Il mouse filo arteria femorale modello di lesione di restenosi è tecnicamente impegnativo. In questo protocollo vi mostriamo i principali dettagli tecnici essenziali per eseguire con successo danno filo da indurre neointima coerente per gli studi di restenosi.
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Articolo metodologico
Un modello murino di restenosi arteriosa: aspetti tecnici del femore Wire Injury
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le malattie cardiovascolari causate da aterosclerosi è la principale causa di morte nel mondo sviluppato. Restringimento del lume del vaso, a causa dello sviluppo della placca aterosclerotica o la rottura delle placche stabiliti, interrompe il normale flusso di sangue che porta a varie patologie, come l'infarto del miocardio e ictus. Nella clinica procedure endovascolari, come l'angioplastica sono comunemente eseguiti per riaprire il lume. Tuttavia, questi trattamenti inevitabilmente danneggiano la parete del serbatoio, nonché l'endotelio vascolare, innescando una risposta guarigione eccessivo e lo sviluppo di una targa neointimale che si estende nel lume causando restenosi nave (ri-restringimento). Restenosi resta una delle principali cause di fallimento di trattamenti endovascolari per l'aterosclerosi. Così, modelli animali preclinici di restenosi sono di vitale importanza per lo studio dei meccanismi fisiopatologici e traslazionale approcci per interventi vascolari. Tra diversi experime murinomodelli ntale, lesioni filo arteria femorale è ampiamente accettata come il più adatto per gli studi di restenosi post-angioplastica perché assomiglia da vicino la procedura di angioplastica che danneggia sia endotelio e parete del serbatoio. Tuttavia, molti ricercatori hanno difficoltà utilizzando questo modello grazie al suo elevato grado di difficoltà tecnica. Ciò è dovuto soprattutto un filo metallico deve essere inserito nell'arteria femorale, che è circa tre volte più sottile il filo, per generare lesioni sufficiente ad indurre neointima prominente. Qui, descriviamo i dettagli chirurgici essenziali per superare efficacemente le maggiori difficoltà tecniche di questo modello. Seguendo le procedure presentate, eseguendo il pregiudizio del mouse filo femorale diventa più facile. Una volta familiarizzato, l'intera procedura può essere completata entro 20 min.
Introduzione
Nell'era dell'applicazione estesa dei trattamenti endovascolari per varie malattie cardiovascolari, la restenosi dopo angioplastica è uno dei principali problemi per i pazienti sottoposti a tali trattamenti. Il danno all'endotelio vascolare al momento dell'angioplastica, di concerto con lo sfondo aterosclerotico, induce un'eccessiva proliferazione delle cellule muscolari lisce nello strato mediale, con conseguente iperplasia neointimale. 1,2 Un modello animale vitale che ricapitola l'iperplasia neointimale post-angioplastica è, quindi, importante non solo per lo studio dei meccanismi della malattia, ma anche per lo sviluppo di terapie efficaci per il tratta....
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Protocollo
NOTA: Etica Dichiarazione: Tutte le procedure sono conformi alla Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio (National Academies Press, 8 ° edizione, 2011), e dei protocolli approvati dalla cura e l'uso degli animali Comitato Istituzionale presso l'Università del Wisconsin. Tutti gli interventi chirurgici sono stati eseguiti in anestesia isoflurano (attraverso inalazione, portata 2 ml / min), e sono stati fatti tutti gli sforzi per ridurre al minimo le sofferenze. Gli animali sono stati sacrificati in una camera progressivamente riempita con CO 2.
1. L'induzione di anestesia generale e incisione cutanea
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Risultati
Quattro settimane dopo l'intervento, raccolgono l'arteria femorale filo-feriti e rendono esemplare di blocco una paraffina per analizzare la formazione neointima. Indurre anestesia generale come descritto sopra. Aprire immediatamente il torace e inserire un calibro 20 farfalla ago al ventricolo sinistro. Collegare la linea ad una bottiglia di infusione. Eseguire la fissazione perfusione per infusione a goccia di PBS seguito da 4% paraformaldeide (di solito 10-20 ml, ciascuno). La bottiglia di infusione .......
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Discussione
La procedura lesioni filo è applicabile a tutti i ceppi di topi, purché le strutture anatomiche sono simili. 4 In questo lavoro, abbiamo utilizzato maschio C57BL / 6 topi con un'età di 12-16 settimane. Come abbiamo imparato dai nostri studi preliminari, le arterie femorali di topi più giovani di 10 settimane sono spesso così piccole che l'inserimento del filo è molto impegnativo. D'altra parte, l'inserimento del filo in topi vecchi a 16 settimane è tecnicamente più semplice, ma tende a causare.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da un Wisconsin Partnership Program New Investigator Award (ID 2832), da un National Heart, Lung, Blood Institute R01 Grant (HL-068673) e da un T32 training grant (HL-110853). Ringraziamo il gruppo della dottoressa Melina Kibbe della Northwestern University per aver fornito informazioni utili.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Guida del filo a nucleo fisso | Cook | G02426 | Diametro 0,015 pollici, pinza a dilatazione diritta |
| Roboz | RS-4927 | Punte curve e smussate | |
| Pinzette Dumont #5 | World Precision Instruments | 14095 | Punte diritte e affilate |
| Pinze per incannulamento dei vasi Dumont | World Precision Instruments | 503373 | |
| Forbici McPherson-Vannas | World Precision Instruments | 501234 | |
| Pinze per zanzare | World Precision Instruments | 501291 | |
| Sutura in nylon Ethilon 9-0 | Ethicon | 7717G | 9-0, Monofilamento di nylon nero |
| Micro AROSuture, Sterile 11-0, 70 micrometri, MET Point | AROSurgical | VT4A00N07 | 11-0, Monofilamento di nylon nero |
| 3M Precision Multi-Shot DS Pelle monouso Graffatrice | 3M | DS-25 |
Riferimenti
- Dzau, V. J., Braun-Dullaeus, R. C., Sedding, D. G. Vascular proliferation and atherosclerosis: new perspectives and therapeutic strategies. Nat Med. 8 (11), 1249-1256 (2002).
- Hui, D. Y. Intimal hyperplasia in murine models. Curr Drug Targets. 9 (3), 251-260 (200....
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Ristampe e permessi
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