In questo articolo, dimostriamo un metodo standard per produrre un'occlusione embolica dell'arteria cerebrale media con coaguli di sangue omologhi (ricchi di fibrina) in un ratto adulto. Questo modello imita da vicino l'ictus ischemico umano ed è adatto per lo studio preclinico della terapia trombolitica per l'ictus ischemico.
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Articolo metodologico
Embolic occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) per l'ictus ischemico con omologhi coaguli di sangue nei ratti
In questo articolo
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Sommario
Abstract
Clinicamente, la terapia trombolitica con uso di ricombinante attivatore tissutale del plasminogeno (tPA) rimane il trattamento più efficace per ictus ischemico acuto. Tuttavia, l'uso di tPA è limitata dalla sua stretta finestra terapeutica e da un aumento del rischio di trasformazione emorragica. Vi è un urgente bisogno di sviluppare modelli di ictus adatti per lo studio di nuovi agenti trombolitici e strategie per il trattamento di ictus ischemico. Allo stato attuale, due tipi principali di modelli di ictus ischemico sono stati sviluppati in ratti e topi: intraluminale sutura MCAO e embolico MCAO. Sebbene i modelli MCAO tramite la tecnica di sutura intraluminale sono stati ampiamente utilizzati nella ricerca ictus meccanismo-driven, questi modelli di sutura non imitano la situazione clinica e non sono adatti per gli studi trombolitici. Tra questi modelli, il modello MCAO embolico imita strettamente ictus ischemico umano ed è adatto per l'indagine preclinica della terapia trombolitica. Questo modello embolico è stato sviluppato nei ratti da Overgaard et al. 1 del 1992 e caratterizzata da Zhang et al. nel 1997 2. Nonostante embolico MCAO ha acquisito sempre maggiore attenzione, ci sono problemi tecnici affrontati da molti laboratori. Per soddisfare le crescenti esigenze di ricerca trombolitica, vi presentiamo un modello altamente riproducibile di embolica MCAO nel ratto, che può sviluppare un volume di infarto prevedibile all'interno del territorio MCA. In breve, una modifica PE-50 tubo è leggermente avanzata dalla carotide esterna (ECA) nel lume della carotide interna (ICA) finché la punta del catetere raggiunge l'origine del MCA. Tramite il catetere, un singolo omologa coagulo di sangue è posto all'origine della MCA. Per identificare il successo di MCA occlusione, flusso ematico cerebrale regionale è stata monitorata, deficit neurologici e volumi di infarto sono stati misurati. Le tecniche presentate in questo documento dovrebbero aiutare gli investigatori a superare i problemi tecnici per la creazione di questo modello per la ricerca ictus. </ P>
Introduzione
L'ictus è la terza causa di morte negli Stati Uniti, ma le opzioni di trattamento per l'ictus acuto rimane limitata. Allo stato attuale, l'infusione endovenosa di ricombinante attivatore tissutale del plasminogeno (tPA) per dissolvere i coaguli di sangue è la terapia più efficace per ictus ischemico acuto. Tuttavia, l'uso di tPA è limitata dalla sua stretta finestra terapeutica e da un aumento del rischio di emorragia intracerebrale. Pertanto, è urgente un modello di ictus adatto per la ricerca trombolitica.
L'arteria cerebrale media (MCA) è l'arteria più spesso occluso in ictus negli esseri umani. Incentrato su qu....
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Protocollo
Dichiarazione Etica: Maschio adulto Sprague-Dawley (del peso di 330-380 g) sono stati utilizzati in questo protocollo. Questo protocollo è stato approvato dalla cura e l'uso degli animali Comitato Istituzionale (IACUC) presso la LSU Health Science Center-Shreveport ed è in conformità con la 'Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio "(ottava edizione, Accademia Nazionale delle Scienze 2011 ).
1 Preparazione di Modified tubo PE-50
- Tenere un 30 centimetri lungo tubo PE-50 sopra un fuoco di gas da mani, gradualmente ammorbidire il tubo. Allungare delicatamente il tubo.
- Selezionare un punto sul tubo ....
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Risultati
Laser Doppler (LDF) è stato utilizzato per monitorare rCBF durante l'induzione di ischemia cerebrale 6,7. Molti laboratori tra cui il nostro laboratorio hanno utilizzato rCBF per identificare gli animali con successo occlusione MCA, ma le soglie di riferimento variavano tra i laboratori che sono collegati al sito di misurazione. La sonda della LDF è posizionato alle 2 mm posteriormente a 5 mm lateralmente al bregma, come descritto in precedenza 6. rCBF stata monitorata a 0, 5, 15, 30, 60, 90 e 120 .......
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Discussione
In questo studio, abbiamo dimostrato un metodo standard per l'esecuzione di un modello di ictus embolico MCAO nel ratto, in cui l'origine del MCA è occlusa da un coagulo di fibrina ricco. Il principale vantaggio di questo modello è: l'occlusione del gambo di MCA con un ricco di fibrina coagulo di sangue è simile a tromboembolica ictus negli esseri umani, il modello di ictus embolico è adatto per l'esecuzione di indagini precliniche di terapia fibrinolitica, e che questo modello può sviluppare un volume d.......
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Dichiarazioni
Non abbiamo potenziali interessi conflittuali da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dalle sovvenzioni del National Institutes of Health HL087990 (G.L.).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| rh-tPA | Chimico | Genentech | |
| 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro | Chimico | Sigma | T8877 |
| Anestesia vaporizzatore | Attrezzature | Soma Technology | Dräger Vapor 19.1 |
| Attrezzatura ricaricabile ad alta velocità micro trapano | Strumenti per le scienze | 18000-17 | |
| Forbici curve | Attrezzature | Strumenti per le scienze | 14117-14 |
| Pinze Dumont (Medico #7) | Attrezzature | Strumenti per le scienze | 11270-20 |
| Pinze Dumont (Medico #5)Attrezzature | Strumenti per le scienze fini | 11251-35 | |
| Forbici | a molla in stile VannasAttrezzature | Fine Science Tools | 15000-03 |
| Camera di recupero veterinaria | Attrezzatura | Servizi Peco | V1200 |
| Genie plus pompa a siringa | Attrezzatura | Kent Scientific Corporation | |
| Matrice cerebrale di ratto | Attrezzatura | Kent Scientific Corporation | RBMA-310C |
| Calibro digitale | Attrezzature | World Precision Instruments | 501601 |
| Microscopio da dissezione | Attrezzature | World Precision Instruments | PZMTIII-BS-LWD |
| Attrezzatura per siringhe Hamilton | modello 710 | ||
| di controllo per coperte omeotermiche | Attrezzatura | Harvard Clipper | |
| elettrico | Attrezzatura Braintree Scientific | CLP-9931 | |
| Elettrobisturi veterinari | Attrezzatura | MACAN Azienda produttrice | MV-9 |
| Misuratore di portata sanguigna | Attrezzatura | Adinstruments | |
| PowerLab 4/30 | Attrezzatura | Adinstruments | |
| LabChart 7.2 | software | Adinstruments | |
| siringa da 1 ml | Materiale di consumo | Becton, Dickinson and Company | Ago da 309659 |
| 23 G | Consumabile | Becton, Dickinson and Company | 305143 |
| Ago da 30 G | Consumabile | Becton, Dickinson and Company | 305106 |
| Tubo in PE-50 | Consumabile | Bevton, Dickinson and Company | 427517 |
| Tubo in PE-10 | Consumabile | Becton, Dickinson and Company | 427400 |
| 6-0 Sutura in seta | Consumabile | Apparecchio Harvard | 723287 |
| sutura di seta 5-0 | Consumabile | Apparecchio Harvard 517607 |
Riferimenti
- Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., Høyer, S., Diemer, N. H. A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli. J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).
- Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. A ra....
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Ristampe e permessi
Errata corrige
Formal Correction: Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats
Posted by JoVE Editors on 11/01/2014. Citeable Link.
A correction was made to Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".
