Ad oggi, i difetti dei tessuti spessi vengono tipicamente ricostruiti applicando lembi di tessuto autologo o tessuti ingegnerizzati. In questo protocollo, presentiamo un nuovo metodo per l'ingegnerizzazione di un lembo di tessuto vascolarizzato con un peduncolo autologo, per fungere da sostituto dei lembi autologhi.
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Articolo metodologico
Progettato Vascolarizzato muscolare Flap
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Uno dei principali fattori che limitano lo spessore di un costrutto tissutale e la sua conseguente vitalità e applicabilità in vivo, è il controllo dell'apporto di ossigeno al microambiente cellulare, poiché la diffusione passiva è limitata a uno strato molto sottile. Sebbene siano stati descritti vari materiali per ripristinare l'integrità dei difetti a tutto spessore della parete addominale, nessun materiale si è ancora dimostrato ottimale, a causa della bassa vascolarizzazione dell'innesto, del rigetto dei tessuti, dell'infezione o delle proprietà meccaniche inadeguate. Questo protocollo descrive un mezzo per ingegnerizzare un lembo completamente vascolarizzato, con uno spessore rilevante per la ricostruzione del tessuto muscolare. I costrutti di acido polilattico/acido polilattico-co-glicolico incorporati in cellule vengono impiantati intorno all'arteria e alla vena femorale del topo e mantenuti in vivo per un periodo di una o due settimane. L'innesto vascolarizzato viene quindi trasferito come un lembo verso un difetto a tutto spessore realizzato nell'addome. Questa tecnica sostituisce la necessità di sacrificamenti di tessuti autologhi e può consentire l'uso di lembi vascolarizzati ingegnerizzati in vitro in molte applicazioni chirurgiche.
Introduzione
Difetti della parete addominale spesso sorgono a seguito di traumi gravi, il trattamento del cancro, le ustioni e la rimozione della rete infetti. Questi difetti spesso comportano una significativa perdita di tessuto, che richiedono procedure chirurgiche complesse e la presentazione di una grande sfida per i chirurghi plastici di ricostruzione 1-4. Ricercatori di ingegneria dei tessuti alla ricerca di nuove fonti per i tessuti artificiali hanno esplorato diversi materiali, fonti di cellule e fattori di crescita. Restauri positivo di vari tessuti, come trachea 5,6, vescica 7, cornea 8, 9 e osso pelle 10,
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Protocollo
Tutti gli studi sugli animali sono stati approvati dal Comitato delle Etico di esperimenti su animali del Technion. Per questa procedura, topi nudi atimici sono stati usati per evitare il rigetto immunologico. Se si utilizza un altro tipo di mouse, i topi dovrebbero essere rasata prima della procedura chirurgica e la somministrazione di ciclosporina (o un altro sostituto anti-rigetto) è raccomandato.
1. Ponteggio Preparazione e Cell Embedding
- Preparare ponteggi composto da 1: 1 miscela di poli-L-lattico-acido (PLLA) e polilattico-glicolico-co-acido (PLGA), nel modo seguente:
- Sciogliere 500 mg di PLLA e 500 mg di PLGA i....
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Risultati
Vascolarizzazione del trapianto e la perfusione in vivo
Gli innesti sono stati impiantati una o due settimane prima del loro trasferimento come lembi assiali. A uno e due settimane dopo l'impianto, l'osservazione al lordo della zona dell'innesto rivelato innesti di tessuto vitali e vascolarizzate. Questi innesti dimostrato di essere altamente vascolarizzati, come determinato mediante immunocolorazione CD31 positivo (Figura 1A) e altamente perfuso, come e.......
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Discussione
I progressi in ingegneria dei tessuti sono stati raggiunti con una crescente domanda per i tessuti sostitutivi per la ricostruzione dei vari tipi di tessuto. Una varietà di sintesi 1,17,18 e biologici 14-16 materiali, nonché i metodi di fabbricazione sono stati valutati per la loro capacità di far fronte a queste esigenze. Tuttavia, nonostante i progressi nella cura clinica e in ingegneria dei tessuti, il restauro di difetti della parete addominale a tutto spessore rimane una sfida. Un tessuto adeg.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata supportata dal 281501 di sovvenzione del Consiglio europeo della ricerca FP7, ENGVASC.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| piccole forbici dritte fini | Fine Science Tools (FST) | 14090-09 | |
| forbici a molla | Fine Science Tools (FST) | 15003-08 | |
| pinza dritta con punta fine | Fine Science Tools (FST) | 11251-20 | |
| pinza seghettata | Fine Science Tools (FST) | 11050-10 | |
| porta aghi | Fine Science Tools (FST) | 12500-12 | |
| Cauterizzatore per piccoli vasi | Fine Science Tools (FST) | 18000-00 | |
| Duratears | Alcon | 5686 | |
| Sedaxylan | Euravet | DJ03 | |
| Clorketam 1000 | Vetoquinol | 4A0726B | |
| Buprenorfina | vetmarket | B15100 | |
| 4-0 suture di seta | Suture Assut | 647 | |
| 6-0 suture in polipropilene | Suture Assut | 9351F | |
| 8-0 suture di seta | Suture Assut | 684568 | |
| Siringa da insulina (ago da 6 mm) | Sistema | 324911 | |
| Vevo 2100 | VisualSonics inc. | ||
| Trasduttore non lineare MS250 | VisualSonics inc. | ||
| Mezzo di contrasto non mirato per micromarcatori | VisualSonics inc. | VS-11694 | |
| VisualSonics inc. | VS-11912 | ||
| Vevo 2100 software | VisualSonics inc. | ||
| destrano coniugato con isotiocianato di fluoresceina | Sigma | FD500S | |
| Matlab | Mathworks, MA, USA | ||
| Kimwipes | Kimtech | 34120 | |
| soluzione di smascheramento dell'antigene | Vector laboratories | H-3300 | |
| anticorpo anti-CD31 | Abcam | ab28364 | |
| anticorpo biotinilato di capra anti-coniglio (secondario) | Vector laboratories | BA-1000 | |
| streptavidina-perossidasi | Jackson | 016-030-084 | |
| amaratossilina di Mayer | Kit substrato Sigma-Aldrich | MHS-16 | |
| aminoetilcarbazolo (AEC) | Tecnologie per la vita, Invitrogen | 00-2007 | |
| Vectamount | Vector laboratori | H-5501 |
Riferimenti
- Engelsman, A. F., van der Mei, H. C., Ploeg, R. J., Busscher, H. J. The phenomenon of infection with abdominal wall reconstruction. Biomaterials. 28 (14), 2314-2327 (2007).
- De Coppi, P., et al. Myoblast-acellular ....
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Ristampe e permessi
