Mieloma multiplo (MM), le cellule umane richiedono il microambiente favorevole cellule mesenchimali e componenti della matrice extracellulare per la sopravvivenza e la proliferazione. Abbiamo stabilito un vivo pollo modello embrione con cellule di mieloma e mesenchimali umane trapiantate per studiare gli effetti dei farmaci anti-tumorali sulla crescita del tumore, l'invasione e l'angiogenesi.
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Articolo metodologico
Istituzione di un mieloma multiplo umano Xenograft modello nel pollo per studiare la crescita del tumore, invasione e l'angiogenesi
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il mieloma multiplo (MM), una malattia delle cellule del plasma maligne, resta incurabile e nuovi farmaci sono necessari per migliorare la prognosi dei pazienti. A causa della mancanza del microambiente dell'osso e fattori di crescita auto / paracrino cellule MM umane sono difficili da coltivare. Pertanto, non vi è un urgente bisogno di stabilire una corretta in vitro e in sistemi di coltura in vivo per studiare l'azione di nuove terapie sulle cellule umane di MM. Presentiamo qui un modello di crescere cellule di mieloma multiplo umano in un ambiente 3D complesso in vitro e in vivo. Linee cellulari di MM OPM-2 e RPMI-8226 sono state trasfettate per esprimere la GFP transgene e sono stati coltivati in presenza di cellule mesenchimali umane e collagene di tipo I matrice come sferoidi tridimensionali. Inoltre, sferoidi sono stati innestati sulla membrana corioallantoidea (CAM) di embrioni di pollo e la crescita del tumore è stata monitorata mediante microscopia a fluorescenza stereo. Entrambi i modelli consentono lo studio del romanzo dru terapeuticogs in un ambiente 3D complesso e la quantificazione della massa tumorale dopo omogeneizzazione di innesti in un GFP-ELISA specifico transgene. Inoltre, le risposte angiogenici dell'ospite e l'invasione delle cellule tumorali nel tessuto ospite soggiacente possono essere monitorate quotidianamente da un microscopio stereo e analizzati mediante immunoistochimica contro le cellule tumorali umane (Ki-67, CD138, Vimentin) o cellule murali ospiti che coprono i vasi sanguigni (desmin / ASMA).
In conclusione, il sistema permette onplant studiare crescita cellulare MM e l'angiogenesi in un ambiente 3D complesso e permette lo screening per composti terapeutici mirati sopravvivenza e la proliferazione delle cellule di MM.
Introduzione
Il mieloma multiplo (MM) è caratterizzato dalla proliferazione di plasmacellule maligne nel midollo osseo, lesioni ossee e immunodeficienza 1. Sebbene siano disponibili nuove opzioni terapeutiche come gli inibitori del proteasoma (bortezomib) e i farmaci immunomodulatori (pomalidomide e lenalidomide), il MM rimane ancora un tumore maligno incurabile con una prognosi infausta 2. La prognosi infausta potrebbe essere spiegata dalla straordinaria eterogeneità dei cloni di cellule di MM che contribuisce a risposte variabili alla terapia, in particolare in caso di trattamento a lungo termine e pressione di selezione dei cloni di MM 3.
La sperimentazione preclinica di nuovi farmaci e delle loro combinazioni in vitro e in vivo è un passo critico e dispendioso in termini di tempo per lo sviluppo futuro di farmaci. Pertanto, sono necessari utili modelli in vivo di MM per ottenere una migliore comprensione della biologia della malattia e per consentire la scoperta di nuovi farmaci. In realtà, i migliori modelli di xenotrapianto per neoplasie ematologiche e terapie sono topi immunodeficienti, come i topi immunodeficienti combinati gravi (SCID) 4-7, i topi diabetici/SCID (NOD/SCID) non obesi 8,9 o i topi NOD/SCID β-microglobuline-knockout NOD/SCID 10,11.
Sebbene i modelli murini di MM umano in alcuni aspetti possano assomigliare al fenotipo della malattia umana, i topi immunodeficienti sono consanguinei, quindi simulano solo una risposta individuale a un farmaco e i costi sono molto alti. A causa dell'immunosoppressione, gli animali richiedono condizioni di mantenimento speciali e l'attecchimento del MM umano nei topi richiede da 6 settimane a 2 mesi 9,12, a meno che le cellule non vengano innestate direttamente nel midollo osseo utilizzando una procedura tecnicamente impegnativa con tassi di sopravvivenza animale inferiori 7,13. Pertanto, sono stati messi a punto nuovi metodi che utilizzano modelli di organoidi basati su cellule staminali 14, ingegneria tissutale 15 o sofisticati modelli di coltura cellulare 3D 16. Nel prossimo futuro competeranno con i classici esperimenti sugli animali per i test preclinici sui farmaci, ma non possono sostituire i test di tossicità sistemica negli organismi viventi.
L'embrione di pollo ha già dimostrato di essere un organismo adatto per lo xenotrapianto di cellule e tessuti umani a causa della mancanza di risposta immunitaria adattativa fino alla schiusa 17-19. Inoltre, ogni embrione di pollo riflette una reazione individuale ai farmaci applicati o alle cellule tumorali a causa della diversità genetica all'interno della popolazione di pollo. La membrana corioallantoidea (CAM) è un sistema ben consolidato per studiare l'angiogenesi tumore-dipendente 20-22. Quando i tumori solidi vengono innestati nella CAM, mostrano molte caratteristiche dei tumori in vivo, tra cui proliferazione, invasione, angiogenesi e metastasi 23-27.
Sulla base della precedente esperienza del nostro gruppo con i modelli di xenotrapianto CAM20,26,27, è stato creato un modello di MM umano che combina il vantaggio di un sistema di coltura 3D umano con il modello di embrioni di pollo in via di sviluppo ex ovo. Questo sistema modello di MM consente il monitoraggio in tempo reale della progressione della crescita del MM, la quantificazione della massa cellulare e i test preclinici sui farmaci.
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Protocollo
Secondo la legge austriaca, e l'Ufficio di animali da laboratorio benessere del servizio sanitario pubblico embrioni aviaria degli Stati Uniti non sono considerati animali vertebrati vivi fino hatching.The NIH Office of Laboratory Animal Welfare ha fornito indicazioni scritte in questo settore (http: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm e NIH Pubblicazione n .: 06-4515).
1. Colture Cellulari e lentivirali trasfezione
- Linee Cultura MM cellule OPM-2, RPMI-8226 e cellule staminali mesenchimali umane da midollo osseo in mezzo RPMI1640, integrato con 10% di siero fetale bovino vitello e 100 UI / ml di penicillina, 100 mg / ml di streptomicina e glutammina 2 mM in presenza 5% di CO 2 a 37 ° C.
- Trasfettare 5 x 10 6 cellule HEK 293FT con mix virale imballaggio (9 mg) DNA e 3 mg pLenti6 / V5 dest eGFP vettore per l'uso di 30 microlitri di reagente liposomiale trasfezione e medie trasfezione (10 ml). Rimuovere medio trasfezione dopo 12 ore eaggiungere 10 ml DMEM con 10% di siero di vitello e 1% di aminoacidi non essenziali (NEAA).
- Dopo 5 giorni, raccogliere surnatanti di cellule HEK293FT dopo centrifugazione di cellule nuoto (1.000 XG, 5min). Determinare titolo virale mediante real time PCR come descritto altrove 28.
- Trasfettare 1 x 10 6 cellule di MM con particelle lentivirali eGFP (1 x 10 5 particelle) in un piatto 24 bene in mezzo di crescita completa. Dopo 3 giorni, iniziare il processo di selezione aggiungendo 2 ug / ml blasticidin al mezzo di coltura. Per il eGFP lentivirus disponibile in commercio, usare 500 ug / ml di neomicina.
- Dopo 2 settimane di selezione, grappoli di eGFP esprimono cellule di MM apparirà; raccogliere le cellule per centrifugazione (1.000 xg, 5 min) e di espandersi come OPM-2 eGFP e RPMI-8226 sottolinee eGFP per esperimenti (sezione 2 e 3).
2. 3D Multiplo modello mieloma Spheroid
- Tipo I Freddo collagene soluzione e 10 x DMEM on ghiaccio.
- Mescolare 1/10 Volume di 10 x DMEM medio in matrice di collagene; aggiungere NaOH (0,2 N) per neutralizzare la soluzione acida di collagene ad un valore pH di 7,4; immagazzinare il collagene / soluzione a medio sul ghiaccio.
- Mescolare linee cellulari di MM transgeniche (OPM-2 eGFP o RPMI-8226 eGFP; 250.000 per sferoide,) con cellule umane mesenchimali (50.000 cellule / sferoide, vale a dire, il 30 microlitri drop).
- Miscela di cellule Centrifuga in provette da 15 ml (1000 xg, 5min), aggiungere freddo miscela di collagene preparato (1 ml) al pellet e mescolare bene (con 1.000 punta microlitri).
- Subito pipetta 30 microlitri della miscela di collagene / cella (con 100 microlitri punta) in una piastra a 24 pozzetti su parafilm sterile e lasciare miscela di cellule / collagene polimerizzare per 30 minuti a 37 ° C (vedere Figura 1A).
- Sferoidi MM sovrapposizione con mezzo di coltura contenente 1 ml 1, 10 e 100 nM bortezomib (vedi Figura 1B).
- Dopo 72 h di incubazione a 37 ° C, sferoidi documento dafluorescenza stereomicroscopia (vedi Figura 1C).
- Trasferire ogni spheroid dall'uso di pinze con ganasce piatte larghe in un tubo di reazione per la misura di GFP (vedere Figura 1D).
3. 3D mieloma multiplo Xenograft modello in CAM
- Incubare uova di gallina in un incubatore speciale per uova di volatili a 37 ° C e 70% di umidità per tre giorni.
- Successivamente, uova aperte e trasferimento embrioni sterilizzati con barche etanolo, quadrato, di 10 cm in plastica di peso con la cultura di cellule coperchio piatto e incubare "ex ovo" per altri sei giorni, in modo che la CAM è in grado di sviluppare (vedere Figura 2A).
- Tipo I freddo collagene soluzione e 10 x DMEM su ghiaccio, mescolare 1/10 volume di 10 x terreno DMEM nella matrice di collagene, Aggiungere NaOH (0,2 N) per neutralizzare la soluzione acida di collagene ad un valore pH di 7,4; immagazzinare il collagene / soluzione a medio sul ghiaccio.
- Mescolare linee cellulari di MM transgenici (OPM-2 o eGFPRPMI-8226 eGFP; 250.000 per sferoide,) con cellule mesenchimali umane (50.000 cellule / sferoide).
- Centrifugare le cellule in 15 ml provette (1.000 XG, 5min, per ciascun composto di prova 1 fiala), aggiungere 1 ml di freddo miscela di collagene preparata con la droga (a concentrazione di lavoro desiderato) al pellet e mescolare bene (con 1.000 punta microlitri).
- Inserire collagene gocce (30 ml ciascuno) su parafilm in 6 ben pate per 30 min per permettere la polimerizzazione della matrice extracellulare a 37 ° C.
- Transfer "onplants" dal punto 3.6 con l'uso del forcipe alla superficie trattata del CAM (2 cm da embrione) di 9 giorni di embrioni di pollo (4 onplants per ogni embrione di pollo, si veda la Figura 2B)
- Dopo 5 giorni di crescita in vivo in un incubatore uovo alla 37 ° C e 70% di umidità, xenotrapianti documento per fluorescenza stereomicroscopia (vedere la Figura 2C). Euthanize embrioni di pollo da ipotermia a 4 ° C in frigorifero per 5h.
- Rimuovere xenotrapianti con tessuto CAM soggiacente da una forbice oftalmica e pinze con ganasce piatte larghe. Usali per la misura di GFP (sezione 4, vedi Figura 2D) o per l'analisi immunoistochimica dei vasi sanguigni e / o cellule tumorali invadono (sezione 5).
4. Quantificazione di eGFP proteine mediante ELISA
- Trasferire ogni sferoide MM o xenotrapianto asportato in 0,5 ml RIPA buffer contenente 200 mcg / ml inibitori della proteasi.
- Omogeneizzare sferoide / xenotrapianto con un omogeneizzatore tessuto sul ghiaccio.
- Eseguire tre congelamento / scongelamento-cicli in azoto liquido e 37 ° C bagnomaria.
- Centrifugare omogenato a 4 ° C per 20 min (12,000 g) e memorizzare supernatanti.
- Diluire i campioni 1:20 in tampone (200 microlitri) del kit ELISA. Misurare GFP livelli da un GFP commerciale ELISA Kit utilizzando anticorpi biotinilati anti-GFP, secondo il protocollo del produttore.
5. ImmunohiAnalisi stochemical dei vasi sanguigni e invadere le cellule tumorali
- Fissare xenotrapianti asportati con area CAM in paraformaldeide al 4% O / N a 4 ° C.
- Inserire xenotrapianti fissi in cassette incorporamento e trasferirli in una stazione embedding tessuto con una serie alcool crescente graduata (50%, 70%, 80%, 95% di etanolo, xilolo e paraffina; ogni passo 60 min).
- Xenotrapianti Sezione (5 micron) mediante l'uso di un microtomo rotativo da banco. Cuocere sezioni di paraffina sui vetrini O / N a 56 ° C.
- Deparaffinare le sezioni di una serie graduata alcool riduzione acqua bidistillata (xilolo, 95%, 80%, 70%, 50% di etanolo, acqua bidistillata; ciascun passo 10 min).
- Eseguire recupero dell'antigene in un bagno d'acqua (95 ° C, 20 min) con una soluzione di recupero dell'antigene (tampone citrate-; pH 7,0; volume di 100 microlitri).
- Bloccare l'attività perossidasica endogena con 100 microlitri 3% H 2 O 2 / metanolo per 30 min.
- Sezioni di blocco in PBS contenenteSiero bovino fetale al 10% per 45 min (volume 100 ml).
- Stain per 1 ora con 100 microlitri di anticorpo primario (1 ug / ml) diluito in PBS contenente siero fetale di vitello 1% a RT.
- Dopo aver lavato 3 volte in PBS, incubare per 1 ora con l'anticorpo secondario biotinilato (0,1 mg / ml) in PBS contenente siero fetale di vitello 1% a RT.
- Dopo aver lavato 3 volte in PBS effettuare reazione colorata dalla soluzione avidina / biotina-complesso (ABC) e la diaminobenzidina (DAB) substrato secondo le istruzioni del produttore.
- 5.11. Smettere di reazione trasferendo sezioni doppio acqua distillata, di contrasto con ematossilina e montare le sezioni con un mezzo di montaggio sintetico.
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Risultati
L'analisi in vitro dei composti target in 3D mieloma multiplo test spheroid
A causa delle limitazioni di coltura di cellule primarie umane di MM in vitro abbiamo stabilito nuovi modelli di coltura in vitro 3D per linee cellulari MM umane che fanno uso di una matrice extracellulare crescita e cellule mesenchimali umane primarie di supporto dal midollo osseo (Figura 1A, B). Linee cellulari di MM transgenici EGFP consentono la vis...
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Discussione
Lo sviluppo di nuovi agenti terapeutici per refrattario MM richiede meno tempo e costosi sistemi in vivo per valutare la sensibilità di cellule MM umane ai farmaci. Finora, solo pochi sistemi in vivo sono a disposizione per la valutazione preclinica di nuove terapie anti-mieloma. Tutti loro hanno i loro limiti per lo screening su larga scala di librerie di composti 29.
I migliori modelli attuali di cellule di MM umane sono altamente immuni topi con deficit 7,13,30 ed embrioni di tacchi...
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi finanziari in competizione
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare la signora Cornelia Heis per la sua eccellente assistenza tecnica nell'immunoistochimica e nella preparazione degli embrioni di pollo. Questo lavoro è stato sostenuto dal Fondo austriaco per la scienza (FWF Grant No. P19552) e dall'Unione Europea (EU FP7 project Optatio No: 278570).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Cellule RPMI-8226 | DSMZ | ACC 9 | STR profilate |
| Cellule OPM-2 | DSMZ | ACC 50 | STR profilate |
| Cellule staminali mesenchimali umane | PromoCell | PC-C-12974 | |
| HEK293FT celle | Invitrogen | R700-07 | |
| RPMI1640 Medium | Sigma Aldrich | R0883 | |
| Siero fetale bovino HyClone | ThermoScientific | SH30070.03 | |
| L-Glut- Pen- Soluzione per streptococco | Sigma | G6784 | |
| DMEM Medium | Gibco | 31966 | |
| NEAA | Sigma Life Sciences | M7145 | |
| Transfection Medium/Opti-MEM | Gibco | 51985 | |
| particelle lentivirali eGFP | GeneCopoeia | LPP-EGFP-LV105 | Particelle virali pronte all'uso |
| pLenti6/V5Dest6 vettore eGFP | Invitrogen | PN 35-1271 | dagli autori |
| Mix di imballaggio ViralpowerTM | Invitrogen | P/N 35-1275 | |
| Reagente di trasfezione/ Lipofectamin 2000 | Invitrogen | 11668-027 | |
| Blasticidina | Invitrogen | R210-01 | |
| Neomicina | Biochrom | A2912 | |
| Collagene-Type1 Coda di ratto | BD Biosciences | 354236 | |
| polvere DMEM | Technologies | Art.Nr. 10338582 | |
| plitidepsin | Pharmamar | ||
| bortezomib | LKT Lab., Inc. | B5871 | |
| SPF-uova di gallina bianche | Charles River | Fecondate bianche livornesi uova di gallina | |
| Barche di pesatura in plastica | neoLab | Art.Nr. 1-1125 | per coltura ex-ovo |
| Quadrato petridish (coperchi) | Simport | D210-16 | per coltura ex-ovo |
| RIPA Buffer (10x) | Segnalazione cellulare | #9806 | |
| Proteasi Compresse inibitrici | Roche | 11 836 170 001 | |
| Mini completo senza | |||
| GFP ELISA | Cell Biolabs, Inc. | AKR-121 | |
| Histocette II | Simport | M493-6 | |
| PFA 37% | Roth | 7398.1 | |
| DPBS | Lonza | BE17-512F | |
| Etanolo assoluto | Normapur | 20,821,321 | |
| Roti-Histol | Roth | Art.Nr.6640.4 | |
| Paraplast | Sigma | A6330 | |
| Vetrini per microscopio SuperFrost R | . Langenbrinck | Art.-Nr. | |
| Labor- u. Medizintechnik | 03-0060 | ||
| DakoCytomation Wash Buffer 10x | DakoCytomation | Codice-Nr. | |
| S 3006 | |||
| Soluzione di recupero target (10x) pH 6,1 | Codice DAKO | Nr. | |
| S 1699 | |||
| H2O2 | Merck | ||
| m-a-hu Clone ASMA 1A4 | DAKO | M0851 | |
| m-a-hu CD138 clone MI15 | DAKO | M7228 | |
| m-a-hu Clone Vimentin V9 | DAKO | M0725 | |
| m-a-hu Desmin clone D33 | DAKO | M0760 | |
| m-a-hu Ki67 clone MIB-1 | DAKO | M7240 | |
| capra biotinilata- anti-topo IgG | Vector Laboratories Inc. | BA-9200 | |
| Vectastain Elite ABC Kit | Vector Laboratories Inc. | # Set di tablet PK-6100 | |
| FAST DAB. | Sigma Biochemicals | # D4293 | |
| Mayer' s haemalaun solution | Merck | 1,092,490,500 | |
| Roti Histokitt | Roth | Art.Nr.6638.2 | |
| Microtomo rotativo da banco | Thermo Electron, Shandon Finesse ME+ | ||
| Stazione di inclusione tissutale | Leica, TP1020 | ||
| Incubatrice per uova | Grumbach | BSS160 | |
| Microscopio a stereofluorescenza dotato di una fotocamera digitale collegata (Olympus E410) e luce fredda flessibile. | Olimpo, SZX10 | ||
| Ultra Turrax | Omogeneizzatore | IKA T10 |
Riferimenti
- Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
- Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
- Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058(2014).
- Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
- Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
- Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
- Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
- Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
- Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
- Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
- Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
- Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
- Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
- Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
- Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
- Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
- Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
- Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
- Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
- Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
- Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
- Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
- Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
- Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
- Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
- Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501(2012).
- Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56(2013).
- Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34(2006).
- Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
- Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
- Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
- Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
- Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
- Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
- Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).
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Ristampe e permessi
