Questo protocollo utilizza un catetere a palloncino per causare un danno endoluminale sull'arteria carotide di ratto e d'ora in poi suscitare iperplasia neointimale. Questo è un modello consolidato per lo studio dei meccanismi di rimodellamento vascolare in risposta al danno. È inoltre ampiamente utilizzato per determinare la validità dei potenziali approcci terapeutici.
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Articolo metodologico
Vascolare Balloon Lesioni e intraluminale Amministrazione in Rat carotide
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il pallone modello di lesione carotidea nei ratti è stata consolidata per oltre due decenni. Rimane un importante metodo per studiare i meccanismi molecolari e cellulari coinvolti nella vascolare dedifferenziazione muscolatura liscia, la formazione di neointima e rimodellamento vascolare. Maschi ratti Sprague-Dawley sono gli animali più frequentemente impiegato per questo modello. Ratti femmina non sono preferiti come ormoni femminili sono protettivi contro le malattie vascolari e introducono una variante a questa procedura così. La carotide sinistra è tipicamente infortunato con la carotide destra serve come controllo negativo. Lesioni della carotide sinistra è causato dal pallone gonfiato che denudes l'endotelio e distend s la parete del serbatoio. Dopo lesioni, potenziali strategie terapeutiche come l'uso di composti farmacologici e sia gene o trasferimento shRNA possono essere valutati. Tipicamente per gene o il trasferimento shRNA, la sezione feriti del lume del vaso viene trasformata localmente per 30 minuti con vparticelle IRAL codificano sia una proteina o shRNA per la consegna e di espressione nella parete del vaso feriti. Neointimale ispessimento rappresentano cellule muscolari lisce vascolari proliferative solito picco di due settimane dopo l'infortunio. Le navi sono in gran parte raccolte in questo punto di tempo per l'analisi cellulare e molecolare delle vie di segnalazione cellulare, nonché l'espressione di geni e proteine. Le navi possono essere raccolte in precedenti punti di tempo per determinare l'insorgenza di espressione e / o l'attivazione di una proteina o percorso specifico, a seconda degli scopi sperimentali destinati. Le navi possono essere caratterizzati e valutati utilizzando colorazione istologica, immunoistochimica, test di proteine / mRNA, e saggi di attività. Il intatta carotide destra dello stesso animale è un controllo interno ideale. Cambiamenti lesioni indotte parametri molecolari e cellulari possono essere valutati confrontando l'arteria feriti all'arteria giusto controllo interno. Allo stesso modo, modalità terapeutiche possono essere valutati confrontando il injured e trattato dell'arteria al controllo feriti unica arteria.
Introduzione
Cateteri a palloncino sono dispositivi medici utilizzati nella procedura di angioplastica, allo scopo di ampliare sito ostruito (s) di ateroma o trombo in un vaso sanguigno. Il lume del vaso socchiusi è costretto ad aprire dal pallone gonfiato e la fornitura di sangue sarebbero stati ripristinati in sequenza per alleviare i sintomi di ischemia a valle, come angina, infarto del miocardio, e dolore alle gambe. Tuttavia, il grande successo di angioplastica è stata diminuita di complicanze post-operatorie, come i risultati di forza causando barotrauma vascolare (balloon injury), ovvero il rimodellamento parete del vaso e in molti casi ri-restringimento del lume vasale (r....
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Protocollo
NOTA: L'uso di animali per i seguenti esperimenti è stato esaminato e approvato dalla cura e l'uso Comitato Istituzionale Animal (IACUC).
1. Procedure preoperatori
- Sterilizzare strumenti chirurgici prima dell'uso.
- Autoclave tutti gli strumenti chirurgici 24 ore o meno prima di un intervento chirurgico. Se più interventi chirurgici vengono eseguiti nello stesso giorno, sterilizzare gli strumenti con uno sterilizzatore tallone secca tra ambulatori.
- Filtro-sterilizzare la soluzione salina prima dell'uso.
- Pesare il ratto e calcolare la dose di farmaci anestetici (ketamina....
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Risultati
Due settimane dopo la lesione, le arterie carotidi sono raccolte, sezionati e sottoposti ad analisi morfologica. Le arterie sono sezionata e colorate con H & E (figure 1, 2B, C e 3). Rat parete carotidea contiene quattro strati di lamina elastica, che appaiono come linee rosa. L'area tra la lamina esterna, lamina elastica esterna (EEL) e la lamina interna, lamina elastica interna (IEL) è il supporto liscio strato muscolare (Figura 1). L'area all'interno della IEL è l'intima, un mono.......
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Discussione
Il ratto infortunio carotide balloon è stata ben descritta da Tulis nel 2007 34. E 'stato completamente discusso tutti i dettagli di questa procedura Dr. Tulis. I lettori che sono interessati a questa procedura, si consiglia vivamente di leggere il protocollo Tulis '. Tuttavia, c'è una cosa che non siamo d'accordo con il dottor Tulis: invece di gonfiare il palloncino con soluzione salina o qualsiasi tipo di liquido, abbiamo suggerito a gonfiare con l'aria. Secondo la nostra esperienza personale, gonfiando con .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Siamo grati al Dr. Clowes per aver sviluppato e descritto per primo questo metodo. Siamo anche grati al Dr. Tulis per il suo protocollo dettagliato che è stato fondamentalmente utile per il nostro lavoro precedente, attuale e futuro. Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni R01HL097111 e R01HL123364 dal NIH a M.T. e dalla sovvenzione 14GRNT18880008 dell'American Heart Association a M.T.
Vorremmo ringraziare Rachel Newton per il suo supporto tecnico esperto e per il suo prezioso aiuto durante il processo di ripresa.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Cateteri per embolectomia a palloncino Fogarty, 2 francesi | Edwards Lifesciences, Germania | 120602F | |
| Scheda operativa Deltaphase - Include 2 cuscinetti e 2 isolanti Braintree | Scientific, Inc. | 39OP | |
| Fisher Scientific | 12-563-501 | ||
| Pinza per zanzare Hartmann 4" curvo | Apiary Medical, Inc. San Diego, CA | gS 22.1670 | |
| Divaricatore Crile 4" a doppia estremità | Apiary Medical, Inc. | gS 34.1934 | |
| Altri strumenti chirurgici | Roboz Surgical Instrument Company, Inc., Gaithersburg, MD | ||
| Endovena periferica (I.V.) Cannula, 24 G | BD | 381312 | |
| Ketamina HCl, 100 mg/ml, 10 ml | Ketaset- Patterson Vet | 07-803-6637 | |
| Xilazina (AnaSed), 20 mg/ml, 20 ml | Ketaset- Patterson Vet | 07-808-1947 | |
| Buprenex, 0,3 mg/1 ml (5 fiale/scatola) | Ketaset- Patterson Vet | 07-850-2280 | |
| Nair Baby Oil Lozione depilatoria - 9 oz | Amazon/Walmart/CVS | N/A | |
| Dispositivo di gonfiaggio | Demax Medical | DID30 | |
| D300 Rubinetto a 3 vie | B.Braun Medical Inc. | ||
| Unguento per lacrime artificiali | Laboratori di rugby, Duluth, GA | N/A |
Riferimenti
- Landzberg, B. R., Frishman, W. H., Lerrick, K. Pathophysiology and pharmacological approaches for prevention of coronary artery restenosis following coronary artery balloon angioplasty and related procedures. Progress in Cardiovascular Diseases. 39, 361-398 (1997).
- Muller, D. W., Ellis, S. G., Topol, E. J.
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Ristampe e permessi
