I modelli di ictus tromboembolico sono strumenti vitali per ottimizzare la terapia di ricanalizzazione. Qui riportiamo un modello murino di ictus trombotico basato sull'insulto ipossico-ischemico cerebrale transitorio (tHI), che innesca trombosi e infarto e risponde favorevolmente alla fibrinolisi mediata dall'attivatore del plasminogeno tissutale (tPA) in una finestra terapeutica simile a quelle dei pazienti con ictus.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Un trombotica Stroke modello basato sulla transitoria cerebrale ipossia-ischemia
In questo articolo
Sommario
Abstract
Ricerca Stroke ha sopportato molte battute d'arresto nel tradurre terapie neuroprotettive nella pratica clinica. Al contrario, la terapia del mondo reale (tPA trombolisi) raramente produce benefici in modelli sperimentali meccanici basati occlusione-, che dominano la ricerca preclinica ictus. Questa scissione tra la panchina e comodini suggerisce la necessità di impiegare modelli tPA-reattiva nella ricerca preclinica ictus. A tal fine, un modello semplice e tPA-reattiva ictus trombotico è inventato e descritto qui. Questo modello si compone di occlusione transitoria dell'arteria carotide comune unilaterale e consegna del 7,5% di ossigeno attraverso una maschera in topi adulti per 30 minuti, mantenendo la temperatura rettale animale a 37,5 ± 0,5 ° C. Sebbene legatura reversibile della carotide unilaterale o ipossia ciascun soppressa flusso sanguigno cerebrale solo transitoriamente, la combinazione di entrambi insulti causato durata deficit riperfusione, fibrina e piastrine deposizione e grande Infarct nel territorio cerebrale mezzo dell'arteria fornito. Importante, coda vena iniezione di tPA ricombinante a 0,5, 1, o 4 ore post-THI (10 mg / kg) disponibile riduzione tempo-dipendente delle dimensioni mortalità e infarto. Questo nuovo modello di ictus è semplice e può essere standardizzata attraverso laboratori per confrontare i risultati sperimentali. Inoltre, induce trombosi senza craniectomy o introdurre emboli preformati. Alla luce di questi meriti unici, il modello THI è un'utile aggiunta al repertorio della ricerca preclinica ictus.
Introduzione
La trombolisi e ricanalizzazione è la più efficace terapia dell'ictus ischemico acuto nella pratica clinica 1. Tuttavia, la maggior parte delle ricerche neuroprotezione preclinica è stata eseguita in un modello transitorio meccanico ostruzione (endoluminale sutura occlusione dell'arteria cerebrale media) che produce un rapido recupero del flusso sanguigno cerebrale dopo la rimozione della occlusione vascolare e mostra poco o nessun benefici di tPA trombolisi. È stato suggerito che la scelta dubbia di modelli ictus contribuito, almeno in parte, alla difficoltà nel tradurre terapia neuroprotettiva ai pazienti 2,3. Quindi, vi è una crescent....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Questo protocollo è approvato dalla cura e l'uso Comitato Istituzionale Animal (IACUC) della Emory University e segue il National Institutes of Health Linee guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio.
1. Setup
- Preparare il letto chirurgico su pad riscaldamento collegata con pompa di calore a 37 ° C per almeno 15 minuti prima della chirurgia. Posizionare un paranuca con il barile di 3 ml della siringa sul letto chirurgico. Preparare il gas anestesia con 2% isoflurano in aria medicale.
- Preparare pinze autoclavato, forbici, porta micro aghi, emostatico, tamponi di cotone e suture. Preparare colla tissuta....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Bidimensionale imaging a contrasto di speckle laser (LSCI) 16 è stato utilizzato per confrontare le alterazioni del flusso ematico cerebrale (CBF) per 30 min transitoria occlusione carotidea unilaterale (tCCAO), 30 minuti di esposizione ad ipossia (7,5% di ossigeno), e 30 min unilaterale carotidea legatura sotto ipossia (THI). Questo esperimento ha rivelato che tCCAO sotto normossia soppressa la CBF sulla carotide legatura emisfero ~ 50% del valore basale, che recuperato rapidamente al di sopra dell'85% d.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
L'ictus è un problema di salute importante di crescente importanza per ogni società con un invecchiamento della popolazione. A livello globale, l'ictus è la seconda causa di morte, con una stima di 5,9 milioni di eventi fatali nel 2010, pari al 11,1% di tutti i decessi 18. L'ictus è anche la terza principale causa di anni di vita disability-adjusted (DALY) hanno perso a livello mondiale nel 2010, passando dalla quinta posizione nel 1990 19. Questi dati epidemiologici evidenziano la nece.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato dalla sovvenzione NIH NS074559 (a C. K.). Ringraziamo tutti i collaboratori che hanno contribuito ai nostri articoli di ricerca su cui si basa il presente rapporto metodologico.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| topi maschi adulti | Charles River | C57BL/6 | 10-13 settimane (22-30 g) |
| Sistema mobile di anestesia per animali da laboratorio | VetEquip | 901807 | per anestesia |
| Serbatoio d'aria medica (compresso) | Airgas | UN1002 | per anestesia |
| Isoflurano | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-25 | per anestesia |
| anestesia animale da laboratorio multistazione | ipossia | ||
| Surgivet V7035017,5% O2 bilanciato da 92,5% N2 serbatoio | Airgas | UN1956 | sistema di ipossia |
| Regolatore di temperatura con lampada riscaldante... | Cole Parmer | Regolatori di temperatura | EW-89000-10 |
| Sonda rettale | Cole Parmer | NCI-00141PG | regolatori |
| di temperatura Microscopio da dissezione | Olimpo | Impianto chirurgico | SZ40 |
| Pompa di calore con termoforo | Gaymar | Configurazione chirurgica | TP700 |
| Pinza curva fine (seghettata) | Strumento chirurgico | FST | 11370-31 |
| Pinza curva fine (liscia) | Strumento chirurgico | FST | 11373-12 |
| micro forbici | Strumento chirurgico | FST | 15000-03 |
| Portaaghi FST | 12060-01 | Strumento chirurgico | |
| Halsted-Mosquito emostatici | FST | 13008-12 | strumento chirurgico |
| 5-0 sutura di seta | Harvard Apparatus | 624143 | forniture chirurgiche |
| Sutura monofilamento in nylon 4-0 | LOOK | 766B | forniture chirurgiche |
| Colla tissutale | Abbott Laboratories | NC9855218 | forniture chirurgiche |
| Unguento veterinario Puralube | Fisher | NC0138063 | prevenzione della secchezza oculare |
| Imager del flusso sanguigno MoorFLPI-2 | Moor | 780-nm | Laser Speckle Contrast Imaging |
| Mannitol | Sigma | M4125 | in vivo TTC |
| 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) | Sigma | T8877 | in vivo TTC |
| Vibratome | Stoelting | 51425 | sezione cerebrale per in vivo TTC |
| Microscopio digitale | Dino-Lite | AM2111 | imaging dell'intero cervello |
| Composto OCT | Sakura Finetek | 4583 | |
| capra anti-coniglio Alexa Fluro 488 | Invitrogen | A11008 | Immunoistochimica |
| Criostato | Vibratomo | ultrapro 5000 | sezione cerebrale per IHC |
| Evans blue | Sigma | E2129 | Rilevamento vascolare |
| perfusione Microtomo Microscopia | elettronica Scienze | 5000 | sezione cerebrale per istologia |
| Avertin (2, 2, 2-Tribromoetanolo) | Sigma | T48402 | eutanasia |
| Microscopio fluorescente | Olympus | DP73 | |
| Meloxicam SR | ZooPharm | analgesia FANS |
Riferimenti
- Broderick, J. P., Hacke, W. Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies. Circulation. 106 (12), 1563-1569 (2002).
- Hossmann, K. A. Pathophysiological basis of translational stroke research. Folia Neuropathol. 47 (3), 213-227 (20....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
