L'ingegneria dei tessuti include spesso espansione in vitro per creare autologhi per la rigenerazione tissutale. In questo studio un metodo per l'espansione del tessuto, rigenerazione e ricostruzione in vivo è stata sviluppata al fine di minimizzare la trasformazione di cellule e materiali biologici di fuori del corpo.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Tissue tritata in Compressed Collagene: A Biotransplant cellulare contenente per la riparazione singolo-messa in scena Ricostruttiva
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le tecniche convenzionali per l'espansione cellulare e il trapianto di cellule autologhe per scopi di ingegneria tissutale possono avvenire in strutture di coltura cellulare umana appositamente attrezzate. Questi metodi includono l'isolamento delle cellule in sospensione di una singola cellula e diversi eventi laboriosi e dispendiosi in termini di tempo prima del trapianto al paziente. Studi precedenti suggeriscono che il corpo stesso potrebbe essere utilizzato come bioreattore per l'espansione cellulare e la rigenerazione dei tessuti, al fine di ridurre al minimo le manipolazioni ex vivo di tessuti e cellule prima del trapianto al paziente. Lo scopo di questo studio era quello di dimostrare un metodo per la raccolta dei tessuti, l'isolamento dell'epitelio continuo, la macinazione dell'epitelio in piccoli pezzi e la loro incorporazione in un biomateriale a tre strati. Il biomateriale a tre strati è poi servito come veicolo di consegna, per consentire la manipolazione chirurgica, lo scambio di nutrizione durante il trapianto e una degradazione controllata. Il biomateriale era costituito da due strati esterni di collagene e da un nucleo di un polimero meccanicamente stabile e lentamente degradabile. L'epitelio tritato è stato incorporato in uno degli strati di collagene prima del trapianto. Tritando il tessuto epiteliale in piccoli pezzi, i pezzi potevano essere sparsi e quindi veniva stimolata la propagazione delle cellule. Dopo l'esecuzione iniziale dei trapianti, l'espansione e la riorganizzazione cellulare avrebbero avuto luogo e la matrice extracellulare sarebbe maturata per consentire la crescita dei capillari e dei nervi e l'ulteriore maturazione della matrice extracellulare. La tecnica riduce al minimo le manipolazioni ex vivo e consente la raccolta delle cellule, la preparazione dell'autotrapianto e il trapianto al paziente come un semplice intervento in un'unica fase. In futuro, l'espansione dei tessuti potrebbe essere avviata attorno a uno stampo 3D all'interno del corpo stesso, in base alle esigenze specifiche del paziente. Inoltre, la tecnica potrebbe essere eseguita in un normale ambiente chirurgico senza la necessità di sofisticate strutture di coltura cellulare.
Introduzione
La maggior parte degli studi di ingegneria tissutale su trapianti di pelle e del tratto urogenitale includono i raccolti di cellule autologhe da tessuto sano e l'espansione delle cellule in strutture cellulari-coltura appositamente attrezzati 1,2.
Dopo l'espansione delle cellule, le cellule sono in genere memorizzati per un uso successivo quando il paziente viene preparato a ricevere la autologo. congelatori azoto permettono la conservazione a lungo termine a bassa temperatura di -150 ° C o inferiore. Il processo di congelamento devono fare attenzione e controllato in modo da non perdere le cellule. Un rischio di morte ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutti i protocolli degli animali sono stati pre-approvati dal Comitato della contea di Stoccolma sugli animali e tutte le procedure conformi alle norme per uso animale, nonché relative leggi federali.
1. Procedure animali
- Preparare l'animale per Chirurgia
- Preparare il tavolo operatorio con tutti i materiali e gli strumenti necessari per il funzionamento in condizioni sterili. Effettuare l'intervento esclusivamente in condizioni sterili per ridurre il rischio di infezione e di ottimizzare le condizioni in chirurgia sopravvivenza.
- Digiunare l'animale per 12 ore prima di un intervento chirurgico e mi....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Questo studio presenta un metodo che mostra come produrre un biomateriale per il trapianto utilizzando la compressione di plastica di collagene e del tessuto tritato.
Vescica mucosa e della pelle possono essere raccolte e poi macinate meccanicamente in piccole particelle (Figura 3). Per la compressione di plastica, le particelle macinate sono incorporati nello stesso scaffold composito costituito da un polimero biodegradabile posizionato centralmente che è meccanicamente for.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Questo studio presenta un approccio facile da usare per la produzione di cerotti parete vescicale con tessuto autologo per il trapianto al tavolo operatorio. I cerotti sono formati dalla combinazione di una maglia polimero biodegradabile in mezzo e collagene con e senza il tessuto macinate nelle superfici esterne in combinazione con compressione di plastica. Compressione plastica è un metodo precedentemente descritto da altri autori e può essere definito come una rapida espulsione di liquido dal gel di collagene 12.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano la Società Svedese per la Ricerca Medica, la Fondazione Promobilia, la Fondazione Principessa Ereditaria Lovisa, la Fondazione Massonica per il Benessere dei Bambini, la Società Svedese di Medicina, la Fondazione Solstickan, il Karolinska Institutet e il Consiglio Comunale di Stoccolma per il sostegno finanziario.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Catetere in silicone 10-French | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| DMEM 10x | Gibco | 31885-023 | Sezione di compressione plastica 4 |
| piastre da 24 pozzetti | Falcon | 08-772-1 | Sezione di compressione plastica 4 |
| 3',3',5-Triiodotironina | Sigma-Aldrich | IRMM469 | In vitro coltura; Sezione 5 |
| 4% PFA | Labmed Solutions | 200-001-8 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Immunocitochimica Histolab | al 70% di etanolo | ; Sezione 6 | |
| Kit ABC Elite: kit per il rilevamento della biotina-streptavidina | Vettore | PK6102 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Etanolo assoluto | Histolab | 1399.01 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Adenine | Sigma-Aldrich | A8626 | In vitro cultura; Sezione 5 |
| Atropina 25 μ g/kg | Temgesic, RB Pharmaceuticals, Gran Bretagna | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Azaperone 2 mg/kg | Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Austria | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Biosicurezza Livello 2 cappuccio | Compressione plastica; Sezione 4 | ||
| Soluzione bloccante: È stato generato siero normale della stessa specie in cui è stato generato l'anticorpo secondario secondario. | Vettore | La soluzione bloccante dipende dall'origine del primo anticorpo | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Buprenorfina 45 μ g/kg | Atropin, Mylan Inc, Canonsburg, PA | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Carprofene 3 mg/kg | Rimadyl, Orion Pharma, Svezia | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Clorexidina gluconato | Hibiscrub 40& sottile mg/mL, Regent Medical, Inghilterra | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Tossina del colera | Sigma-Aldrich | C8052 | In vitro coltura; Sezione 5 |
| Vaso Coplin: vaso di colorazione per bollitura | Histolab | 6150 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Stampo in acciaio inox (33 mm x 22 mm x 10 mm) su misura | Compressione plastica; Sezione 4 | ||
| DMEM | Gibco | 3188-5023 | Sezione di compressione in plastica 4. Mantieni il ghiaccio quando lo si utilizza nella compressione plastica |
| Fattore di crescita epidermico | Sigma-Aldrich | E9644 | In vitro coltura; Sezione 5 |
| Ethilon (monofilamento non assorbibile per suture cutanee) | Ethicon | Surgery, Sezione 1 | |
| Siero fetale bovino (FBS) | Gibco | 10437-036 | Sezione di compressione plastica 4 |
| Pinze (Adison con dente) | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Garza (Gazin Mullkompresse) | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Ham's F12 | Gibco | 31765-027 | Compressione plastica sezione 4 |
| Ematossilina | Histolab | 1820 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Camera di umidità | DALAB | Immunocitochimica; Sezione 6 | |
| Idrocortisone | Sigma-Aldrich | H0888 | In vitro coltura; Sezione 5 |
| Soluzione di perossido di idrogeno 30% | Sigma-Aldrich | H1009 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Insulina | Sigma-Aldrich | I3536 | In vitro coltura; Sezione 5 |
| Isoflurano | Isoflurano, Baxter, Deerfield, IL | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Lidocaina 5 mg/ml | Xilocaina, AstraZeneca, Svezia | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Lucose 25 mg/ml | Baxter, Deerfield, IL | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Penna per pennarelli Pap Pen | Sigma-Aldrich | Z377821-1EA | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Medetomidina 25 μ g/kg | Domitor, Orion Pharma, Svezia | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Dispositivo di macinazione | Applied Tissue Technologies LLC | Preparazione di tessuti macinati, sezione 2 | |
| Monocryl (monofilamento assorbibile) | Ethicon | Surgery, Sezione 1 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| NaOH 1 N | Merck Millipore | 106462 | Plastica sezione di compressione 4 e coltura cellulare |
| Rete in nylon, 110 μ M dimensione dei pori spessi 0,04 sqmm | Compressione plastica; Sezione 4 | ||
| Oculentum simplex APL: unguento per la protezione degli occhi | APL | Vnr 336164 | Chirurgia, Sezione 1 |
| PBS | Gibco | 14190-094 | Sezione di compressione plastica 4 |
| Penicillina-Streptomicina | Gibco | 15140-122 | Sezione di compressione plastica 4 |
| Fenobarbiturico 15 mg/kg | Pentobarbital, APL, Svezia | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| PCL Tessuto | Compressione plastica; Sezione 4 | ||
| Collagene a coda di topo | First LINK, Ltd, UK | 60-30-810 | Sezione di compressione plastica 4, mantenere sul ghiaccio |
| Lama del bisturi - 15 | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Forbici | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Rete in acciaio inossidabile, 400 μ M dimensione | Compressione plastica; Sezione 4 | ||
| Guanti | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Camici | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Teli | |||
| Sterilium | Bode Chemie AMBURGO | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Filo di sutura Ethilon | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico chirurgia, Sezione 1 | ||
| La soluzione TE (soluzione di smascheramento dell'antigene) è composta da 10 mM Tris e 1 mM EDTA, pH 9,0 | 10 mM Tris/1 mM EDTA, regolare il pH a 9,0 | ||
| Tiletamina ipocloruro 2,5 mg/kg | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Transferrina | Sigma-Aldrich | T8158 | In vitro coltura; Sezione 5 |
| Trizma Base, H2NC | Sigma-Aldrich | T6066 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Kit VIP vettoriale: Kit substrato di perossidasi enzimatica | Vector | SK4600 | Immunocitochimica; Sezione 6 |
| Vicryl (riassorbibile) | Ethicon | Surgery, Sezione 1 | |
| Tris tampone pH 7,6 (tampone di lavaggio) | Soluzione TE: Preparare 10x (0,5 M Tris, 1,5 M NaCl) miscelando: 60,6 g Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M=121,14 g/mol), aggiungere 800 ml di acqua distillata, regolare il pH fino a 7,6, aggiungere 87,7 g di NaCl e riempire fino a 1.000 ml con acqua distillata. Diluire a 1x con acqua distillata. | ||
| X-tra solv (solvente) | DALAB | 41-5213-810 | Immunocitochimica; Sezione 6. Utilizzare sotto cappa aspirante |
| Zolazepam ipocloruro | Zoletil, Virbac, Francia | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | |
| Strisce di cera depilatoria Veet | Preparazione dell'animale per l'intervento chirurgico, Sezione 1 | ||
| Pentobarbital sodico | Lundbeck | Terminazione, Sezione 3 |
Riferimenti
- Rheinwald, J. G., Green, H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6, 331-343 (1975).
- Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. Engineering of multilayered uri....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
