Abbiamo sviluppato un nuovo modello di ex vivo per studiare l'azione di ormoni nel seno umano. Si basa su microstrutture tessuti isolati da campioni di tessuto del seno chirurgici che conservano l'architettura del tessuto, le interazioni intercellulari, e segnalazione paracrina.
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In questo articolo
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Sommario
Abstract
Lo studio di azione dell'ormone nel seno umano è stata ostacolata dalla mancanza di adeguati sistemi modello. Alla cultura in vitro, cellule epiteliali mammarie primarie tendono a perdere l'espressione del recettore dell'ormone. Ampiamente recettore ormone linee di cellule di cancro al seno positivo utilizzati sono di scarsa rilevanza per la situazione in vivo. Qui, descriviamo un modello ex vivo per studiare l'azione di ormoni nel seno umano. Campioni di tessuto mammario umano fresco da materiale di scarto chirurgico quali mammoplastiche riduzione o mammectomies sono meccanicamente ed enzimaticamente digerite per ottenere frammenti di tessuto contenenti dotti e lobuli e molteplici tipi di cellule stromali. Queste microstrutture tessuti conservati in terreno di base senza fattori di crescita mantenere i contatti intercellulari, l'architettura dei tessuti, e rimangono ormone reattivo per diversi giorni. Essi sono facilmente elaborati per l'RNA e l'estrazione di proteine, l'analisi istologica o memorizzati in congelamento medio. Fluorescenzaattivato ordinamento delle cellule (FACS) può essere utilizzato per arricchire per specifiche popolazioni cellulari. Questo protocollo offre un approccio standard semplice per gli studi traslazionali con altamente complessi, variegati campioni umani.
Introduzione
Informazioni sul paesaggio mutazionale di cancro al seno sta aumentando a ritmi sostenuti. Meno attenzione è stata rivolta a fattori sistemici che influenzano lo sviluppo del cancro al seno. L'esposizione agli ormoni riproduttivi ha un impatto importante sulla progressione della malattia 1-3. Tuttavia, i meccanismi con cui gli ormoni riproduttivi incidono sul seno umano sono poco conosciuti. Lavora con modelli di topo geneticamente ha rivelato che coinvolgono cellule segnalazione intrinseca e paracrine attraverso diversi effettori a valle 4.
La conoscenza limitata su azione ormonale nel seno umano è in gran parte....
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Protocollo
Considerazioni generali: prima del tempo, istituire un protocollo etico, preparano questionari per i pazienti, e vedere per la formazione del personale clinico. Prima di usare il materiale dalla chirurgia mastoplastica riduttiva, procurarsi le autorizzazioni, e garantire il consenso del paziente. Tissue può essere contagioso e deve essere gestito di conseguenza. Questo protocollo è stato approvato dal comitato etico di ISREC - Istituto svizzero di ricerca sperimentale sul cancro.
1. Tissue Recupero, lavorazione e Bio-banking
Per garantire la qualità del campione ottimale per la bio-banking, una serie di misure v....
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Risultati
Per studiare il ruolo di estrogeni e progesterone e per capire meglio le loro funzioni molecolari nel seno umano, raccogliamo campioni freschi umani del tessuto del seno da pazienti sottoposti mammoplastiche riduzione (Figura 1) dopo aver ottenuto il loro consenso informato. Abbiamo anche ottenere medica e riproduttiva storia del paziente, così come un campione di sangue per determinare i livelli sierici di progesterone al momento dell'intervento. Tissue da mammoplastiche riduzione freschi è meccani.......
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Discussione
La cultura ex vivo qui descritto fornisce microstrutture del tessuto del seno contenenti dotti e lobuli intatte, insieme ad altri tipi di cellule che normalmente si trovano in seno femminile umano. Nella lavorazione del tessuto mammario umano normalmente ottenuti da mammoplastiche riduzione, rimozione del tessuto adiposo, la digestione enzimatica e meccanica della matrice stromale, e lisi dei globuli rossi arricchisce per frammenti condotto latte e unità lobulare duttali terminali. Digestione enzimatica Gentle .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano M. Fiche di Ospedale universitario di Losanna per fornire la fotografia mastoplastica, M. Wirth e A. Ayyanan dell'Istituto svizzero per la ricerca sperimentale sul cancro, Centro Nazionale di Competenza nella Ricerca Oncologia Molecolare, Facoltà di Scienze della Vita, Ecole Polytechnique Fédérale de Losanna per l'assistenza tecnica e R. Clarke dell'Università di Manchester per i commenti critici. La ricerca che ha portato a questi risultati ha ricevuto il sostegno di SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531.817, e l'iniziativa sui medicinali innovativi impresa comune nell'ambito dell'accordo di concessione n. 115.188, le risors....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Centrifuga per microlitri | Heraeus Biofuge Fresco | 75005521 | |
| Centrifuga 5810R | Eppendorf | 5810 000.327 | |
| Cryobox | Nalgene | 5100-0001 | |
| Congelatore a velocità controllata EF600 Grant | Asymptote | Incubatore CO< | |
| Hera Cell Heraeus | 51022391 | ||
| Roller Mixer SRT9D | Sturt | SRT9D | |
| Cassette istologiche | Medizintechnik | 81-0021-00 | |
| Cell Strainer | Falcon | 352340 | |
| Strile Surgical Blade | Aesculap | BB536 | |
| Bisturi | Aesculap | BB084R | |
| Pinze | Aesculap | BD047R | |
| Forbici | Aesculap | BC374R | |
| Stampo a base di paraffina | SAKURA | 4166 | |
| Temperatura di taglio ottimale (OCT) Cryomatrix | Thermoscientific | 6769006 | |
| Penicillina/Streptomicina | Tecnologie di vita | 15070-063 | |
| Antibiotico/antimicotico | Tecnologie di vita | 15240-062 | |
| DMEM F/12 | Tecnologie di vita | 11039-021 | Preriscaldamento (37 ° C) |
| Collagenasi | Roche | 11 088 793 001 | Preriscaldamento (37 ° C) |
| Siero fetale bovino | Life Technologies | 10270 | Può essere sostituito con |
| tampone per lisi ematica di cellule di | Sigma | R7757 | |
| Dimetil solfossido (DMSO) | Sigma | D2650 | |
| Tripsina-EDTA | Life Technologies | 15400-054 | |
| Agarosio | Invitrogen | 16500-500 | |
| Formaldeide | Sigma | F1635 | |
| Paraformaldeide | Roth | 335 | |
| Isopentano | Sigma | M32631 | |
| Etanolo | Merck | 1009831000 | |
| Fiale criogeniche (5,0 ml) | VWR, International | 479-0820 | |
| Piatto di coltura a bassissimo attacco | Corning, NY 14831 | 3471 |
Riferimenti
- Beral, V. Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study. Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).
- MacMahon, B., et al. Age at first birth and breast cancer risk. Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).
- Pike, M. C., Krail....
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Ristampe e permessi
Errata corrige
Formal Correction: Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast
Posted by JoVE Editors on 2/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast. There was an error with the author, Marie Shamsheddin's, name. The author's name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin
