Method Article

Veloce enzimatica Trattamento di proteine ​​per MS rilevamento con un microreattore flusso-through

DOI:

10.3791/53564

⸱

April 6th, 2016

 ,  , 
1Biological Sciences, Virginia Tech

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Viene presentato un protocollo rapido per la digestione proteolitica con un microreattore triptico a flusso continuo costruito internamente accoppiato a uno spettrometro di massa a ionizzazione elettrospray (ESI). Vengono descritti la fabbricazione del microreattore, la configurazione sperimentale e il processo di acquisizione dei dati.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La grande maggioranza di spettrometria di massa (MS) a base di metodi di analisi di proteine ​​implicano un'attività digestione enzimatica prima della rivelazione, tipicamente con tripsina. Questo passo è necessario per la generazione di piccoli peptidi peso molecolare, generalmente con MW <3000-4000 Da, che rientra nell'intervallo di scansione effettiva della strumentazione di spettrometria di massa. protocolli convenzionali coinvolgono O / N digestione enzimatica a 37 ° C. I recenti progressi hanno portato allo sviluppo di una varietà di strategie, tipicamente coinvolge l'uso di un microreattore con enzimi immobilizzati o di una serie di processi fisici complementari che riducono il tempo necessario per proteolitica digestione per alcuni minuti (per esempio, microonde o ad alta pressione). In questo lavoro, si descrive un approccio semplice e conveniente che può essere implementato in qualsiasi laboratorio per la realizzazione rapida digestione enzimatica di una proteina. La proteina (o miscela di proteine) è adsorbito sulla alta perf C18-bonded fase inversaormance particelle di silice cromatografia liquida (HPLC) precaricate in una colonna capillare, e tripsina in tampone acquoso viene infusa in particelle per un breve periodo di tempo. Per attivare il rilevamento on-line MS, i peptidi triptici vengono eluite con un sistema solvente con maggiore contenuto organico direttamente nella sorgente MS ioni. Questo approccio consente di evitare l'uso di particelle ad alto prezzo degli enzimi immobilizzati e non richiede alcun aiuto per il completamento del processo. Protein digestione e l'analisi del campione completo può essere realizzato in meno di ~ 3 min e ~ 30 minuti, rispettivamente.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'identificazione e la caratterizzazione di proteine ​​purificate si ottiene spesso utilizzando tecniche MS. La proteina viene digerito con un enzima e dei suoi peptidi sono ulteriormente analizzato da MS utilizzando un semplice apparato sperimentale infusione. digestione proteolitica è necessaria per la generazione di piccoli frammenti peptidici che rientrano nel range di massa utile della maggior parte degli analizzatori MS, e che può essere facilmente frammentato attraverso bassa energia di collisione di dissociazione indotta per generare aminoacido informazioni sulla sequenza. Per proteine ​​isolate o semplici miscele proteiche, non vi è alcuna ulteriore necessità di separazione cromatografica dei peptidi prima della rivelazione MS. Una miscela di 25-50 peptidi può essere facilmente analizzato infondendo il campione con una pompa a siringa direttamente nella sorgente MS ioni.

Lo spettrometro di massa può eseguire l'analisi e confermare la sequenza di una proteina in un breve lasso di tempo. Con i moderni metodi di acquisizione dati, questo processo può essere realizzato well'ambito pochi minuti o addirittura secondi. Il fattore limitante nel completare l'intero processo in un breve lasso di tempo è la fase di digestione proteolitica. In genere, questa viene eseguita nell'arco di alcune ore (o O / N), in soluzione, a 37 ° C, con substrato: rapporti di enzimi di (50-100): 1. Per ridurre il tempo di digestione enzimatica a minuti o secondi, microreattori enzima immobilizzato, in forma di reattori microfluidici o cartucce disponibili in commercio, sono stati descritti. 1-6 Tipicamente, l'enzima è immobilizzato da covalente, non covalente / adsorbimento fisico, complesso formazione o incapsulamento, 3,6 la maggiore efficienza del processo enzimatico viene abilitato dalla grande superficie-volume e rapporti enzima-to-substrato. Ulteriori vantaggi di reattori immobilizzate comprendono la riduzione autolisi e interferenze da parte dell'enzima in analisi MS, una migliore stabilità enzimatica e riutilizzabilità. Una varietà di approcci, utilizzando il vetro o dispositivi microfabbricate polimerici sono stati descritti,utilizzando enzimi immobilizzati su sfere magnetiche da interazioni antigene-anticorpo, 7,8 intrappolati nelle reti di nanoparticelle d'oro, 9 incapsulato in titanio-allumina sol-gel 10 e nanozeolites, 11 o catturati attraverso Ni-NTA o His-Tag formazione del complesso. In alternativa 6 , sono stati sviluppati capillari aperti tubolari con enzimi immobilizzati, pure. 12 Inoltre, maggiore segmentazione proteolitica è stata dimostrata utilizzando controllata irradiazione a microonde 13 o tecnologia cicli di pressione assistita o pressione (PCT) per ridurre i tempi di reazione a 30-120 min. 14

Nonostante i molteplici vantaggi dei reattori enzima immobilizzato, i costi delle cartucce commerciali è alto, la disponibilità di dispositivi microfluidici per uso di routine è limitato, e l'uso di tecnologie microonde o PCT risultati in necessità di strumentazione aggiuntiva. L'obiettivo di questo lavoro è stato quello di sviluppare un metodo che circumveNTS questi svantaggi, e che può essere facilmente implementato in ogni laboratorio per potenziare ricercatori un approccio semplice ed efficace per l'esecuzione di scissione enzimatica di proteine ​​in preparazione per l'analisi MS in pochi minuti. Questo approccio si basa sull'uso di idrofobici, C18-particelle che sono pre-caricate in un capillare o dispositivo microfluidica, e l'adsorbimento della proteina (s) di interesse nelle particelle seguita da digestione enzimatica durante l'infusione dell'enzima sul letto impaccato e proteine ​​catturato (s). In questo approccio, il substrato viene immobilizzato attraverso interazioni non covalenti, e l'enzima è infuso proteina immobilizzata. L'efficienza proteolitica digestione viene aumentata dalle grandi superfici di particelle che espongono la proteina per la trasformazione enzimatica, distanze e tempi di diffusione da e verso la superficie delle particelle ridotta, migliorato trasferimento di massa, nessun legame covalente che possono influenzare l'attività dell'enzima, capacità rapidamente evaluate combinazioni di diversi enzimi, disponibilità, e multiplexing se il processo viene eseguito in un formato microfluidica. Questo approccio è dimostrato con l'uso di una miscela di proteine ​​standard e tripsina-enzima più comunemente usato per la digestione proteolitica prima della rilevazione ESI-MS. Lo spettrometro di massa utilizzato per la rilevazione in questo studio era uno strumento lineare trappola quadrupolo (LTQ).

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Preparazione del capillare microreattore

  1. Tagliare il diametro interno 100 micron (ID) x 360 micron di diametro esterno (OD) capillare ad una lunghezza di 7-8 cm, e 20 micron ID x 90 micron OD capillare per 3-5 cm con il coltello capillare di vetro; verifica al microscopio che entrambe le estremità capillari hanno un taglio netto, diritta, senza bave sporgenti.
  2. Inserire il 20 um ID x 90 micron OD capillare in un'estremità del 100 micron ID x 360 micron OD capillare, per una lunghezza di ~ 6 mm; in caso di necessità, osservare questa operazione al microscopio.
  3. Applicare una piccola goccia di colla E6000 attorno alla giunzione dei 90 micron OD / 100 micron capillari ID con la fine di un Q-tip, e lasciare che la colla cura O / N a temperatura ambiente.
  4. Tagliare il inserita 20 micron ID x 90 micron OD capillare ad una lunghezza di ~ 10-15 mm; questo sarà l'emettitore Elettrospray.
  5. Pre-tagliare il 1/32 "OD PEEK, 1/16" OD PEEK e 1/16 "PTFE vasca ODzione in pezzi di 4-5 cm di lunghezza; questi saranno i manicotti utilizzati nei sindacati capillari per la fornitura di una connessione senza perdite.
  6. Collegare l'estremità opposta del 100 micron ID x 360 micron OD capillare per un'unione PEEK; usare un manicotto 1/32 "PEEK per la fornitura di una connessione senza perdite.
  7. Inserire / serrare un pezzo di ~ 5 cm di lunghezza 1/16 "tubo PTFE nella estremità opposta del raccordo.
  8. Pesare ~ 4 mg di C18 (5 micron) particelle in un pre-pulito / secca 2 ml flacone di vetro; aggiungere 0,5 ml di isopropanolo, chiudere la fiala e disperdere il liquame nella vasca da bagno ultrasonicatore.
  9. Prelevare con una siringa 250 microlitri di circa 200 pl liquami, inserire l'ago della siringa nel "tubo 1/16 PTFE dell'unione PEEK, e dispensare lentamente l'impasto in 100 micron ID x 360 micron OD capillare, osservare al microscopio come capillare riempie di particelle fino una lunghezza di 2-3 mm di imballaggio è realizzato; questo sarà il microreattore (Figura 1) il 20 μ.m ID capillare trattiene le particelle nel microreattore con un effetto Keystone. 15
  10. Risciacquare microreattore con ~ soluzione 50 ml di H 2 O / CH 3 CN 50:50 v / v, e poi con soluzione ~ 50 ml di H 2 O / CH 3 CN 98: 2 v / v.

2. preparazione di soluzioni campione

Nota: Le operazioni che comportano la manipolazione di solventi organici e acidi e la preparazione della soluzione devono essere eseguite in una cappa aspirante. Indossare occhiali, guanti e indumenti protettivi.

  1. Risciacquare con CH 3 OH e asciugare alcune fiale di vetro (4 ml) e tubi di polipropilene (15 ml).
  2. Preparare 10 ml di una soluzione di H 2 O / CH 3 CN (98: 2 v / v) in una provetta da 15 ml polipropilene miscelando 9,8 ml H 2 O con 200 microlitri CH 3 CN; mescolare mediante ultrasuoni.
  3. Preparare 10 ml di una soluzione di H 2 O / CH 3 CN (50:50 v / v) in una provetta da 15 ml polipropilene miscelando 5 ml H 2 </ sub> O con 5 ml di CH 3 CN; mescolare mediante ultrasuoni.
  4. Preparare 4 ml di una soluzione acquosa acidificata (TFA 0,01% v / v) con l'aggiunta di 4 microlitri TFA (10%) a 4 ml H 2 O / CH 3 CN (98: 2 v / v) in una fiala di vetro 4 ml; mescolare mediante ultrasuoni.
  5. Preparare 4 ml di una soluzione organica acidificata (TFA 0,01% v / v) con l'aggiunta di 4 microlitri TFA (10%) a 4 ml H 2 O / CH 3 CN (50:50 v / v) in una fiala di vetro 4 ml; mescolare mediante ultrasuoni.
  6. Pesare 16 mg di NH 4 HCO 3 con una microbilancia analitica in una fiala di vetro 4 ml; aggiungere 4 ml di H 2 O / CH 3 CN: soluzione (98 2 v / v) e disperdere per sonicazione; questo si traduce in una soluzione 50 mM di NH 4 HCO 3 (pH ~ 7,8) in tampone acquoso.
  7. Pesare 5 mg di proteina standard (ad esempio, albumina di siero bovino, emoglobina α / β, citocromo C, anidrasi carbonica, α-2-HS-glicoproteina, etc.) con una microbilancia analitica in una fiala di vetro 4 ml; aggiungere 4 ml DI wateR e disperdere mediante ultrasuoni; questo genere si traduce in una soluzione ad elevata concentrazione di livello pM.
  8. Preparare 1 ml di soluzione proteica (1-2 mM) diluendo la soluzione a concentrazione alto livello mM con un volume adeguato di NH 4 HCO 3 (50 mM) tampone acquoso; mescolare mediante ultrasuoni.
  9. Preparare la soluzione di tripsina (5 mM) sciogliendo 20 mg sequenziamento grado tripsina in 170 microlitri NH 4 HCO 3 (50 mM) tampone acquoso; disperdere mediante ultrasuoni.

3. apparato sperimentale

Nota: Il sistema LTQ-MS è dotato di una sorgente ESI modificato che comprende un XYZ stadi casa costruzione che abilita l'interfacciamento dello spettrometro di massa a vari approcci ingresso campione.

  1. Scollegare il microreattore capillare dall'unione PEEK e connettersi al PEEK Tee.
  2. Inserire lunga ~ 2 centimetri di filo Pt nel braccio laterale del PEEK Tee; utilizzare un "manicotto 1/32 PEEK per fornire un-Perdita di connessione e per isolare il filo Pt.
  3. Collegare un 50 micron ID x 360 micron OD (~ 0,5 m di lunghezza) trasferimento del campione capillare all'estremità opposta del PEEK Tee; usare un manicotto 1/32 "PEEK per la fornitura di una connessione senza perdite.
  4. Fissare il Tee PEEK sul XYZ-stage e posizionare la ESI emettitore ~ ​​2 millimetri di distanza dal capillare di ingresso spettrometro di massa.
  5. Collegare il filo Pt alla sorgente di alimentazione ESI dello spettrometro di massa.
  6. Collegare l'estremità opposta del capillare trasferimento del campione all'unione di acciaio inossidabile; usare un manicotto 1/16 "PEEK per la fornitura di una connessione senza perdite.
  7. Collegare un lungo 4-5 cm 1/16 "tubo in teflon all'estremità opposta del raccordo in acciaio inox e inserire l'ago della siringa 250 microlitri nel tubo PTFE, accendere la pompa e impostare la portata al valore desiderato (ad esempio, 2 microlitri / min).
  8. tandem Input parametri di acquisizione dati MS nel pacchetto software che controlla lo strumento un MSd salvare come file il metodo per preparare la messa a punto per l'esecuzione di analisi; per il sistema LTQ-MS, utilizzare i parametri di analisi dipendenti seguenti dati: l'esclusione dinamica abilitato per 180 sec con larghezza di massa esclusione ± 1,5 m / z; uno Stato membro scan seguito da uno zoom e MS 2 scansioni su i primi 5 picchi più intensi, zoom larghezza di scansione ± 5 m / z; dissociazione indotta da collisione (CID) parametri impostati in larghezza isolamento 3 m / z, energia di collisione normalizzato del 35%, l'attivazione Q 0.25, e il tempo di attivazione di 30 msec.

4. Configurazione Microfluidic

  1. Preparare un dispositivo microfluidico in vetro o substrati polimerici; 16-18 il layout del dispositivo è fornito in Figura 2A, consistente in un microreattore (1) (0,13 mm Lunghezza larghezza x 2 mm x 50 micron di profondità) collegato ad un ingresso (2 ), uscita (3) e una porta laterale (4); i canali comunicanti per le manipolazioni fluidica sono ~110 micron di larghezza e ~ 50 micron in profondità; una struttura multicanale (5), costituito da ~ 1,5-2 micron profondo x 10 micron di larghezza x 100 micron lunghi microcanali posti 25 micron a parte, fungerà da filtro per trattenere le particelle nel microreattore.
  2. Attiva connessioni fluido consegna al chip incollando connettori specializzati verso le luci di entrata, o escogitando un supporto polimerico che ospita raccordi per la consegna fluido (Figura 2B). 16
  3. Preparare una sospensione di particelle di C18 (5 micron), come descritto al punto 1.8; consegnare la sospensione al microreattore con una siringa utilizzando 1/16 "tubo in teflon collegato alla porta lato di chip (4); chiudere la porta dopo il caricamento delle particelle con colla epossidica e la cura per 1 ora in stufa a 90 ° C 16.
  4. Inserire un capillare (20 micron ID x 90 micron di lunghezza OD x 10 mm) nel porto di uscita, sigillare con la colla E6000, e lasciare che la cura O / N; questo diventerà l'emettitore ESI ( 6).
  5. Collegare un 50 micron ID x 360 micron OD (~ 0,5 m di lunghezza) trasferimento del campione capillare alla porta di ingresso del circuito integrato (2); collegare l'estremità opposta del capillare ad un microlitri siringa 250 e la pompa a siringa, come descritto in 3.6-3.7.
  6. Collocare un leggero connettore PEEK Tee sulla linea di trasferimento del campione appena prima luce di ingresso (2) e inserire un filo di Pt sul braccio laterale della T, come descritto in 3.2; questo sarà l'elettrodo ESI.
  7. Fissare il dispositivo microfluidica sul palco XYZ con l'emettitore ESI posizionato ~ 2 mm di distanza dal capillare spettrometro di massa in ingresso; preparare la MS per l'analisi come descritto in 3.8.

5. Campione Caricamento, proteolitica Digestione e eluizione per MS Analysis

Nota: Tutte le fasi di trasferimento soluzione / campione vengono eseguite con l'ausilio di una pompa a siringa e dovrebbe consentire per alcuni minuti supplementari per completare, per compensare la dead-volumes associati alle linee di trasferimento da e per il microreattore; il tempo necessario dipenderà dalle portate coinvolti.

  1. Risciacquare microreattore e prepararla per analisi infondendo una soluzione acquosa di NH 4 HCO 3 (50 mM) in H 2 O / CH 3 CN (98: 2 v / v) a 2 ml / min per 5 min; utilizzare una siringa 250 microlitri.
  2. Caricare il campione di proteine ​​(1 pM) sul microreattore infondendo la soluzione campione a 2 microlitri / min per 5 min; utilizzare una siringa 250 microlitri.
  3. Infondere la soluzione di tripsina (5 mM) sopra la proteina adsorbita sul microreattore a 2 microlitri / min per 1-3 min.
  4. Quench il processo di digestione proteolitica risciacquando il microreattore con una soluzione acquosa acidificata di TFA (0,01% v / v) in H 2 O / CH 3 CN (98: 2 v / v) a 2 ml / min per 5 min; utilizzare una siringa 250 microlitri.
  5. Avviare eluendo la proteina digerire dal microreattore infondendo una soluzione organica acidificato di TFA (0,01%v / v) in H 2 O / CH 3 CN (50:50 v / v) a 300 Nl / min.
  6. Accendere il processo di acquisizione dei dati MS e la tensione ESI (~ 2.000 V); acquisire i dati MS utilizzando i parametri di acquisizione dati forniti al punto 3.8; osservare l'eluizione dei peptidi trittico.

6. Elaborazione dati

  1. Elaborare i dati in tandem MS con un motore di ricerca compatibile con il formato di dati di MS crudo.
    1. Elaborare i file RAW LTQ-MS utilizzando un organismo specifico database di proteine ​​minimamente ridondante; caricare i dati grezzi nel motore di ricerca, impostare le tolleranze di massa genitore e ioni frammento di 2 e 1 Da rispettivamente, e utilizzare frammenti completamente solo triptici con un massimo di due perse spaccature per la ricerca; non consentono modifiche post-; fissare i tassi di rilevamento di alta e media fiducia falsi (FDR) a 1% e il 3%, rispettivamente, e non consentono modifiche post-traduzionali.
  2. Filtrare i dati per selezionare solo di alta fiduciapeptide corrisponde alle proteine ​​presenti nel database; valutare i risultati proteine ​​e livello peptide.

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Un risultato rappresentativo di un processo di digestione proteolitica eseguito contemporaneamente su una miscela di proteine, con le microreattori sopra descritti (figure 1 e 2), è fornita in Tabella 1. La tabella comprende le sequenze peptidiche uniche che identificano una proteina particolare, la croce punteggio correlazione (Xcorr) (ossia, un punteggio che caratterizza la qualità della partita sperimentale-to-teorico per lo spettro di massa ...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Il microreattore descritto in questo lavoro fornisce un facile da implementare apparato sperimentale per mineralizzazione enzimatica delle proteine ​​per permettere l'analisi MS e identificazione in meno di 30 min. I vantaggi di questo sistema, rispetto agli approcci convenzionali, comprendono semplicità, velocità, basso consumo di reagenti e bassi costi. In particolare, non vi è alcuna necessità di costosi perline tripsina immobilizzati e cartucce. La preparazione del microreattore capillare è semplice (Fig...

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo lavoro è stato supportato dalla sovvenzione NSF/DBI-1255991 a IML.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Trappola ionica ESI-MSThermo ElectronLTQLo spettrometro di massa LTQ viene utilizzato per l'acquisizione di dati MS tandem
Stadio XYZNewportParti multipleLo stadio XYZ costruito in casa viene utilizzato per adattare la sorgente commerciale LTQ nano-ESI per ricevere input da vari sistemi di erogazione del campione
StereomicroscopioOttica EdmundG81-278Il microscopio viene utilizzato per osservare il processo di impacchettamento del microreattore
Bilancia analitica/MetlerVWR46600-204La bilancia viene utilizzata per pesare i campioni di proteine
Bagno ad ultrasuoni/BransonVWR33995-540Il bagno sonico viene utilizzato per miscelare/omogeneizzare i campioni e disperdere il liquame di particelle C18
Pompa a siringa 22Harvard Apparatus552222La micropompa viene utilizzata per il caricamento, il risciacquo e l'eluizione del campione e dell'enzima su e dal microreattore capillare impaccato
Sistema di acqua ultrapuraEMD MilliporeZD5311595 Il sistema idrico MilliQ viene utilizzato per preparare l'acqua deionizzata purificata
Pipettor/Eppendorf (1.000  µ l)VWR53513-410Il pipettatore viene utilizzato per misurare piccoli volumi di soluzioni campione
Pipettor/Eppendorf (100  µ l)VWR53513-406Il pipettatore viene utilizzato per misurare piccoli volumi di soluzioni campione
Pipettor/Eppendorf (10  µ l)VWR53513-402Il pipettatore viene utilizzato per misurare piccoli volumi di soluzioni di campioni
Capillare di silice fusa (100 &; micro; m ID x 360 µ TSP100375capillare viene utilizzato per la fabbricazione del microreattore
Capillare in silice fusa (20  µ m ID x 100 & micro; TSP020090capillare viene utilizzato per la fabbricazione dell'emettitore ESI
Capillare in silice fusa (50  µ m ID x 360 µ TSP050375capillare viene utilizzato per trasferire i campioni e l'eluente dalla pompa a siringa al microreattore capillare
Mannaia capillareSupelco23740-UQuesto è uno strumento per il taglio di capillari di silice fusa alla lunghezza desiderata
CollaProdotti EcletticiE6000 CraftQuesta colla viene utilizzata per fissare l'emettitore ESI nel microreattore capillare o nel chip microfluidico
Colla epossidicaEpo-Tek353NDTQuesta colla viene utilizzata per sigillare il foro di ingresso microfluidico attraverso il quale vengono caricate le particelle C18
Particelle C18 a fase inversa (5  µ m)Agilent TechnologiesZorbax 300SB-C18Si tratta di particelle C18 su cui vengono adsorbite le proteine; le particelle sono state estratte da un 4  mm x 20 cm Colonna LC C18 di Agilent
Siringa/vetro (250 µ l)Hamilton81130-1725RNLe siringhe di vetro vengono utilizzate per caricare il liquame di particelle C18 nel microreattore capillare e per fornire il campione e gli eluenti al microreattore
Unione PEEK riducente interna (da 1/16" a 1/32")ValcoZRU1.5FPKQuesto raccordo viene utilizzato per collegare il 250 µ l. siringa al microreattore per il caricamento del 5 µ M liquame di particelle
Raccordo in acciaio inossidabile (1/16")ValcoZU1XCIl raccordo in acciaio inossidabile viene utilizzato per collegare l'ago della siringa in vetro al capillare per infusione
Connettore a T in PEEK per microvolume (1/32")ValcoMT.5XCPKIl raccordo a T in Peek viene utilizzato per collegare il capillare di trasferimento del campione al microreattore capillare; sul suo braccio laterale, consente l'inserimento del cavo Pt
Connettore a T (peso leggero)ValcoC-NTXFPKQuesto connettore a T viene utilizzato per applicare la tensione ESI al chip microfluidico attraverso la linea di trasferimento del campione
Filo Pt (0,404 mm)VWR66260-126Il filo Pt fornisce il collegamento elettrico per la generazione ESI ed è collegato al tubo in PTFE dell'alimentatore ESI per spettrometro di massa
(1/16" OD)ValcoTTF115-10FTIl tubo in teflon viene utilizzato per consentire un collegamento a tenuta d'aria tra l'ago della siringa e il raccordo in acciaio inossidabile 
Tubo in PEEK (0,015" ID x 1/16" OD)Upchurch Scientific1565Il tubo in Peek viene utilizzato come manicotto per consentire un collegamento a tenuta d'aria tra il raccordo in acciaio inossidabile e il 50  µ m Tubo in PEEK capillare di trasferimento ID
(0,015" ID x 1/32" OD)ValcoTPK.515-25Il tubo in Peek viene utilizzato come manicotto per consentire un collegamento senza perdite tra i capillari in silice fusa e il Peek Tee
Tagliatubi in polimero tagliato pulitoValcoJR-797Questo cutter viene utilizzato per pre-tagliare 1/16" e 1/32' Tubo in polimero Peek che viene utilizzato come manicotto per connessioni senza perdite in pezzi di ~4-5 cm di lunghezza
Fiala ambrata (2 ml)Agilent HP-5183-2069Le fiale vengono utilizzate per preparare le soluzioni del campione e l'impasto di particelle C18
Flaconcino ambrato (4 ml)VWR66011-948I flaconi vengono utilizzati per preparare soluzioni campione
Tubo in polipropilene (15  ml)Fisher12-565-286DLe fiale sono utilizzate per preparare soluzioni tampone
Cilindro (100 ml)VWR24710-463Il cilindro è utilizzato per misurare i volumi di solvente
Cilindro (10 ml)VWR24710-441Il cilindro è utilizzato per misurare i volumi di solvente
Puntali per pipette (1.000 &; micro; l)VWR83007-386I puntali per pipette sono utilizzati per misurare piccoli volumi di soluzioni campione
Puntali per pipette (100 &; micro; l)VWR53503-781I puntali per pipette sono utilizzati per misurare piccoli volumi di soluzioni campione
Puntali per pipette (10 &; micro; l)VWR53511-681I puntali per pipette sono utilizzati per misurare piccoli volumi di soluzioni di campioni
Substrati di vetroNanofilm B270 corona bianca, 3" x 3"Si tratta di substrati di vetro per la fabbricazione di microchip
Raccordo dado maschio (1/16")UpchurchP203XQuesto raccordo viene utilizzato per collegare i capillari di trasferimento al chip microfluidico
Gruppo NanoportUpchurchN-122HQuesto raccordo viene utilizzato per collegare i capillari di trasferimento al chip microfluidico
Standard proteiciSigmaMultiple #
Acetonitrile, grado HPLCFisherA955
Metanolo, gradoHPLCFisherA452
Isopropanolo, grado HPLCSigma650447
Acido trifluoroaceticoSigma302031
Bicarbonato di ammonioAldrichA6141
Tripsina, grado di sequenziamentoPromegaV5111
Questo Questo Questo

References

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