Presentiamo una procedura chirurgica per cateterizzare il tronco linfatico intestinale nei suini neonati per raccogliere grandi quantità di componenti del metabolismo lipidico dalla linfa efferente.
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Articolo metodologico
A lungo termine cateterizzazione della intestinale linfa Tronco e Raccolta della linfa in neonatali Pigs
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il cateterismo del tronco linfatico intestinale nei suini neonatali è una tecnica che consente la raccolta a lungo termine di grandi quantità di linfa efferente intestinale (centrale). È importante sottolineare che la raccolta della linfa centrale dall'intestino consente ai ricercatori di studiare sia i meccanismi che le costituzioni lipidiche associate al metabolismo dei lipidi, all'infiammazione intestinale e alle metastasi del cancro, nonché le cellule coinvolte nella funzione immunitaria e nell'immunosorveglianza. Un approccio chirurgico ventrale della linea mediana consente un'eccellente esposizione chirurgica all'addome cranico e un accesso relativamente facile al vaso del tronco linfatico intestinale che si trova vicino al pancreas e al segmento ventrale destro della vena porta sotto l'aspetto viscerale del lobo epatico destro. Il vaso viene meticolosamente sezionato e rilasciato dalla fascia circostante e quindi dilatato con punti di sutura che consentono l'inserimento e il successivo fissaggio del catetere nel vaso. Il catetere viene esteriorizzato e viene raccolto circa 1 L/24 h di linfa in un periodo di 7 giorni. Sebbene questa tecnica consenta la raccolta di grandi quantità di linfa centrale per un lungo periodo di tempo, il successo dipende da un'attenta dissezione chirurgica, dalla manipolazione dei tessuti e da una particolare attenzione alla corretta tecnica chirurgica. Ciò è particolarmente importante con gli interventi chirurgici negli animali giovani, poiché i vasi linfatici possono facilmente lacerarsi, portando potenzialmente al fallimento chirurgico e sperimentale. Il video dimostra un'ottima tecnica chirurgica per la raccolta della linfa intestinale.
Introduzione
Il sistema linfatico è una zona poco studiato della fisiologia. Modelli preclinici di cateterizzazione linfatico si verificano in diverse specie animali 1-8 e sono utilizzati da industrie farmaceutiche e istituti di ricerca per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidico 8-12 e 13-15 metabolismo dei farmaci, metastasi del cancro 16 con trattamento sperimentale 17, e la funzione immunitaria 18 -26. Questo studio esplora l'utilizzo di cateterizzazione intestinale tronco linfa in un modello di maiale domestico per misurare i componenti del metabolismo delle lipoproteine. metabolismo Lipoprotein è c....
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Protocollo
Tutte le procedure su animali sperimentali descritte in entrambi i video e manoscritti sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali e hanno seguito le linee guida stabilite dal Consiglio canadese di cura degli animali.
1. Anestesia chirurgica e preparazione chirurgica dei maiali neonatali
- In un antibagno separato, Premedicare 25 kg maiali vicino alla base del collo con una intramuscolare cocktail di farmaci sedativi-anestetico contenente: azaperone (0,3 mg / kg), ketamina cloridrato (10 mg / kg), la dexmedetomidina (15 mg / kg).
Nota: Aggiungere buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) nel cocktai....
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Risultati
cateterizzazione linfatico del tronco linfatico intestinale dei suini neonatale permette la raccolta di circa 1 L / 24 ore di linfa centrale nel corso di un periodo di 7 giorni. La linfa raccolte in questo esperimenti conteneva componenti del metabolismo lipidico, proteine cioè totale linfa, ApoB48 lipoproteine, trigliceridi, proteine totali e colesterolo. Tabella 1 evidenzia importi rappresentativi di tali componenti lipidici da campioni di linfa pool di tre maiali. In partico.......
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Discussione
Raccolta linfa intestinale è un ottimo metodo per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidi 8-12 e 13-15 farmaco metabolismo, metastasi del cancro 16,17, il traffico delle cellule e la funzione immunitaria 18-26, in vari modelli sperimentali animali. Infatti, la capacità di raccogliere grandi quantità di ciascuna periferica (afferente) e centrale (efferente e grandi vasi tronco) linfa per un periodo prolungato è particolarmente importante per la comprensione dei cambiamenti.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Il lavoro è stato sostenuto in parte dal finanziamento dell'Alberta Livestock and Meat Agency e dalla sovvenzione del Natural Science and Research Council Discovery a S. D. Proctor.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Lama per laringoscopio Miller | Welch Allyn | 68044 | lunghezza 182 mm |
| Surgivet advisor: Monitor dei segni vitali | Surgivet | V9203 | |
| Sonda di temperatura rettale | Surgivet | V3417 | |
| Generatore di elettrochirurgia monopolare | Valley Lab | ||
| Forbici Metzenbaum | Fine Science | 14518-18 | |
| Divaricatore Tuffier | Stevens | 162-11-676 | |
| Pinze per zanzare | Stevens | 162-7-10 | |
| Forcipe Kelly-curvo (14cm) | Stevens | 162-7-38 | |
| Forcipe per tessuti Allis | Stevens | 162-7-38 | |
| Forcipe dressing-eye (10,2cm) | Stevens | 162-18-780 | |
| Forcipe per medicazione-Adison (12,1 cm) | Stevens | 162-17-2510 | |
| Trascinatori ad ago | Stevens | 162-V98-42 | |
| Forbici per iride | Fine science | 14058-11 | |
| Pompa di circolazione dell'acqua | Jorvet | J-783X | |
| Maxitherm-Coperta in vinile | Jorvet | J-784C | |
| Applicatori di punte Q | Fisher Scientific | 22-037-960 | |
| Cateterismo tubi (4,06 OD X 2,31 ID) | Braintree Scientific Inc. | MRE-160 | Tubo di impianto Micro-Renetano |
| 2-0 sutura in seta | Ethicon | LA556 | |
| 2-0 sutura in poliglactina | Ethicon | J443H | 2-0 vicryl |
| Giacca per animali di grandi dimensioni | Lomir Biomedical Inc. | SSJ2YC | |
| Flaconi di lavaggio in polipropilene | Fisher Scientific | 03-409-22C | 500 ml |
| Penicillina-Streptomicina | Sigma Aldrich | D4333 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | 60-00-4 | |
| Amfotericina B | Sigma Aldrich | A2411 | |
| Azaperone | Elanco Animal Health | Stresnil | |
| Dexmedetomidina cloridrato | Zoetis | 6295 | Dexdomitor |
| Isoflurano | Abbott Animale Salute | 05260-5 | IsoFlo |
| Ketamina cloridrato | Zoetis | 2626 | Ketaset |
| Bupenorfina cloridrato | Champion Alstoe Salute | DIN:02347510 | |
| Tubo endotracheale da 6 mm | Jorvet | J-165d | |
| 10% Lidocaina spray | AstraZeneca | DIN:02003767 | |
| 4% Scrub | chirurgico alla clorexidinaPartnar Animal Health | PCH-011 | Diluito: soluzione al 2,0% |
| 3M Sterilizzatore chirurgico 3M | Health Care | 1040 | |
| SDS page gel | Invitrogen | EA0375BOX | 3-8% tris acetato |
| Membrana al fluoruro di polivinilidene | Millipore | IPVH00010 | 0,45 μ m dimensione dei pori |
| Anticorpo ApoB | EMD Millipore | AB742 | 1:4000 diluizione |
| Asino anti-capra IgG-HRP | Santa Cruz Biotechnology | Sc-2304 | |
| ECL Prime Western Blotting Reagente | GE Healthcare LifeSciences | RPN2232 | |
| Kit di trigliceridi | Wako Pure Chemicals | 998-40391/994-40491 | |
| Kit di colesterolo totale | Wako Pure Chemicals | 439-17501 | |
| Proteine totali | Pierce | 23225 | Saggio dell'acido bicinconinnico |
Riferimenti
- Lindsay, F. E. F. The cisterna chyli as a source of lymph samples in the cat and dog. Res. Vet. Sci. 17, 256-258 (1974).
- Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism. Curr. Protoc. Mous....
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Ristampe e permessi
