Descriviamo un protocollo per l'innesto di interposizione aortica nei topi. L'obiettivo del protocollo è quello di fornire un modello con cui studiare i processi patologici e le strategie terapeutiche rilevanti per le reazioni alloimmuni nelle arterie e le conseguenti modificazioni arteriose che contribuiscono al fallimento del trapianto d'organo.
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Articolo metodologico
Modello murino della alloimmune indotta Rifiuto vascolare e trapianto Arteriosclerosi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il rigetto vascolare che porta all'arteriosclerosi da trapianto (TA) è la principale rappresentazione del fallimento cronico del trapianto di cuore. Nella TA, il sistema immunitario del ricevente provoca danni alla parete arteriosa e disfunzione delle cellule endoteliali e delle cellule muscolari lisce. Ciò innesca una risposta di riparazione patologica caratterizzata da ispessimento intimale e occlusione luminale. La comprensione dei meccanismi con cui il sistema immunitario causa il rigetto vascolare e l'AT può informare lo sviluppo di nuovi modi per gestire il fallimento del trapianto. Qui, descriviamo un modello murino di interposizione aortica che può essere utilizzato per studiare i meccanismi patogenetici del rigetto vascolare e della TA. Il modello prevede l'innesto di un segmento aortico da un animale donatore in un ricevente allogenico. Il rigetto del segmento arterioso comporta reazioni alloimmuni e provoca alterazioni arteriose che assomigliano al rigetto vascolare. L'approccio tecnico di base che descriviamo può essere utilizzato con diversi ceppi di topo e interventi mirati per rispondere a domande specifiche relative al rigetto vascolare e all'AT.
Introduzione
Nel corso degli ultimi 30 anni, i progressi in materia di farmaci immunosoppressori sono diminuiti rigetto del trapianto a causa di rigetto acuto, ma il rigetto cronico rimane una sfida. La manifestazione principale del rigetto del trapianto cardiaco cronico è arteriosclerosi trapianto (TA) 1,2. Questa condizione è caratterizzata da iperplasia intimale e vasomotoria disfunzione delle arterie allogenico e si sviluppa come risultato di immunologica Il targeting delle cellule muscolari lisce endoteliali e dal sistema immunitario ricevente. La gestione mirata del sistema vascolare del trapianto a causa di riconoscimento del complesso di istocompatibilità stran....
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Protocollo
Tutti i protocolli di questo studio sono stati esaminati e approvati dal comitato etico per la cura degli animali Simon Fraser University. Utilizzare Balb / CYJ (H2 d) topi donatori e topi C57BL / 6 (H2 b) destinatario per esaminare le reazioni allogeniche. I topi sono utilizzati per esperimenti di età compresa tra 8 a 12 settimane tra. Utilizzare i topi o sesso femminile o maschile. Controlli singenico costituiti da segmenti aortici da C57Bl / 6 donatori in C57BL / 6 destinatari.
1. donatore e del ricevente Preparazione
Nota: Sia il donatore e il ricevente sono anestetizzati e preparati prima della chirurgia p....
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Risultati
In questo modello, l'aorta addominale da un topo Balb / CYJ è interposto in aorta sottorenale di un / 6 ricevente C57Bl. Questo permette una valutazione completa di alloimmuni risposte che colpiscono le arterie trapianto allogenico. Danno vascolare Immune-mediata in questo modello inizia risposte riparative vascolari che culminano in ispessimento dell'intima, restringimento del lume e il reclutamento di cellule immunitarie (figure 1 e 2). Questi criteri agiscono come uno-out let.......
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Discussione
Abbiamo descritto un protocollo per interposizione aortica innesti in topi che è utile per studiare il rigetto vascolare immunomediata e TA. Questo modello può essere utilizzato per analizzare le cause dei TA nonché lo sviluppo di nuove strategie terapeutiche. E 'stato usato in passato per stabilire un ruolo essenziale di immunità adattativa, citotossici risposte delle cellule T, le risposte effettrici CD4 T cellule citochine-mediata, e danni trapianto mediata da anticorpi in TA 14,17-21. Trapianto Artery.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal Canadian Institutes of Health Research e Heart and Stroke Foundation of BC & Yukon (CCM).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| C57BL/6J (H-2b) | Jackson Laboratories, Bar Harbour ME | Strain# 000664 | |
| Balb/cBYJ | Jackson Laboratories, Bar Harbour ME | Strain# 001026 | |
| Ketamina cloridrato Iniezione USP 100 mg/ml | Ketalean | DIN 00612316 | |
| Xilazina Iniezione 20 mg/ml | Rompum | DIN 02169592 | |
| Ketoprofene Iniezione 100 mg/ml | Anafen | DIN 01938126 | |
| Butorphanol Tartrato iniezione 10 mg/ml | Torbugesic | DIN 008450000 | |
| Buprenorfina Iniezione 0,3 mg/ml | Reckitt Benckiser | B.N. 5241 | |
| Atipamezole cloridrato soluzione iniettabile sterile | Antisedan | DIN 02237744 | |
| Eparina Iniezione di sodio, USP, 1.000 unità/ml | McKesson Distribuzione | DIN 02264315 | |
| Lacrime unguento oftalmico naturale | Alcon | DIN 02082519 | |
| Stereomicroscopio | Leica | M80 | |
| 0,9% cloruro di sodio, sterile | Baxter Corporation | ||
| Ringer lattato s soluzione, sterile | Baxter Corporation | ||
| Cloruro di sodio 0,9% per iniezione, sterile, 10 ml | Baxter Corporation | ||
| Tamponi per la preparazione dell'alcol | Loris | ||
| Povidone Iodio | Betadina | ||
| Cloroesidina Gluconato 4% w/v | Germi-Stat | ||
| Monofilamento di poliammide nero | AROSurgical Strumenti | T4A10Q07 | |
| Sutura, sutura 10-0, 70 micron | Corporation | ||
| Sutura monofilamento blu 5-0, ago P3 | Ethicon | 8698G | |
| Siringa da 1 ml | BD | REF 309659 | |
| Siringa | |||
| da 1 cc TB per insulina con 28 G 1/2 | BD | REF 309309 | |
| 25 G 7/8, ago ipodermico | BD | REF 305124 | |
| 27 G 1/2, ago ipodermico | BD | REF 305109 | |
| Divaricatore Colibrì - 1,5 cm di diffusione 4 cm | Fine Science Tools | 17000-04 | |
| S& T CAF-4 Pinze per l'applicazione di clip, senza blocco | Fine Science Tools | 00072-14 | |
| Pinze Supergrip, S& T | Fine Science Tools | 00632-11 | |
| Medical No.5 pinze | Fine Science Tools | 11253-20 | |
| Lexer Baby Scissors | Fine Science Tools | 14078-10 | |
| Micro Adson forcipe seghettato | Fine Science Tools | 11018-12 | |
| Vannas-Tubingen microforbici | Fine Science Tools | 15003-08 | |
| Micro morsetti, b-1; 3,5 mm x 1 mm; 7 mm di lunghezza | Fine Science Tools | 00396-01 | |
| Graefe-pinze, 10 cm 1x2 denti | Fine Science Tools | 11054-10 | |
| Castroviejo con blocco e ganasce in tungsteno | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| Sterilizzatore a caldo per perle di vetro | Inotech 250 | IS-250 - Steri-250 | |
| Garze in tessuto non tessuto | Progene | ||
| Cotton Tipped Applicatori | Puritan | ||
| Beard Trimmer | Wahl | ||
| Termoforo | Sunbeam |
Riferimenti
- Billingham, M. E. Graft coronary disease: the lesions and the patients. Transplant Proc. 21, 3665-3666 (1989).
- Foegh, M. L. Chronic rejection--graft arteriosclerosis. Transplant Proc. 22, 119-122 (1990).
- Libby, P., Pober, J. S.
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Ristampe e permessi
