Iniezione intracerebroventricular dei peptidi beta-amiloide in topi normali per indurre Acutamente Alzheimer-like Deficit cognitivi

Sommario

L'amiloide-β (Ap) -injected modello animale consente la somministrazione di una quantità e specie di frammenti Ap definiti e riduce le differenze individuali all'interno di ciascun gruppo di studio. Questo protocollo descrive la intracerebroventricolare (ICV) iniezione di Ap senza strumenti stereotassica, consentendo la produzione di anomalie comportamentali Alzheimer-like nei topi normali.

Abstract

L'amiloide-β (Aβ) è un importante mediatore patologico della malattia di Alzheimer (AD) sia familiare che sporadica. Nel cervello dei pazienti con AD si osserva un progressivo accumulo di oligomeri e placche Aβ. Si ritiene che tali anomalie Aβ blocchino il potenziamento a lungo termine, compromettano la funzione sinaptica e inducano deficit cognitivi. Evidenze cliniche e sperimentali hanno rivelato che l'aumento acuto dei livelli di Aβ nel cervello consente lo sviluppo di fenotipi simili all'Alzheimer. Pertanto, in molti casi è necessario un protocollo dettagliato che descriva come generare acutamente un modello murino di AD tramite l'iniezione intracerebroventricolare (ICV) di Aβ. In questo protocollo sono incluse le fasi dell'esperimento con un topo iniettato con Aβ, dalla preparazione dei peptidi al test delle anomalie comportamentali. Il processo di preparazione degli strumenti e dei soggetti animali prima dell'iniezione, l'iniezione dell'Aβ nel cervello del topo tramite iniezione di ICV e la valutazione del grado di deterioramento cognitivo sono facilmente spiegabili in tutto il protocollo, con un'enfasi sui suggerimenti per un'efficace iniezione di Aβ da parte dell'ICV. Imitando alcuni aspetti dell'AD con un'iniezione designata di Aβ, i ricercatori possono bypassare il processo di invecchiamento e concentrarsi sulla patologia a valle delle anomalie di Aβ.

Introduzione

Dato che amiloide-β (Ap) è una caratteristica patologica della malattia di Alzheimer (AD), lo sviluppo di modelli animali di AD si è concentrata sulla sovraespressione neurale di Ap. Poiché le mutazioni nella proteina precursore dell'amiloide (APP) o presenilina (PS) portano a disturbi di Ap equilibrio e, infine, alla patogenesi di AD familiare ^1, modelli murini che coinvolgono APP o PS mutazioni del gene sono state generalmente accettata. Tra la vasta gamma di topi transgenici, modelli prototipali di topo sono i seguenti: Tg2576, PDAPP, APP / PS1 e APP23. Nel cervello, questi topi in genere mostrano aggregazione Ap e placche senili alla fine; formazio....

Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con il National Institutes of Health Guide per la cura e l'uso di animali da laboratorio (NIH Pubblicazioni n ° 8023, riveduta 1978) e con il Comitato cura e l'uso degli animali del Comitato Cura e uso istituzionale degli animali di KIST (Seoul, Corea).

1. Preparazione degli animali

1. Preparare un gruppo di 7 settimane di età topi ICR maschi (o C57BL / 6).
2. Lasciate che i topi passare attraverso un processo di acclimatazione per 3-7 giorni dopo il trasporto per ristabilire l'omeostasi. In generale, posizionare un gruppo di 4-5 topi in ogni gabbia e mantenerli a....

Risultati

Questa sezione illustra esempi dei risultati ottenibili da una conferma di aggregazione Ap e valutazione Y-labirinto di deficit di memoria. Utilizzando il full-length Ap (1-42) peptide di 42 aminoacidi, miscela di monomeri, oligomeri, Ap e fibrille (Figura 3) è stato prodotto. Attraverso il passo monomerization HFIP indotta, sono stati ottenuti monomeri relativamente omogenee (Corsia B). Dopo l'incubazione di 7 giorni, diversi formati di aggregati Ap (corsia C) svilu.......

Discussione

Il passo più importante in questo protocollo è l'iniezione ICV di Ap. Questo protocollo è progettato per iniettare Ap nella regione ICV di topi senza strumenti stereotassica ^11,12. Prima di iniziare un esperimento, un periodo preliminare di iniezioni di pratica con un colorante blu invece di Ap dovrebbe avvenire per raggiungere destrezza sufficiente. Subito dopo l'iniezione, è necessario verificare se l'iniezione di pigmento è stato eseguito correttamente. Estrarre con attenzione il cervello e ver.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
ICR topo	Orientbio		maschio, 6-8 settimane, 27-29 g di peso corporeo
C57BL/6 topo	Orientbio		maschio, 6-8 settimane, 21-23 g di peso corporeo
Amiloide-beta1-42	in casa sintesi		concentrazione di riserva: 1 mM/DMSO, concentrazione iniettata: 100 μ Siringa per iniezione M/10% DMSO e 90% PBS
ICV (calibro 26s)	Hamilton	80308
Colorante blu Evans (EBD)	abcamBIochemicals	ab120869	1% EBD in PBS
DMSO	Sigma	D2650
PBS	gibco	10010-023
Kit di analisi PAGE a gradiente Gradi-GelTM II	ELPiS Biotech	EBS-1056	15% Gel
Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards	Bio-Rad	161-0377
Kit di colorazione dell'argento	GE-Healthcare	17-1150-01
LabDiet	Orientbio	5053