Articolo metodologico

Registrazione potenziale evocato visivo in un modello murino di sperimentale del nervo ottico demielinizzazione

DOI:

10.3791/52934

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29 luglio 2015

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1Department of Ophthalmology, Australian School of Advanced Medicine, Macquarie University, 2Save Sight Institute, The University of Sydney

In questo articolo

Sommario

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La demielinizzazione focale viene indotta nel nervo ottico utilizzando la microiniezione di lisolecitina. I potenziali evocati visivi vengono registrati tramite elettrodi del cranio impiantati sulla corteccia visiva per esaminare la conduzione del segnale lungo la via visiva in vivo. Questo protocollo descrive in dettaglio le procedure chirurgiche alla base dell'impianto di elettrodi e della microiniezione del nervo ottico.

Abstract

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La registrazione del potenziale evocato visivo (VEP) è ampiamente utilizzata nella pratica clinica per valutare la gravità della neurite ottica nella sua fase acuta e per monitorare il decorso della malattia nel periodo di follow-up. I cambiamenti nei parametri VEP sono strettamente correlati al danno patologico nel nervo ottico. Questo protocollo fornisce una descrizione dettagliata del modello di roditore di microiniezione del nervo ottico, in cui viene prodotta una lesione da demielinizzazione parziale nel nervo ottico. Vengono inoltre discusse le tecniche di registrazione VEP. Utilizzando elettrodi impiantati nel cranio, siamo in grado di acquisire tracce VEP riproducibili durante e tra una sessione e l'altra. I VEP possono essere registrati su singoli animali per un periodo di tempo per valutare i cambiamenti funzionali nel nervo ottico longitudinalmente. Il modello di demielinizzazione del nervo ottico, in combinazione con il protocollo di registrazione VEP, fornisce uno strumento per studiare i processi patologici associati alla demielinizzazione e alla rimielinizzazione e può potenzialmente essere impiegato per valutare gli effetti di nuovi farmaci rimielinizzanti o terapie neuroprotettive.

Introduzione

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La neurite ottica è una delle forme più comuni di neuropatia ottica, che causa la perdita totale o parziale della vista1. Istologicamente, è caratterizzata da demielinizzazione infiammatoria, perdita assonale delle cellule gangliari retiniche e vari gradi di rimielinizzazione nel nervo ottico2. La neurite ottica è solitamente l'esordio manifesto della sclerosi multipla. Il potenziale evocato visivo (VEP) è uno strumento non invasivo per studiare la funzione del sistema visivo. Riflette la funzione post-retinica dalla retina alla corteccia visiva primaria ed è influenzata in molte condizioni di malattia del nervo ottico3. Il VEP è stato....

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Protocollo

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Etica Dichiarazione: Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state condotte in conformità con il Codice di condotta australiano per la cura e l'uso di animali a scopi scientifici e gli orientamenti della Dichiarazione ARVO per l'uso di animali in Oftalmica e Vision Research, e sono stati approvati dalla Animal Comitato Etico della Macquarie University.

1. VEP elettrodi impianto

  1. Anestetizzare l'animale con una iniezione intraperitoneale di ketamina (75 mg / kg) e medetomidina (0,5 mg / kg).
    Nota: Dopo l'induzione dell'anestesia, osservare i riflessi di prelievo (test pizzico, riflessi corne....

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Risultati

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Riproducibili PEV tracce intra-sessione sono mostrati in Figura 1 e un significativo ritardo nella latenza N1 possono essere osservati dopo l'iniezione nervo ottico. Lesioni del nervo ottico parziali di demielinizzazione può essere osservato su sezioni istologiche utilizzando Luxol veloce colorazione blu 5. La Figura 2 mostra una sezione rappresentativa con una piccola lesione demyelinated focale nel centro del nervo ottico. Si noti che la sezione trasversale non rappresenta .......

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Discussione

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Il nervo ottico è molto suscettibile ai danni meccanici. La lesione da schiacciamento del nervo ottico per una durata di 1 s può portare a circa il 75% di perdita di RGC in un periodo di 2 settimane10. Pertanto, è necessaria estrema cura durante l'esecuzione delle procedure chirurgiche. Secondo l'esperienza degli autori, è molto meglio adattare un approccio di dissezione smussata per esporre e farsi strada attraverso i tessuti intorno al nervo ottico lungo l'orientamento del nervo, piuttosto che penetrare in u.......

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Dichiarazioni

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Nessuno degli autori ha interessi in competizione o in conflitto.

Ringraziamenti

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Questo studio è stato sostenuto dal oftalmica Research Institute of Australia (ORIA). Ringraziamo il Prof. Algis Vingrys e il dottor Bang Bui, Università di Melbourne, per primo ci aiuta a sviluppare la tecnica di registrazione VEP.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Ketamina 100 mg/ml (Ketamil)Troy LaboratoriesAC 116
Medetomidina 1 mg/ml (Domitor)Pfizersc-204073
Tropicamide 1,0% (Mydriacyl)Alconsc-202371
Sistema di coperte omeotermicheHarvard ApparatusNC9203819
Misuratore di impedenza GrassF-EZM5
Elettrodi a vite Micro FastenersM1.0&volte; Elettrodi ad ago sottodermico da 3 mm con fessura CSK M/T 304 S/S
 ErbaF-E3M-72
Riparazione rapida DeguDent GmbH
Diodo a emissione luminosa NichiaNSPG300A
BioamplificatoreCWE, Inc.Sistema BMA-400
CEDCambridge Electronic Design, Ltd.Siringa di Hamilton Power1401
 Hamilton87930
LysolecithinSigmaL4129
Evan' s blu SigmaE2129

Riferimenti

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  1. Balcer, L. J. Clinical practice. Optic neuritis. N Engl J Med. 354 (12), 1273-1280 (2006).
  2. Lassmann, H. Multiple sclerosis as a neuronal disease. Waxman, S. G. , Elsevier. 153-164 (2005).
  3. Fahle, M., Bach, M.

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Visual Evoked PotentialsOptic Nerve DemyelinationRat ModelVEP RecordingSkull Implanted ElectrodesOptic Nerve MicroinjectionFocal DemyelinationElectrode ImpedancePhotic StimulationLuxol Fast Blue

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