Articolo metodologico
* These authors contributed equally
Questo articolo descrive i metodi per lo screening dei geni che controllano la permeabilità plasmodesmal e pendenza, quindi, auxina durante la risposta tropico. Ciò comprende la misurazione del grado di risposta tropico in hypocotyl di Arabidopsis thaliana e controllando la permeabilità plasmodesmal da acido 8-idrossipirene-1,3,6-trisolfonico (HPTS) carico e valutazione del livello di fine callose.
L'ormone vegetale auxina gioca un ruolo importante in molti processi di crescita e sviluppo, comprese le risposte tropico alla luce e gravità. La creazione di un gradiente di auxina è un evento chiave che porta a fototropismo e gravitropismo. In precedenza, polare trasporto auxina (PAT) è stato mostrato per stabilire un gradiente di auxina in domini diversi cellulari delle piante. Tuttavia, Han et al. Recentemente dimostrato che per la corretta formazione dell'auxina pendenza, plasmodesmal connettività symplasmic callose mediata tra le celle adiacenti è anche un fattore critico. In questo manoscritto, la strategia per chiarire il ruolo di particolari geni, che possono influenzare fototropismo e gravitropismo alterando la connettività symplasmic attraverso la modulazione sintesi callose plasmodesmal, è discusso. Il primo passo è quello di vagliare le risposte tropicali aberranti da 3 giorni di età piantine eziolati di mutanti o sovra-espressione righe di un gene con il tipo selvatico. Questo screening preliminarepuò portare alla individuazione di una serie di geni che funzionano in PAT o di controllo della connettività symplasmic. La seconda proiezione prevede l'ordinamento dei candidati che mostrano risposte tropicali alterato da influenzare la connettività symplasmic. Per affrontare tali candidati, il movimento di un tracciante symplasmic e la deposizione di callose plasmodesmal stati esaminati. Questa strategia potrebbe essere utile per esplorare nuovi geni candidati che possono regolare la connettività symplasmic direttamente o indirettamente durante risposte tropicali e altri processi di sviluppo.
Le piante, come gli organismi viventi sessili, hanno sviluppato una rete altamente sofisticata di cella-a-cella di segnalazione per affrontare i vari stimoli ambientali. risposte Tropic sono uno dei fenomeni con cui le piante rispondono agli stimoli ambientali. Le piante mostrano due principali risposte tropico, fototropismo e gravitropismo. piante fotosintetiche si piegano verso la fonte di luce da fototropismo per raccogliere il massimo di energia. Analogamente, gravitropismo rende le piante a crescere verso il centro di gravità. Il meccanismo fondamentale che porta a tali risposte tropicali comporta la formazione di pendenza asimmetrica del phytohormone auxina
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
1. Lo screening dei mutanti con Altered fototropico e gravitropica Risposte
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Nella configurazione attuale, desametasone (dex) -inducible linee RNAi di AtGSL8 [d'ora in poi dsGSL8 (+ dex / -dex)] sono stati utilizzati, come omozigote gsl8 mutanti di inserzione T-DNA sono piantina letale 18. Tre giorni di età piantine eziolati di dsGSL8 e piantine wild type con Dex ± sono stati esposti a stimoli fototropiche e gravitropica. Abbiamo scoperto che dsGSL8 (+ DEX) piantine erano difettose in fototropismo e grav.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
In questo manoscritto, una strategia per lo screening linee mutanti / sovra-espressione che sono difettosi nelle risposte fototropiche e gravitropica a causa di alterata callose PD e, di conseguenza, PD SEL è descritto in dettaglio. sintesi callose PD e la degradazione avviene principalmente da sintasi callose e β-1,3-glucanasi, ma regolazione di questi enzimi è controllata da molti fattori a monte. Per verificare tali fattori a monte o candidati che sono direttamente coinvolti nella regolazione del PD, abbiamo creato q.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Gli autori non hanno informativa.
Questa ricerca è stata sostenuta dalla Fondazione Nazionale delle Ricerche di Corea (NRF-2015R1A2A1A10053576), e da una sovvenzione da parte del Next-Generation BioGreen 21 Programma (SSAC, concedere PJ01137901), lo sviluppo rurale Amministrazione, Repubblica di Corea. RK, WS, ABB e DK sono stati sostenuti da Brain Corea 21 programmi più (BK21 +).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| HPTS (sale trisodico dell'acido 8-idrossipirene -1,3,6-trisolfonico) | Sigma | H1529-1G | Colorante fluorescente come tracciante simplasmatico |
| LE Agarosio | Dongin-Genomic | GEL001-500G | Utilizzato per il blocco di agarosio HPTS |
| Forno a microonde | LG-Goldstar | Macchina per l'ebollizione del gel di agarosio | |
| Fiaschetta conica in vetro da 100 ml | Dong Kwang | A0205 | Utilizzata per far bollire l'agarosio HPTS |
| piastra di Petri in gel (35 mm x 10 mm) | SPL life sciences | SPL10035 | Utilizzato per realizzare blocchi di agarosio HPTS e lavare campioni di piante |
| Vetrini per microscopio e vetrini (24 mm x 50 mm) | Marienfeld Laboratory Vetreria | 101222 | Utilizzato per i blocchi di agarosio HPTS e la preparazione microscopica dei campioni |
| Piastre medie MS 125 mm x 125 mm x 20 mm | Piastre SPL per le scienze della vita | SPL11125 | per realizzare il terreno di agar MS |
| Forbici | Germania Acciaio inossidabile | HSB 942-11 | Utilizzato per asportare la regione del gancio dei campioni di piante |
| Miscela di sali basali di Murashige e Skoog (MS) | Duchefa | P10453.01 | MS medium comprese le vitamine. |
| Acido (N-morfolino) etansolfonico (MES) monoidrato | Bioshop | 3G30212 | Per realizzare terreni MS. |
| Impianto agar | Duchefa | P1001.1000 | Per solidificare i terreni MS. |
| Autoclave | ALP | CL-40L | |
| Agitatore | Wise Mix | SHO-1D | Per lavare via il tampone di colorazione blu all'anilina e il colorante HPTS in modo placido. |
| 1 ml Punte blu | Sorenson | 10040 | |
| Pipetta da 1 ml | BioPette | L-1101-2 | |
| Nastro chirurgico | MIcropore | 1530-0 | Per sigillare la piastra MS |
| Blu anilina (blu metilico) | Sigma | M5528-25G | Utilizzato per preparare il tampone di colorazione blu anilina. |
| Glycine | Bioshop | GLN001 | Utilizzato per preparare il tampone di colorazione blu all'anilina. |
| DDG | Sigma | D8375-1G | Utilizzato per l'inibizione delle callose sintasi. |
| Microscopio confocale | Olympus | FV1000MPE SIM | Per controllare la colorazione blu all'anilina e il risultato del carico di colorante HPTS. |
| Agitatore | I lab | K400 | Per miscelare la soluzione di fluidi. |
| Foglio di alluminio | SW foglio | di cottura Per avvolgere i piatti in condizioni di oscurità. | |
| Ipoclorito di sodio | Samjin Industria | Per i semi sterilizzati in superficie |
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Richiedi il permesso di riutilizzare il testo o le figure di questo articolo JoVE
Richiedi permesso