In questo studio, è stato descritto un metodo per sintetizzare popolazioni ultra-piccole di nanoparticelle biocompatibili, nonché diversi metodi in vitro con cui valutare le loro interazioni cellulari.
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Articolo metodologico
Solid Lipid nanoparticelle (linfonodi sentinella) Applicazioni per intracellulare targeting
In questo articolo
Sommario
Abstract
I veicoli di consegna basati su nanoparticelle hanno mostrato grandi promesse per le applicazioni di targeting intracellulare, fornendo un meccanismo per alterare specificamente la segnalazione cellulare e l'espressione genica. In una precedente indagine, è stata dimostrata la sintesi di nanoparticelle lipidiche solide ultra-piccole (SLN) per applicazioni topiche di somministrazione di farmaci e di rilevamento di biomarcatori. Le SLN sono un esempio ben studiato di un sistema di somministrazione di nanoparticelle che è emerso come un promettente veicolo di somministrazione di farmaci. In questo studio, le SLN sono state caricate con un colorante fluorescente e utilizzate come modello per studiare le interazioni particella-cellula. Il metodo della temperatura di inversione di fase (PIT) è stato utilizzato per la sintesi di popolazioni ultra-piccole di nanoparticelle biocompatibili. È stato utilizzato un test di 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenilfeniltetrazolio bromuro (MTT) al fine di stabilire livelli di dosaggio appropriati prima degli studi di interazione nanoparticella-cellula. Inoltre, i fibroblasti dermici umani primari e le cellule dendritiche di topo sono stati esposti a SLN caricati con colorante nel tempo e le interazioni rispetto alla tossicità e all'assorbimento delle particelle sono state caratterizzate utilizzando la microscopia a fluorescenza e la citometria a flusso. Questo studio ha dimostrato che gli SLN ultra-piccoli, come sistema di rilascio di nanoparticelle, sono adatti per il targeting intracellulare di diversi tipi di cellule.
Introduzione
Veicoli di consegna basata nanoparticelle hanno mostrato una grande promessa per le applicazioni destinate intracellulari, fornendo un meccanismo per alterare specificamente segnalazione cellulare e l'espressione genica. Questi veicoli possono essere caricati con farmaci, proteine e acidi nucleici progettati per influenzare la risposta cellulare e ottenere un effetto desiderato nei tessuti bersaglio. Molti tipi di nanovettori sono stati esplorati per beneficio terapeutico e diagnostica compresi lipidi, polimeri, silicio e materiali magnetici. Questi sistemi sono interessanti per la loro potenziale per la consegna della droga localizzato, aumento della concentra....
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Protocollo
1. Il trattamento di linfonodi sentinella
- Sintesi di linfonodi sentinella
Nota: Utilizzare il metodo PIT 1,17,20 per preparare i sub-20 nm linfonodi sentinella 1.- Utilizzare una tecnica asettica, bioreagents o reagenti di colture cellulari di qualità e materiali sterili (cioè, pipette, spatole, fiale, ecc.)
- Utilizzare un armadio biosicurezza per la sintesi dei linfonodi sentinella (Figura 2).
- Combinare 0,6 mg di colorante fluorescente (Nilo Red (NIR), concentrazione NiR è di circa 0,3 mg / ml) e 0,10 g di Heneicosane (Lipid, 5 peso / peso% concentrazione di lipidi)....
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Risultati
Il metodo è stato utilizzato PIT per sintetizzare i linfonodi sentinella e la temperatura di inversione di fase è stato determinato utilizzando un bagno di acqua. I campioni erano riscaldata lentamente e delicatamente agitata finché la soluzione appariva chiaro. La temperatura inversione di fase per i linfonodi sentinella effettuate utilizzando lipidi heneicosane è di 45 ° C. La tabella 1 riassume la dimensione delle particelle, polidispersità, punto di fusione e calore latente di fusione per i linfonod.......
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Discussione
In questo studio, la sintesi di linfonodi sentinella e loro applicabilità per le applicazioni destinate intracellulari sono state esplorate. Queste nanoparticelle biocompatibili hanno mostrato risultati promettenti come veicoli di consegna per più applicazioni, tra cui la somministrazione di farmaci, silenziamento genico, e le tecnologie di vaccini 25-30. Ultra-piccoli linfonodi sentinella sono stati sintetizzati utilizzando un processo facile, e sono state esplorate le loro interazioni con le cellule della p.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
La ricerca riportata in questa pubblicazione è stata supportata dal Dipartimento di Ricerca e Sviluppo Esplorativo del Johns Hopkins Applied Physics Laboratory, dall'Office of Technology Transfer e dal Stuart S. Janney Fellowship Program, oltre al National Heart, Lung, and Blood Institute del National Institutes of Health con il numero di premio R21HL127355.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Bioreagente rosso del Nilo (NiR) | Sigma | 19123 | , adatto per fluorescenza, ≥ 98,0% |
| Heneicosane | Aldrich | 286052 | 98% |
| Brij O10 | Sigma | P6136 | Brij 97, C18-1E10, Poliossietilene (10) etere oleilico |
| Acqua | Sigma | W3500 | Filtrato sterile, BioReagente, adatto per colture cellulari |
| Filtro per siringa 0,2 µ m Supor Membrane Low Protein Binding Life Sciences | PN4612 | Non-Pyrogenic | |
| Nanotrac Ultra | Numero di serie | Microtrac | |
| Strumento Calorimetro a scansione differenziale Strumento | Mettlet-Toledo | ||
| Fibroblasti umani primari | Life Technologies | C-004-5C | Neonatale (HDFn) |
| Medium 106 | Life Technologies | M-106-500 | Un terreno liquido sterile per la coltura di fibroblasti dermici umani. |
| crescita sierica bassa (LSGS Kit) | Life Technologies | S-003-K | Tutti i componenti del kit completo LSGS |
| MTT per il saggio della proliferazione cellulare | Trevigen | 4890-025-K | Kit sensibile per la misurazione della proliferazione cellulare basato sulla riduzione del sale di tetrazolio, 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazolio bromuro (MTT) |
| Safire2 lettore di micropiastre | Tecan | ---- | Strumento |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Sigma | P5493 | Per la biologia molecolare |
| Urina ricombinante GM-CSF | Peprotech | 315-03 | >97%, mediante SDS-PAGE in condizioni riducenti e visualizzato mediante colorazione d'argento. |
| IL-4 murina ricombinante | Peprotech | 214-14 | >97%, mediante SDS-PAGE in condizioni riducenti e visualizzato mediante colorazione d'argento. |
Riferimenti
- Calderon-Colon, X., et al. Synthesis of sub-10 nm solid lipid nanoparticles for topical and biomarker detection applications. J Nanopart Res. 16 (2252), 1-10 (2014).
- Patwekar, S., et al. Review on n....
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Ristampe e permessi
