Articolo metodologico

Rimozione di Oligoelementi per Cupric nanoparticelle di ossido di uranio da In Situ Recupero Bleed Acqua e il suo effetto sulla vitalità cellulare

DOI:

10.3791/52715

⸱

21 giugno 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Physical Therapy, Department of Orthopedics & Rehabilitation, University of New Mexico, 2Department of Ecosystem Science and Management, University of Wyoming, 3School of Pharmacy, University of Wyoming, 4Department of Environmental and Radiological Health Sciences, Colorado State University, 5Center for Environmental Medicine, Colorado State University, 6College of Pharmacy, California Northstate University

In questo articolo

Sommario

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L'acqua di spurgo di produzione (PBW) è stata trattata con nanoparticelle di ossido rameico (CuO-NPs) e la tossicità cellulare è stata valutata in cellule umane in coltura. L'obiettivo di questo protocollo è stato quello di integrare il campione ambientale nativo in un formato di coltura cellulare che valuti i cambiamenti di tossicità dovuti al trattamento con CuO-NP.

Abstract

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Recupero in situ (ISR) è il metodo predominante di estrazione di uranio negli Stati Uniti. Durante ISR, l'uranio è dilavati da una massa minerale e estratto attraverso scambio ionico. L'acqua di spurgo risultante produzione (PBW) contiene contaminanti quali arsenico e altri metalli pesanti. Campioni di PBW da un impianto di uranio ISR attivo sono stati trattati con nanoparticelle di ossido rameico (CuO-NP). Trattamento CuO-NP di pbw ridotto contaminanti prioritari, tra cui l'arsenico, selenio, l'uranio, e vanadio. Assay greggia e CuO-NP trattata PBW stato utilizzato come componente liquida dei terreni di crescita cellulare e cambiamenti di redditività sono stati determinati dalla MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio bromuro) in rene umano embrionale (HEK 293) ed il carcinoma epatocellulare umano (Hep G2) cellule. Trattamento CuO-NP è stata associata con una migliore HEK e vitalità cellulare HEP. Limiti di questo metodo includono la diluizione del PBW da componenti multimediali di crescita e durante osmolRegolazione nalità così come la regolazione del pH necessario. Questo metodo è limitato nel suo contesto più ampio a causa di effetti di diluizione e cambiamenti nel pH del PBW che è tradizionalmente leggermente acida tuttavia; questo metodo potrebbe avere un uso più ampio valutare trattamento CuO-NP in acque più neutri.

Introduzione

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Circa il 20% della fornitura elettrica degli Stati Uniti è fornito da energia nucleare e, in parte basato su incentivi nazionali per aumentare l'indipendenza energetica, Stati Uniti è previsto capacità nucleare per aumentare 1. Crescita mondiale dell'energia nucleare dovrebbe inoltre continuare, con gran parte della crescita che si verificano al di fuori degli Stati Uniti 2. Dal 2013, l'83% degli Stati Uniti di uranio è stato importato, ma esistono 952.544 tonnellate di riserve negli Stati Uniti 3,4. Nel 2013 ci sono stati 7 nuove applicazioni impianto e applicazioni 14 riavvio / dilatazione tra Wyoming, New Mexico, e Nebraska 5. Negli Stati Uniti, l'uranio viene estratto attraverso prevalentemente recupero in situ (ISR) i procedimenti 6. ISR provoca meno disagi terra ed evita la creazione di cumuli di raccolta degli sterili che possono rilasciare contaminanti ambientali 7. ISR utilizza soluzioni ossidanti a base acquosa per lisciviare uranio dal corpo minerale sotterranea, dopo di che l'uranio viene estratto dal percolato attraversoun processo di scambio ionico 8. Per mantenere un equilibrio idrico negativo nel corpo minerale, una porzione del percolato, chiamato produzione sanguinare acqua (PBW), si spurga off. Una porzione del PBW viene decontaminato mediante osmosi inversa (RO), e reintrodotto nel processo di estrazione, ma PBW potrebbe anche avere usi industriali o agricole benefiche, se contaminanti tossici possono essere ridotti a livelli accettabili determinati dalla statali agenzie normative per superficie e sotterranee 9. Attualmente, la maggior parte delle strutture di uranio ISR usano RO per rimuovere i contaminanti da PBW. Tuttavia, l'elaborazione RO è ad alta intensità energetica e produce salamoia rifiuti tossici, che richiede lo smaltimento regolamentato.

Esistono molti metodi di decontaminazione dell'acqua, tra cui adsorbenti, membrane e scambio ionico. Di questi, l'adsorbimento è il più comunemente usato, ei recenti sviluppi nella sintesi di nanoparticelle ha migliorato le funzionalità di base di adsorbenti acqua decontaminazione processi 10. Oxi Cupricde nanoparticelle (CuO-NP) in precedenza non erano state ampiamente studiate sull'uranio ISR PBW, ma in recenti studi di rimozione dei contaminanti dalle acque sotterranee, CuO-NP sono stati trovati ad avere proprietà uniche, tra cui non richiede fasi di trattamento pre o post-acqua ( ad esempio, la regolazione del pH o potenziale redox) e rendimento in diverse composizioni di acqua (ad esempio, in diversi pH, concentrazioni di sale, o ioni concorrenti) 11. Inoltre, CuO-NP sono facilmente rigenerato mediante esaurimento con idrossido di sodio (NaOH), dopo di che il rigenerato CuO-NP può essere riutilizzato. Dettagli di CuO-NP capacità di filtraggio traccia di metallo dalle acque naturali sono stati precedentemente pubblicati 11-14.

Sebbene utili per il trattamento dell'acqua, nanoparticelle di ossido di metallo possono essere tossiche per gli organismi viventi, ma la misura della tossicità dipende, in parte, sulle caratteristiche nanoparticelle e costituenti 10,15,16. Pertanto, è importante studiare simultaneous contaminanti rimozione e nanoparticelle tossicità prima di applicazioni sul campo. L'attuale studio ha determinato la capacità di CuO-NP per rimuovere i contaminanti prioritari PBW (tra cui l'arsenico, selenio, vanadio e uranio), e ha valutato l'effetto del trattamento CuO-NP su PBW citotossicità.

PBW stato raccolto da una struttura di uranio ISR attivo e utilizzato per determinare l'efficacia del trattamento CuO-NP in rimozione dei contaminanti priorità. PBW citotossicità prima e dopo il trattamento CuO-NP è stato anche valutato. PBW è un complesso geologico miscela (industriale / ambientale) e dal National Institute of Environmental Health and Science (NIEHS) e l'Agenzia per le sostanze tossiche e delle malattie del Registro di sistema (ASTDR) sono ponendo l'accento sullo studio della tossicità di miscele di rilevanza ambientale, comprese le miscele come esistono in natura o industriali impostazioni, così come la promozione in test in vitro per la priorità prodotti chimici per ulteriori test in vivo17-19. Studi di cronica, a basso dosaggio esposizioni miscela sono difficili perché l'esposizione cronica a una miscela di bassa dose non produce effetti evidenti, almeno non nel breve lasso di tempo della maggior parte degli studi di laboratorio. Analogamente, più in studi in vitro di miscele chimiche esporre le cellule ad una miscela laboratorio misura definita di 2 o più metalli 20,21. Questi studi forniscono informazioni di base, ma le miscele semplificate non replicano le complesse interazioni antagoniste e sinergici che possono verificarsi in un campione ambientale natale, dove la gamma completa di componenti della miscela sono presenti.

Gli obiettivi di questo studio erano di esaminare i processi di rimozione dei contaminanti alternative per PBW e per valutare l'effetto di (CuO-NP) trattamento in PBW citotossicità utilizzando cellule umane in coltura. I risultati potrebbero beneficiare l'industria dell'uranio attraverso lo sviluppo di metodi più efficienti o ecologici per la rimozione dei contaminanti. Questo studio forniscela prima evidenza che la riduzione dei contaminanti prioritari PBW da CuO-NP riduce citotossicità in cellule di mammifero 22.

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Protocollo

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Tutti i campioni sono stati raccolti presso la sede di elaborazione liquido dell'uranio di un impianto ISR uranio in Wyoming.

1. Produzione Bleed Water (PBW)

  1. Raccogliere due tipi di campioni d'acqua da un impianto di uranio ISR: PBW e osmosi (RO) acqua retromarcia. Raccogliere PBW da un rubinetto monitoraggio dopo il processo di scambio ionico ma prima di osmosi inversa decontaminazione. Raccogliere campioni RO dopo il PBW è decontaminato da un trattamento di osmosi inversa.
    NOTA: lixiviant è trasportato nelle condotte dai campi più oltre alla costruzione trasformazione liquido uranio, dove viene raccolta in una colonna e preparata per scambio ionico. Circa 1-3% del lixiviant dopo scambio ionico viene rimosso dal circuito e acqua di spurgo produzione definito (PBW). PBW viene riutilizzato nel processo di estrazione o decontaminata / demineralizzata con filtrazione RO.
  2. Raccogliere campioni di acqua in polietilene ad alta densità (HDPE), con spazio di testa zero in basedi procedure operative standard per la raccolta e l'analisi del Dipartimento Wyoming di Qualità Ambientale (WYDEQ) 23 campioni.
  3. Misurare la temperatura e pH in loco e campioni di trasporto sul ghiaccio per mantenerli freschi.
  4. Conservare PBW a 4 ° C. Mantenere la soluzione PBW fresco fino a dopo minimo supporto essenziale (EMEM-10x) il concentrato dell'Aquila viene aggiunto durante la preparazione dei media come indicato nella seguente protocollo.
    NOTA: PBW è una soluzione ossidata che precipiterà se lasciato congelare o riscaldare a temperatura ambiente. Dopo diluizione la soluzione PBW è sufficientemente diluito che non precipitare quando riscaldato a 37 ° C prima dell'applicazione alle cellule e durante l'incubazione.

2. Preparazione di CuO nanoparticelle (CuO-NP)

  1. Combinare una soluzione etanolica puro contenente 250 ml di 0,2 M CuCl 2 • 2H 2 O, 250 ml di 0,4 M di idrossido di sodio (NaOH), e 5 g di polietilene glicole (PEG) in un pallone a fondo tondo con sei millimetri sfere di vetro borosilicato.
  2. Posizionare la soluzione in un forno a microonde modificato e lasciare reagire a riflusso a pressione ambiente per 10 min a 20% di potenza (intervalli di 6 secondi su, 24 sec spento).
  3. Raffreddare la soluzione a temperatura ambiente (20 ° C), quindi travasata in 50 ml provette coniche, lasciando le sfere di vetro.
  4. Centrifugare la soluzione in 50 ml provette coniche a 1.000 xg per 30 min, decantata, e quindi lavare il CuO-NP con una sequenza di 300 ml di acqua calda (60-65 ° C), 100 ml di etanolo e 100 ml di acetone.
  5. Essiccare il CuO-NP a temperatura ambiente (20 ° C) in 50 ml provette coniche.
  6. Raschiare il CuO-NP di loro tubi in un mortaio. Coprire il CuO-NP con carta stagnola e riscaldare il CuO-NP a 110 ° C in un forno per rimuovere il liquido rimanente. Combina CuO-NP in una partita e pesare il CuO-NP.
    NOTA: La preparazione di CuO-NP e trattamento CuO-NP di PBW sono state condotte in acqua Quallità Laboratorio di Scienza e Ecosystem Management, Università di Wyoming. CuO-NP sintesi seguito la procedura di Martinson e Reddy (2009) 11.

3. Il trattamento di PBW con CuO-NP

  1. Aggiungere 50 mg (1 mg / ml) di CuO-NP in una provetta da 50 ml seguita da 50 ml di PBW. Sigillare il tubo e fatta reagire per 30 min su un banco superiore agitatore orbitale a 250 rpm.
  2. Tubi campione centrifugare a 250 xg per 30 min e poi filtrare il supernatante usando un filtro a siringa da 0,45 micron. Modificare la velocità della centrifuga e il tempo può dipendere dalla nanoparticella di garantire la CuO-NP diventa compatta nella provetta da centrifuga.

4. Analisi elementare

  1. Preparare greggia (controllo) e campioni pbw CuO-NP-trattati per analisi elementare come segue.
  2. Acidificare aliquote (40 ml) di CuO-NP-trattati e non trattati con acido nitrico PBW grado traccia di metallo ad un pH di 2,0. Analizzare acidificate aliquote PBW per cationi di coupl induttivamenteed plasma-massa spettroscopia (ICP-MS) come descritto in Reddy e Roth (2012) 13.
  3. Preparare aliquote unacidified (20 ml) di CuO-NP-trattati e non trattati PBW e analizzare le aliquote unacidified per anioni di cromatografia ionica (IC) come descritto in Reddy e Roth (2012) 13.
    NOTA: Aliquote sono stati analizzati dal Dipartimento di Agricoltura Wyoming Analytical Services, Laramie WY 82070. Una descrizione della procedura di IC e ICPMS può essere trovato in Reddy e Roth, (2012) 13.

5. Preparazione di colture cellulari supporti Utilizzo PBW

  1. Utilizzare due di controllo (EMEM-1x e RO + media) e otto soluzioni multimediali prova PBW (quattro concentrazioni ciascuno di PBW non trattati e dei media CuO-NP-trattati) negli studi di fattibilità. Panoramica delle soluzioni sono le seguenti:
    1. Per il controllo EMEM-1x, l'acquisto di mezzi di comunicazione essenziale minimo di Eagle (EMEM-1x) con L-glutammina e bicarbonato di sodio già aggiunto. Aggiungere siero fetale bovino (FBS) E gli antibiotici per le istruzioni del produttore.
      NOTA: EMEM-1x viene acquistato diluito alla concentrazione appropriata per la crescita cellulare e contenente L-glutammina e bicarbonato di sodio. EMEM-1x richiede l'aggiunta di siero bovino fetale (FBS) e una miscela antibiotico della penicillina e streptomicina (50 UI / ml di penicillina e 50 mg / ml di streptomicina). EMEM-1x è usato come mezzo di controllo, perché è terreno di coltura consigliata dal costruttore per entrambi i tipi di cellule utilizzate in questo studio. Concentrato EMEM-10x viene diluito con acqua RO dalla struttura o non trattati o CuO-NP-trattati PBW per produrre le soluzioni di prova. Concentrato EMEM-10x se acquistato non contiene L-glutammina o bicarbonato di sodio per cui questi vengono aggiunti in aggiunta al siero fetale bovino (FBS) e una miscela antibiotico della penicillina e streptomicina.
    2. Per la soluzione di controllo RO RO utilizzare acqua raccolti dalla struttura di ISR. Utilizzare lo stesso protocollo mezzi di prova PBW sostituire solo il 100% RO water dalla struttura ISR al posto di PBW. Per diluire l'acqua non trattata e uso soluzione CuO-NP-trattati con RO o ultrapura dal laboratorio.
    3. Diluire trattata PBW in quattro concentrazioni di prova prima della miscelazione con i componenti di colture cellulari multimediali. Preparare i quattro differenti concentrazioni di soluzioni PBW trattati miscelando greggia PBW con RO (da laboratorio) nelle seguenti combinazioni: 100% (PBW puro + acqua RO), 75% (187,5 ml di PBW + 62,5 ml di acqua RO), 50% (125 ml di PBW + 125 ml di acqua RO) o 25% (62,5 ml di PBW + 187,5 ml di acqua RO).
    4. Diluire CuO-NP-trattata PBW in quattro concentrazioni di prova prima della miscelazione con i componenti di colture cellulari multimediali. Preparare i quattro differenti concentrazioni di soluzioni PBW CuO-NP-trattati mescolando PBW (pre-trattati con 1 mg / ml CuO-NP per 30 min) con RO (da laboratorio) nelle seguenti combinazioni: 100% (CuO- puro PBW NP-trattati + senza acqua RO), il 75% (187,5 ml di CuO-NP trattati PBW + 62,5 ml acqua RO), il 50% (125ml di CuO-NP-trattata PBW + 125 ml di acqua RO) o del 25% (62,5 ml di PBW CuO-NP-trattati con + 187,5 ml di acqua RO).
  2. Preparare 250 ml di RO + media, PBW trattata + media e la concentrazione dei media PBW + CuO-NP-trattati con l'aggiunta di 25 ml di concentrato EMEM-10x a 190 ml di 100% RO e il 100%, il 75%, 50% o il 25% delle concentrazioni premade PBW non trattati o CuO-NP trattati creato al punto 6.1.3 e 6.1.4.
  3. Regolare il pH di ogni soluzione a 7,4 con NaOH o HCl.
  4. Supplemento ciascuna concentrazione della greggia e CuO-NP-trattati PBW nonché RO + supporto con i seguenti componenti standard: 25 ml (10%) di siero fetale bovino (FBS), 2,5 ml L-glutammina, 0,55 g NaHCO3 e 1,25 ml Pen / Strep (50 IU / ml di penicillina e 50 mg / ml di streptomicina).
  5. Regolare la osmolalità di ogni concentrazione di PBW trattata + media, CuO-NP-trattata PBW + media e RO + media per 290-310 mOsm / kg con l'aggiunta di acqua RO e misurare con un osmometro.
  6. Filtrare ogni soluzione conuna unità di 0,22 micron di vuoto filtro, e conservare a 4 ° C.
    NOTA: a causa di lievi variazioni nella quantità di acqua RO utilizzato per regolare osmolalità, variare le concentrazioni di media finali all'interno di un intervallo del 5%, con PBW trattata + concentrazioni dei media al 56%, 44%, 29% e 16,5% e CuO-NP trattati concentrazioni pbw + supporti al 53%, 45%, 30% e 17%.

Viabilità 6. cellulare

NOTA: Dato che reni e fegato sono gli organi bersaglio della tossicità dei metalli pesanti, impiegano renali embrionali umane (HEK293), le cellule in coltura (HEK) e carcinoma epatocellulare umano (HepG2) cellule (HEP) metodi di prova 24-26.

  1. Preparare una coltura di cellule HEK e HEP 2-3 giorni prima placcatura le piastre a 96 pozzetti utilizzati nell'esperimento le istruzioni del produttore.
  2. Misurare la vitalità cellulare utilizzando 3- [4, 5-dimetiltiazol-2-il] -2, 5-diphenyltetrazolium bromuro (MTT).
    NOTA: Il protocollo del saggio MTT è stato modificato da Meerloo et al. (2011) 27.
    1. Ottenere MTT in polvere. Aggiungere tampone fosfato (PBS) per costituire una concentrazione magazzino di 50 mg / ml. Agitare la soluzione per 2 ore e poi filtrare con un filtro siringa da 0,45 micron e aliquota in 1,5 ml congelatore tubi sicure. Proteggere i tubi di luce e conservare a 4 ° C.
  3. Rimuovere le cellule HEK e HEP dai loro piatti di coltura utilizzando tripsina, centrifugare a 1000 xg per 5 minuti e decantare la tripsina. Aggiungere 5 ml di PBS e mescolare le cellule per ottenere una soluzione singola cellula. Quindi, applicare 20 microlitri della soluzione di cellule singolo ad un emocitometro per ottenere un numero di cellule per millilitro di soluzione. Centrifugare le cellule di nuovo a 1000 xg per 5 minuti e decantare il PBS usato per sciacquare le cellule. Aggiungere la quantità appropriata di EMEM-1x per regolare la concentrazione di cellule di 500 cellule / 100 ml (100 ml / pozzetto).
  4. Riempire i pozzetti perimetrali della piastra con 200 l di PBS per controllare l'evaporazione.
  5. Cell Seeds ad una densità di 500 cellule / pozzetto aggiungendo 100 microlitri in ciascun pozzetto, ad eccezione dei pozzetti perimetrali (che non sono placcati con cellule).
    NOTA: densità di semina per cellule HEK e HEP è basato sulle curve di crescita sperimentali che consentono il picco di crescita si verifica intorno ai giorni 4-5. Preparare curve di crescita per tutte le linee cellulari di stimare la densità di semina.
  6. Incubare le cellule per 24 ore a 37 ° C che permette loro di recuperare (modulo adesioni stretti alla piastra) prima di effettuare le letture di base MTT di densità delle cellule.
  7. Eseguire letture MTT basali di densità cellulare rimuovendo il materiale di semina dalla prima colonna (escluso il perimetro) e aggiungendo 100 ml di MTT (5 mg / ml in media) ai pozzetti per 1 ora.
  8. Dopo un'ora, togliere il MTT e aggiungere 100 ml di dimetilsolfossido (DMSO) per sciogliere il MTT-formazan prodotto da cellule vitali (20 min).
  9. Leggere la densità ottica (OD) della prima colonna ad una lunghezza d'onda di assorbimento di 570 nm per ottenere una baselettura di riga.
    1. Utilizzare le letture di base al fine di garantire tutte le lastre sono state seminate in modo corretto e che le cellule sono in crescita costante tra le piastre. Rimuovere il DMSO dalla colonna in fase di sperimentazione prima di incubazione per le prossime 24 ore.
      NOTA: Se DMSO viene lasciato nella piastra notte tira l'umidità dalla colonna adiacente, causando una riduzione del volume del supporto.
  10. Riscaldare le soluzioni (cioè, il EMEM-1x, RO, PBW greggia e soluzioni PBW multimediali CuO-NP-trattati) a 37 ° C in un bagno d'acqua.
  11. Rimuovere il supporto semina dal resto della piastra (escluso il perimetro o la prima colonna che è stato utilizzato per la lettura basale) e sostituito con 100 ml di EMEM-1x, RO + multimediali, pbw greggia + supporti concentrazioni o CuO-NP PBW -treated + concentrazione dei media (una soluzione per piastra). Incubare le cellule nelle loro concentrazioni di prova o soluzioni di controllo per un totale di sette giorni (giorni 2-8).
    NOTA: 10 piatti totale: 1 EMEM-1x, 1 RO + media, 1 di ogni trattato concentrazione PBW + mezzi (56%, 44%, 29% e 16,5%) e un piatto di ciascuna concentrazione pbw + supporti CuO-NP-trattati (53%, 45% , 30% e 17%) per ogni esperimento per linea di cellule.
  12. Ogni giorno successivo al basale lettura MTT, rimuovere le soluzioni di controllo e di prova (elencati nella nota sotto 6.11) dalla colonna successiva della loro rispettiva piastra (es Day 2 mezzi di prova e di controllo vengono rimossi dalla riga 3, pozzi BG; 3 ° giorno: fila 4, pozzi BG ecc) e ripetere il protocollo MTT come descritto nei passaggi 6,7-6,9 sopra.
  13. Ripetere il protocollo ogni giorno per sette giorni. Calcolare la media dei risultati di OD per ogni riga (6 pozzi) e riportati contro il tempo per generare una curva di crescita di sette giorni.
  14. Per valutare l'effetto della chelazione rame sulla vitalità cellulare in PBW CuO-NP-trattati + supporti seguire la stessa procedura come sopra, tranne aggiungere 100 mM di D-penicillamina controllare e soluzioni di prova prima di aggiungere le soluzioni alle loro rispettive piastre. Eseguire anale datiYsis utilizzando software grafici scientifici.

7. Modellazione geochimica

  1. Scarica la versione di Visual Minteq 3.0 / 3.1 un freeware dal seguente sito web http://www2.lwr.kth.se/English/Oursoftware/vminteq/ .
    Nota: Visual Minteq è un modello di equilibrio chimico freeware per il calcolo di speciazione metallo, equilibri di solubilità, assorbimento ecc per le acque naturali. Inoltre è utilizzato per prevedere speciazione ioni, le attività di ioni, complessi di ioni e gli indici di saturazione che viene confrontato con la concentrazione di elementi prima e dopo il trattamento (risultati spettroscopia di massa) per esaminare possibili meccanismi di rimozione dell'elemento 28.
  2. Aprite il programma e inserire i dati di spettroscopia di massa dal punto 4, tra cui il pH, l'alcalinità e le concentrazioni di diversi elementi, nel programma.
    NOTA: Dato che le acque sotterranee si ossida durante in situ Uranium processo di estrazione, utilizzare specie ossidate di arsenico, vanadio e uranio per l'ingresso.

8. inibitorio Concentrazione 50 (IC 50)

  1. Calcolare la IC50 per le concentrazioni PBW + supporti non trattati e CuO-NP-trattati con prima media la redditività (medie OD) il giorno 5 di tre sessioni di analisi separate.
  2. Sottrarre giorno cinque medie redditività delle PBW + multimediali concentrazioni non trattati e CuO-NP trattati dal giorno cinque medie vitalità di EMEM-1x per calcolare le differenze di vitalità. Poi dividere le differenze di vitalità da parte della redditività media al giorno 5 negli EMEM, e moltiplicare per 100 per ottenere per cento di inibizione.
  3. Sottrarre la percentuale di inibizione da 100 (EMEM-1x fattibilità) per ottenere la sostenibilità per cento per ogni PBW + concentrazione dei media non trattati e CuO-NP-trattata.
  4. Input in software grafici scientifica modificando EMEM-1x ad una concentrazione di uno e una vitalità percentuale di 100; trasformare tutte le concentrazioni in logscala (X = log (x)) ed eseguire la regressione lineare con minimo analisi in forma quadrata.

Analisi 9. Dati

  1. Confronta le concentrazioni di elementi in non trattati e CuO-NP-trattati PBW con due code, in coppia, Student T-test.
  2. Calcolare le aree sotto la curva (AUC), utilizzando i dati della curva della crescita raccolti in sette giorni e analizzare la varianza con ripetute analisi misure della varianza (ANOVA), seguita da post hoc di Tukey confronto tra tutti i gruppi (n = 3).
  3. Calcola il IC50 utilizzando dati provenienti da cinque giorni della curva di crescita sia per le soluzioni multimediali (di cui sopra) PBW + non trattati e CuO-NP-trattata. Valori di p <0,05 sono considerati significativi.
    NOTA: ai fini di analisi statistiche, i valori di spettroscopia di massa della metà del limite di rilevazione è stato assegnato a ioni concentrazioni livelli di sotto di tale limite 29.

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Risultati

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Concentrazioni dei componenti pbw e pH in greggia e CuO-NP-trattati PBW sono riportati in Tabella 1. Martinson e Reddy (2009), hanno riferito che il punto di carica zero del CuO-NP è stimato a 9.4 ± 0.4. Dato che il pH della PBW era 7,2-7,4, in queste condizioni, l'acqua dona protoni CuO-NP, causando la superficie delle nanoparticelle da caricare positivamente consentendo l'assorbimento di specie cariche negativamente. Trattamento CuO-NP rimosse contaminanti prioritari da PBW, tra l'arsenico, selenio, u...

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Discussione

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Precedenti studi hanno segnalato che CuO-NP rimosso l'arsenico dalle acque sotterranee 11,13,30,31. Questo studio supporta questi risultati precedenti e anche rapporti che CuO-NP rimuovere i contaminanti aggiuntivi da PBW. Questo studio conferma anche precedenti relazioni che CuO-NP sono efficaci a rimozione dell'arsenico, nonostante la presenza di altri contaminanti e potenziali ioni concorrenti 11. Modellazione speciazione ha previsto che il 97% delle specie di vanadio in PBW sono a caric...

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Ringraziamo il Dr. Roger Hopper e il Dipartimento dell'Agricoltura del Wyoming, Analytical Services Lab per l'analisi di spettroscopia di massa dei nostri campioni. Vorremmo esprimere la nostra gratitudine all'Università del Wyoming, School of Pharmacy per averci permesso di filmare questo protocollo nei loro laboratori. Vorremmo anche ringraziare l'Accordo di Cattedra di Theodore O. e Dorothy S. King per il loro assistentato universitario (SC), l'Università del Wyoming per il supporto dell'Assistentato Laureato (JRS) e la Science Posse (NSF GK-12 Project # 084129) per la borsa di studio per l'insegnamento (JRS). Vorremmo anche ringraziare Uranium One per averci permesso di ottenere campioni e per averci assistito con le domande. Questo lavoro è stato sostenuto dalla School of Energy Resources, Università del Wyoming.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
CuCl2Sigma203149
sfere di vetro borosilicatoVWR26396-6396 mm
Acido nitricoFisherA509-P500Tracce di metallo grado
0,45 μ m filtro siringaFisherSLHA 033S S
10x EMEMFisherBW12-684F
Siero fetale bovino ATCC30-2020
L-glutamminaFisherBP379-100
NaHCO3SigmaS5761
Penicillina/StreptomicinaATCC30-2300
0,22 μ m unità filtrante sottovuotoFisher09-740-28C
HEK293ATCCCRL-1573
HEPG2ATCCHB-8065
TripsinaSigmaSV3003101
MTTSigmaM2128
D-penicillaminaFisherICN15180680
piastre a 96 pozzettiFisher07-200-92
DMSOFisherD12814
Spectra Max 190Molecular Devices
Visual MINTEQ versione 3.0KTH Royal Institute of Technology
ICP-MSAgilentI dettagli di strumenti, modelli e limiti di rilevamento sono stati pubblicati in Reddy et al., 2013.
IC DIONEX DX 500DionexI dettagli degli strumenti, dei modelli e dei limiti di rilevamento sono stati pubblicati su Reddy et al., 2013.
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Riferimenti

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