Istituzione di un mieloma multiplo umano Xenograft modello nel pollo per studiare la crescita del tumore, invasione e l&#39;angiogenesi

Agnieszka Martowicz; Johann Kern; Eberhard Gunsilius; Gerold Untergasser

doi:10.3791/52665

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Articolo metodologico

Istituzione di un mieloma multiplo umano Xenograft modello nel pollo per studiare la crescita del tumore, invasione e l'angiogenesi

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DOI:

10.3791/52665

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1 maggio 2015

Agnieszka Martowicz^*¹^,⁴ , Johann Kern^*¹^,² , Eberhard Gunsilius¹ , Gerold Untergasser¹^,³

¹Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, ²Oncotyrol GmbH, ³Tyrolean Cancer Research Institute, ⁴Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Mieloma multiplo (MM), le cellule umane richiedono il microambiente favorevole cellule mesenchimali e componenti della matrice extracellulare per la sopravvivenza e la proliferazione. Abbiamo stabilito un vivo pollo modello embrione con cellule di mieloma e mesenchimali umane trapiantate per studiare gli effetti dei farmaci anti-tumorali sulla crescita del tumore, l'invasione e l'angiogenesi.

Abstract

Il mieloma multiplo (MM), una malattia delle cellule del plasma maligne, resta incurabile e nuovi farmaci sono necessari per migliorare la prognosi dei pazienti. A causa della mancanza del microambiente dell'osso e fattori di crescita auto / paracrino cellule MM umane sono difficili da coltivare. Pertanto, non vi è un urgente bisogno di stabilire una corretta in vitro e in sistemi di coltura in vivo per studiare l'azione di nuove terapie sulle cellule umane di MM. Presentiamo qui un modello di crescere cellule di mieloma multiplo umano in un ambiente 3D complesso in vitro e in vivo. Linee cellulari di MM OPM-2 e RPMI-8226 sono state trasfettate per esprimere la GFP transgene e sono stati coltivati in presenza di cellule mesenchimali umane e collagene di tipo I matrice come sferoidi tridimensionali. Inoltre, sferoidi sono stati innestati sulla membrana corioallantoidea (CAM) di embrioni di pollo e la crescita del tumore è stata monitorata mediante microscopia a fluorescenza stereo. Entrambi i modelli consentono lo studio del romanzo dru terapeuticogs in un ambiente 3D complesso e la quantificazione della massa tumorale dopo omogeneizzazione di innesti in un GFP-ELISA specifico transgene. Inoltre, le risposte angiogenici dell'ospite e l'invasione delle cellule tumorali nel tessuto ospite soggiacente possono essere monitorate quotidianamente da un microscopio stereo e analizzati mediante immunoistochimica contro le cellule tumorali umane (Ki-67, CD138, Vimentin) o cellule murali ospiti che coprono i vasi sanguigni (desmin / ASMA).

In conclusione, il sistema permette onplant studiare crescita cellulare MM e l'angiogenesi in un ambiente 3D complesso e permette lo screening per composti terapeutici mirati sopravvivenza e la proliferazione delle cellule di MM.

Introduzione

Il mieloma multiplo (MM) è caratterizzato dalla proliferazione di plasmacellule maligne nel midollo osseo, lesioni ossee e immunodeficienza ¹. Sebbene siano disponibili nuove opzioni terapeutiche come gli inibitori del proteasoma (bortezomib) e i farmaci immunomodulatori (pomalidomide e lenalidomide), il MM rimane ancora un tumore maligno incurabile con una prognosi infausta ². La prognosi infausta potrebbe essere spiegata dalla straordinaria eterogeneità dei cloni di cellule di MM che contribuisce a risposte variabili alla terapia, in particolare in caso di trattamento a lungo termine e pressione di selezione dei cloni di MM ³.