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Articolo metodologico

Procedura per la safena umane Veins Ex Vivo Perfusione e rinforzo esterno

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DOI:

10.3791/52079

1 ottobre 2014

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

I meccanismi che portano allo sviluppo di iperplasia intimale (IH) e il fallimento del trapianto vena sono ancora poco conosciuti. Questo studio descrive un sistema ex vivo di perfusione vene umane sotto flusso e pressione controllata. Inoltre l'efficienza di rinforzo maglia esterna per limitare lo sviluppo di IH è stata valutata.

Abstract

Il pilastro di terapie contemporanee per esteso arteriopatia obliterante è venosa bypass. Tuttavia, la sua durata è minacciato da iperplasia intimale (IH), che alla fine porta a occlusione nave e fallimento del trapianto. Forze meccaniche, particolarmente basso shear stress e la tensione alto muro, si pensa di avviare e sostenere questi cambiamenti molecolari e cellulari, ma il loro contributo esatto resta da dipanare. Per valutare in modo selettivo il ruolo di pressione e sollecitazione di taglio sulla biologia di IH, un ex vivo sistema di perfusione (EVPS) è stato creato per perfusione segmenti di vene safene umani sotto il regime arteriosa (stress elevato shear e alta pressione). Ulteriori innovazioni tecniche hanno permesso di perfusione simultanea di due segmenti della stessa vena, uno armato con una rete esterna. Le vene sono state raccolte utilizzando una tecnica no-touch e immediatamente trasferiti al laboratorio per il montaggio in EVPS. Un segmento del isol appenaated vena non è stato perfuso (controllo, giorno 0). Gli altri due segmenti sono stati perfusi per un massimo di 7 giorni, un essere completamente al riparo con un 4 mm (diametro) della maglia esterno. La pressione, velocità del flusso, e la frequenza cardiaca sono stati costantemente monitorati e adeguati per simulare le condizioni emodinamiche prevalenti nell'arteria femorale. Al termine della perfusione, vene sono stati smontati e utilizzati per l'analisi istologica e molecolare. In ex vivo, condizioni di perfusione ad alta pressione (arteriosa, medio = 100 mm Hg) è sufficiente a generare IH e il rimodellamento delle vene umane. Queste alterazioni sono ridotti in presenza di una rete di poliestere esterno.

Introduzione

Le malattie cardiovascolari sono la principale causa di morbilità e mortalità nei paesi occidentali 1. Nonostante i progressi compiuti nei trattamenti endovascolari, la chirurgia di bypass rimane il fondamento delle terapie contemporanee, così oltre mezzo milione di innesti di vena vengono eseguite ogni anno negli Stati Uniti. Tuttavia, nonostante decenni di ricerca, 30-60% dei minori innesti estremità vena falliscono entro i primi anni a causa di iperplasia intimale (IH) 2. Forze meccaniche, particolarmente basso sforzo di taglio (SS) e la tensione alto muro, sono fondamentali nel l'avvio e lo sviluppo di questa risposta iperplastica 3....

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Protocollo

Il Comitato Etico dell'Università di Losanna ha approvato gli esperimenti, che sono in conformità con i principi enunciati nella Dichiarazione di Helsinki del 1975, riveduta nel 1983 per l'uso di tessuti umani.

1. umano Grande vena safena Harvest

  1. Ottenere segmenti eccedenti di non varicose safene umane da pazienti sottoposti a chirurgia degli arti inferiori di bypass per ischemia. In sala operatoria, disinfettare tutta la gamba con una soluzione di iodio e drappeggio al paziente di esporre la gamba dall'inguine al piede.
  2. Eseguire un'incisione mediana dall'inguine al ginocchio (lasciando la parte de....

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Risultati

Il EVPS fornisce un prezioso strumento per valutare autonomamente le forze emodinamiche sulla vena safena umana innesta rimodellamento e IH.

La Figura 1 mostra la camera di perfusione e il supporto vena. Nelle figure 1A e B, il supporto vena prima (Figura 1A) e dopo (Figura 1B) assemblaggio, rispettivamente è raffigurato. È composto (dalla parte superiore alla parte inferiore) di 1 tubo di acciaio inox piano.......

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Discussione

Questo studio rivela un ex vivo sistema di perfusione venosa (EVPS) per eseguire studi approfonditi emodinamiche nelle vene umane. Questo sistema permette safene perfusione sotto parametri emodinamici definiti in assenza di fattori infiammatori e di crescita aggravanti rilasciati dalle cellule circolanti in vivo. Pertanto, esso fornisce una migliore comprensione dei meccanismi sottostanti coinvolti nel controllo della IH in vene umane innesti 5,11,12,15.

Perturba.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto da finanziamenti del SNF [31003A-138528], la Octav e la Botnar Fondazione Marcella, la Fondazione Novartis e la Muschamp Fondazione Emma. Ringraziamo Martine Lambelet, e Jean-Christophe Stehle per la loro assistenza tecnica eccellente.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
RPMI 1640 - GlutamaxLife Technologies61870-010
Penicillina/Streptomicina/FungizoneBioconcept4-02F00-H
Destrano da Leuconostoc spp. 500 gSigma-Aldrich31390
Tampone PBS CHUV pH 7,1-7,3 1 LLaboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG100 0 324 00
Mezzo di inclusione per criosezione - Tissue-Tek OCT CompoundFisher Scientific14-373-65
Tubo in silicone (perossido) L/S 16 (96400-16 ) - 7,5 mIdex Health & Scienza GMBHMF0037ST
splitter a YIdex Salute & Science GMBHRaccordo
35 mm Piastra di colturaSigma-AldrichCLS430165-100EA
Tubo Falcon da 15 mlBD Bioscence352096
Tubo Falcon da 50 mlBD Bioscence352098
Pompa a ingranaggi - Reglo-ZIdex Health & Scienza GMBHSM 895   App-Nr 03736-00194
Testa della pompaIdex Salute & Scienza GMBHMI0008 
Kit di monitoraggio TRANSPAC IVicumedical011-0J736-01
Siringhe da 20 mlB. Braun Medical SA4612041-02
Etibon 3-0 FS-2Ethicon- Johnson& JohnsonEH7346H
Mesh ProVena 6-8mmB. Braun Medical SA1105012-14
NaCl: Perfusione in soluzione di cloruro di sodio 0,9% (100 ml)B. Braun Medical SA534534
Masterflex L/S Standard DriveCole-Parmer Instrument Co7521-10
Scheda di acquisizioneNational InstrumentsPCI-6024 E
Flussimetro moduloTransonic Systems Inc.Rubinetto TS410 e T402
con filtroBD Connexta Luerlock394600
MillexMilianSE2M229I04
a Y a 3 vie

Riferimenti

  1. Sal Go, A., et al. Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association. Circulation. 129, 399-410 (2014).
  2. Sal Conte, M., et al.

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Ristampe e permessi

Tag

Vena safena umanaiperplasia intimalerinforzo con rete esternacondizioni emodinamicheanalisi istologicaanalisi molecolareregolazione della pressionevelocit del flussobypass venoso