Articolo metodologico

Facial assotomia Nerve in topi: un modello per studiare motoneuroni risposta al danno

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DOI:

10.3791/52382

23 febbraio 2015

In questo articolo

Sommario

Presentiamo un protocollo chirurgico che descrive in dettaglio come eseguire un'assotomia di taglio o schiacciamento sul nervo facciale nel topo. L'assotomia del nervo facciale può essere impiegata per studiare la risposta fisiologica alla lesione nervosa e testare le tecniche terapeutiche.

Abstract

L'obiettivo di questo protocollo chirurgico è quello di esporre il nervo facciale, che innerva la muscolatura facciale, alla sua uscita dal forame stylomastoid e tagliate o schiacciarlo per indurre lesioni dei nervi periferici. I vantaggi di questo intervento sono la sua semplicità, alta riproducibilità, e la mancanza di effetto sulle funzioni vitali o di mobilità dal conseguente paralisi facciale, con il risultato di un risultato chirurgico relativamente mite rispetto ad altri modelli di lesioni nervose. Un importante vantaggio di utilizzare un modello di lesione del nervo cranico è che i motoneuroni risiedono in una popolazione relativamente omogenea nel nucleo motoria facciale nel ponte, semplificando lo studio dei corpi cellulari motoneuroni. A causa della natura simmetrica di innervazione del nervo facciale e la mancanza di diafonia tra i nuclei motori facciali, l'operazione può essere eseguita con il lato unilateralmente unaxotomized serve come controllo interno accoppiato. Una varietà di analisi può essere effettuata dopo l'intervento di asinis la risposta fisiologica, i cui dettagli sono oltre la portata di questo articolo. Ad esempio, il recupero della funzione muscolare può servire come marcatore comportamentale per reinnervation, o motoneuroni può essere quantificato per misurare la sopravvivenza cellulare. Inoltre, i motoneuroni possono essere catturati con precisione mediante microdissezione laser per l'analisi molecolare. Poiché il assotomia nervo facciale è minimamente invasiva e ben tollerato, può essere utilizzato in un'ampia varietà di topi geneticamente modificati. Inoltre, questo modello di intervento può essere utilizzato per analizzare l'efficacia dei trattamenti di lesioni dei nervi periferici. Lesione del nervo facciale fornisce un mezzo per indagare non solo i motoneuroni, ma anche le risposte del microambiente centrale e periferica gliali, il sistema immunitario, e bersaglio muscolatura. Il modello di lesione del nervo facciale è un modello di lesione dei nervi periferici ampiamente accettato che serve come un potente strumento per studiare lesioni nervose e rigenerazione.

Introduzione

Esistono molti modelli di lesione del nervo periferico, ma che si distingue per lo studio dei motoneuroni è il modello nervo assotomia facciale. Il nervo facciale, noto anche come VII nervo cranico, ha origine nel ponte e innerva i muscoli espressione facciale 1,2. In questo protocollo chirurgico, il nervo facciale è esposta alla sua uscita dal forame stylomastoid e tagliato o schiacciato. La gravità delle lesioni del nervo può essere classificato secondo le Sunderland 3 classificazioni, che differenzia il pregiudizio in base l'integrità del assoni, endoneurium, perineurio, e epinevrio, che sono strati di tessuto connettivo che in sequenza a....

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Protocollo

Tutte le procedure eseguite sono approvati dalla Scuola di Medicina Istituzionale Animal Care and Use Committee Indiana University e seguono Istituto Nazionale di linee guida di salute.

1. Tecnica chirurgica

  1. Mantenere una tecnica asettica durante questa procedura utilizzando guanti sterili, strumenti, e un campo chirurgico sterile, secondo le linee guida NIH 25. Sterilizzare gli strumenti prima di iniziare l'intervento chirurgico da loro autoclave (vedi Tabella di reagenti specifici / Attrezzature per l'elenco completo). Utilizzare uno sterilizzatore perle di vetro per sterilizzare strumenti ....

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Risultati

Dopo aver eseguito l'assotomia nervo facciale, perdita motoneuroni si verifica come risultato della lesione. Sopravvivenza dei motoneuroni dopo l'infortunio dipende da molte variabili, come il sesso, l'età degli animali al momento della chirurgia, e il timepoint in cui i conteggi motoneurone sono fatto, e la Moran e Graeber revisione 24 e Jinno e Yamada recensione 22 sia riepilogare i dati di sopravvivenza dei motoneuroni. In genere, circa l'86% dei motoneuroni sopravvivere a 28 gio.......

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Discussione

Il passaggio critico per questo protocollo è posizionare correttamente il mouse prima dell'inizio dell'intervento chirurgico. Se il topo non è sdraiato su un fianco, l'orecchio non è fissato con l'angolazione corretta o l'incisione è praticata in una posizione errata, trovare il nervo facciale diventa molto più difficile. Una volta padroneggiata questa tecnica, gli interventi chirurgici richiederanno solo pochi minuti per topo.

Per chiudere la ferita è possibile utilizzare suture, colla o cli.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è finanziato da NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
StereomicroscopioLeicaM60
Nastro adesivoFisher Scientific15-952
Vannas-Tü Forbici a molla Bingen - dritte/affilate/taglienti da 8,5 cm/5 mmFine Science Tools15003-08Sterilizzare prima dell'uso
Pinze Dumont #5/45 - punte standard/angolate a 45 gradi/Dumoxel/11 cmFine Science Tools11251-35Sterilizzare prima dell'uso
Clip per sutura Michel - 7,5 mm x 1,75 mmFine Science Tools12040-01Descritto come "clip per ferite" nel protocollo, sterilizzare prima dell'uso
Hagenbarth clip per ferite ad azione incrociata 5"George Tiemann & Co160-910Utilizzato per applicare la clip della ferita, sterilizzare prima dell'uso
Applicatore e riduttore di clip per sutura Michel - Per clip da 7,5 mmFine Science Tools12029-12Utilizzato per rimuovere la clip della ferita
0,9% Iniezione di cloruro di sodio, USPHospira0409-4888-10
Betadine, 16 oz, con dispenserFisher Scientific19-027132
70% Etanolo
a microsfere di vetro
Sterilizzatore

Riferimenti

  1. Kaufman, M., Bard, J. The Anatomical Basis of Mouse Development. , Elsevier. New York, NY. (1999).
  2. Ashwell, K. The adult mouse facial nerve nucleus: morphology and musculotopic organization. Journal of Anatomy. 135, 531-538 (1982).
  3. Sunderland, S.

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Tag

Lesione del nervo perifericoNucleo motore faccialeMicrodissezione laserPCR quantitativaAnalisi dell espressione genicaProtocollo chirurgicoModello murinoRigenerazione nervosa

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