il supporto dell'informatica medica. Questo lavoro è stato sostenuto da una sovvenzione interdisciplinare dal Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2012_A94). D. Bettenworth è stato sostenuto da una borsa di ricerca presso la Facoltà di Medicina, Westfälische Wilhelms-Universität Münster. M. Brückner è stato sostenuto da un "Gerok" posizione di rotazione della Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG SFB1009B8).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagenti | |||
| Dieta senza erba medica | Harlan Laboritories, Madison, USA | 2014 | |
| Azoxymethane (AOM) | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germania | A5486 | |
| Unguento per gli occhi Bepanthen | Bayer, Leverkusen, Germania | 80469764 | |
| Destrano solfato di sodio (DSS) | TdB Consulatancy, Uppsala, Svezia | DB001 | |
| Eosin | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germania | E 4382 | |
| Acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germania | E 9884 | |
| Falcon Tube 50 ml | BD Biosciences, Erembodegem, Belgio | 352070 | |
| Florene 100 V/V | Abbott, Wiesbaden, Germania | B506 | |
| Ematossilina | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germania | HHS32-1L | |
| Isopentano (2-metilbutano) | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germania | M32631-1L | |
| Blu di metilene | Merck, Darmstadt, Germania | 1159430025 | |
| Composto O.C.T. Tissue Tek | Sakura, Zoeterwonde, Paesi Bassi | 4583 | |
| Omnican F - canula | Braun, Melsungen, Germania | 9161502 | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato, PBS | Lonza, Verviers, Belgio | 4629 | |
| Cloruro di sodio 0,9% | Braun, Melsungen, Germania | 12211095/05/0411 | |
| Dieta standard | Altromin, Lage, Germania | 1320 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura, Leiden, Paesi Bassi | 4566 | |
| Vitro Coagulazione | R. Langenbrinck, Teningen, Germania | 04-0002 | |
| Attrezzatura | |||
| AIDA Control | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 20 096020 | |
| Filtro passa-banda | Semrock, Rochester, USA | HC 716/40 | |
| Filtro passa-banda | Semrock, Rochester, USA | HC 809/81 | |
| Pinza per biopsia, 3 Fr., 28 cm | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 61071ZJ | |
| Dell Monitor | Dell, Francoforte sul Meno, Germania | U2412Mb | |
| , 9 Fr.Karl | Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 61029D | |
| Guaina da visita, 9 Fr.Karl | Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 61029C | |
| Cavo luce in fibra ottica, 3.5 mm | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 69495NL | |
| Blu fluoresceina Sistema di filtraggio | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 20100032 | |
| Filtro barriera alla fluoresceina | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 20100033 | |
| Interruttore a pedale | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 20010430 | |
| Telescopio HOPKINS, 1,9 mm, Lunghezza 10 cm | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 1830231 | |
| SCB D-light P | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 20 133720 | |
| SCB tricam SL II | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 20 2230 20 | |
| Set di tubi strumenti VETPUMP II | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 69811 | |
| Tricam PDD PAL | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 20221037 | |
| UniVet Porta | Groppler Medizintechnik, Deggendorf, Germania | BKGM 0451 | |
| Vetpump 2 | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germania | 69321620 |
Riferimenti
- Bettenworth, D., et al. Translational 18F-FDG PET/CT imaging to monitor lesion activity in intestinal inflammation. Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 54, 748-755 (2013).
- Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J.
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Ristampe e permessi
