Questo metodo valuta l'invasione delle cellule tumorali dagli sferoidi in una matrice 3D circostante. Gli sferoidi vengono generati con il metodo della coltura a goccia sospesa e quindi incorporati in una matrice composta da materiali a membrana basale e collagene di tipo I. L'invasione degli sferoidi viene successivamente monitorata.
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Articolo metodologico
Un Cancer Cell Saggio sferoide valutare Invasion in un Ambiente 3D
In questo articolo
Sommario
Abstract
Si ritiene che la natura invasiva delle linee cellulari tumorali sia correlata al loro potenziale metastatico. La maggior parte dei saggi tradizionali, tuttavia, non esamina queste caratteristiche invasive in un ambiente tridimensionale e i dati risultanti soffrono di una ridotta applicabilità biologica. Qui viene presentato un approccio per visualizzare la capacità invasiva delle linee cellulari in un contesto fisiologicamente rilevante. Il test di invasione degli sferoidi delle cellule tumorali utilizza innanzitutto la gravità per generare sferoidi all'interno di gocce di terreno che pendono dal coperchio di un piatto di coltura cellulare. Successivamente, questi sferoidi sono incorporati in una matrice 3D costituita da una miscela di materiali della membrana basale e collagene di tipo I. L'esgressione delle cellule tumorali dagli sferoidi nella matrice circostante viene quindi monitorata nel tempo. Il metodo qui descritto può essere modificato per esaminare l'invasione dopo la cocoltura di diversi tipi di cellule, l'inclusione di farmaci/inibitori o le alterazioni dei costituenti della matrice extracellulare (ECM).
Introduzione
È accertato che la motilità delle cellule tumorali è predittiva di potenziale metastatico, dato che tale comportamento facilita l'invasione attraverso la membrana basale e l'ingresso nel sistema circolatorio 1. Maggior parte delle ricerche sulla motilità si è concentrata su come le cellule si comportano in un ambiente bidimensionale (2D), anche se sta diventando ampiamente riconosciuto che il movimento delle cellule in una tridimensionale (3D) matrice è più rappresentativo di come queste stesse cellule saranno effettivamente comportarsi in vivo 2. Sistemi di coltura 3D sono sempre più utilizzati per studiare i comportamenti cell....
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Protocollo
1. Generazione di Spheroids
- Preparare cella singola sospensione per appendere le culture goccia staccando colture di cellule di cancro aderenti del ~ 70% di confluenza con un PBS lavaggio seguito da esposizione a 0,05% soluzione di tripsina-EDTA.
- Neutralizzare la soluzione di tripsina con colture cellulari e contare le cellule utilizzando una aliquota della sospensione cellulare. Nota: I mezzi di coltura cellulare specifico dipenderà dalla linea cellulare in fase di test. Seguire ATCC raccomandazioni dei media, dove i media di coltura cellulare è tipicamente DMEM + 10% FBS. Ulteriori informazioni si possono trovare nella tabella dei materiali.
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Risultati
Usando il saggio di invasione sferoide (figura 1), un pannello di linee cellulari di tumore è stato testato per la loro capacità di formare sferoidi, così come per la quantità di fuoriuscita di cellule esposte dopo l'impianto in una matrice 3D costituiti da materie membrana basale e collagene di tipo I (Tabella 1). Questi risultati dimostrano che non ogni linea cellulare di tumore creerà sferoidi ben formate, dove le linee cellulari che possiedono una morfologia epiteliale in vi.......
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Discussione
Questo studio ha valutato le prestazioni di un pannello di linee cellulari di cancro in un saggio di invasione sferoide (Tabella 1). Generalmente, troviamo che la formazione sferoide è migliorata in più linee cellulari epiteliali cercando, dove la presenza di giunzioni cellula-cellula promuove la formazione di un'architettura sferoide-like. Linee cellulari noti che hanno subito una transizione epitelio-mesenchimale, come MDA-MB-231 cellule non formano sferoidi nella cultura goccia appeso molto proba.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Supportato dal NIH sovvenzioni P30 CA051008 e T32 CA009686 (ATR).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Matrigel Fattore di Crescita Ridotto | Corning | CB-40234 | |
| Collagene Tipo I, Coda di Ratto, 100 mg | Millipore | 08-115 | |
| DMEM | Life Technologies | 11995-065 | |
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11875-093 | |
| PBS | Life Technologies | 10010-023 | |
| 0,05% tripsina-EDTA | Life Technologies | 25300-054 | |
| Siero fetale bovino, inattivato a caldo | Omega Scientific | FB-12 | |
| Piastre trattate con TC da 100 mm | Corning Incorporated | 430167 | |
| piastre trattate con TC a 24 pozzetti | NEST Biotecnologia 702001 | ||
| microscopio invertito | |||
| Le linee cellulari sono state mantenute in DMEM + 10% FBS, con l'aspettativa di celle BT-474 e LNCaP, che sono state mantenute in RPMI + 10% FBS. |
Riferimenti
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Metastasis: Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev. Cancer. 2 (8), (2002).
- Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions.
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Ristampe e permessi
