L'attivazione immunitaria materna (MIA) è un modello per un fattore di rischio ambientale di autismo e schizofrenia. L'obiettivo di questo articolo è fornire una procedura passo dopo passo su come indurre la MIA nei topi gravidi al fine di migliorare la riproducibilità di questo modello.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Induzione di materna immunitario attivazione nei topi a Mid-gestazione stage con Viral Mimic poli (I: C)
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il modello di attivazione immunitaria materna (MIA) è sempre più apprezzato come modello di roditore per il fattore di rischio ambientale di vari disturbi psichiatrici. Numerosi studi hanno dimostrato che il modello MIA è in grado di mostrare la validità facciale, costruttiva e predittiva che sono rilevanti per l'autismo e la schizofrenia. Per modellare la MIA, i ricercatori usano spesso acido poliinosinico mimico virale (poli(I:C)) per attivare il sistema immunitario nei roditori gravidi. Generalmente, la prole della madre attivata dal sistema immunitario mostra anomalie comportamentali e alterazioni fisiologiche associate all'autismo e alla schizofrenia. Tuttavia, l'iniezione di poli(I:C) con dosaggi diversi e in momenti diversi potrebbe portare a risultati diversi perturbando lo sviluppo cerebrale in fasi diverse. Qui forniamo un metodo dettagliato per indurre la MIA mediante iniezione intraperitoneale (i.p.) di 20 mg/kg di poli (I:C) a metà gestazionale embrionale 12,5 giorni (E12.5). È stato dimostrato che questo metodo induce una risposta infiammatoria acuta nell'asse materno-placentato-fetale, che alla fine si traduce nelle perturbazioni cerebrali e nei fenotipi comportamentali associati all'autismo e alla schizofrenia.
Introduzione
Il concetto di attivazione immunitaria materna (MIA) proviene dagli studi epidemiologici sulla associazione tra infezione materna con autismo e la schizofrenia 1. A causa dell'assenza di patogeni virali rilevabili replicanti nella placenta o cervello fetale dopo l'infezione virale materna 2,3, l'effetto dell'infezione sulla prole è ipotizzato essere causato dalla attivazione del sistema immunitario materno piuttosto che i patogeni stessi .
Per chiarire il rapporto causa-effetto tra MIA e disturbi psichiatrici, l'iniezione di sintesi chimica, virale mimica doppio polyinosinic RNA incagliato: acido ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutti i protocolli sono stati eseguiti sotto l'approvazione del California Institute of Technology Comitato cura e l'uso di animali Istituzionale (IACUC).
1. Preparazione per le coppie Timed-accoppiamento
- Utilizzare almeno 6 dighe per esperimenti comportamentali e 3 per l'analisi di espressione genica.
NOTA: utilizzare il doppio del numero di topi femmina stimato, in quanto solo il 50% dei topi verrà inserito dal temporizzata-accoppiamento. - Utilizzare topi di sesso femminile senza gravidanza prima e in 8-16 settimane di età.
NOTA: i topi femmine che hanno esposizione sessuale prima di topi ma....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
L'iniezione di 20 mg / kg poli (I: C) a E12.5 potrebbe evocare una risposta infiammatoria acuta nell'asse materno-placentare-fetale e precipitare un effetto cronica allo sviluppo del cervello e fenotipi comportamentali 12,13. Elevati livelli di citochine proinfiammatorie una, interleuchina (IL) -6, è un indicatore affidabile della risposta infiammatoria acuta dopo MIA. Il momento di picco per IL6 espressione genica nella placenta e nel cervello del feto .......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
MIA induzione a differenti finestre temporali perturba diversi eventi di sviluppo del cervello nei roditori, e di conseguenza porta a diverse anomalie comportamentali e neuropatologie nella prole. Qui, abbiamo descritto un protocollo per indurre MIA nei topi con poli (I: C) iniezione E12.5. Questo metodo di MIA induzione porta a comportamentale, neurologiche, immunologiche, e le anomalie gastrointestinali associati con l'autismo e la schizofrenia nella prole 8,10,11,16. È importante notare che, a causa MI.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo onorare il compianto Dr. Paul H. Patterson per il suo contributo al progresso del modello di MIA, l'autismo, la schizofrenia e la ricerca. Riconosciamo Sarkis K. Mazmanian per il suo grande sostegno su questo protocollo; Ruben M. Bayon, Yvette Garcia-Flores, Karen C. Lencioni, e Leslie A. Neumann per l'assistenza amministrativa; Ali Khoshnan e Jan C. Ko per l'assistenza su riprese; Elaine Y. Hsiao e Natalia Malkova per i loro consigli su MIA induzione; Jeffrey S. Cochrane, Joaquin Gutierrez, Kwan F. Lee, Jaime Rodriguez, Lorena C. Sandoval, e Natalie A. Verduzco per la loro zootecnia esperto. Questo lavoro è stato supportato dal NIH Conte Centro Award (NIH 5P50MH0863....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Poliinosinico... acido policitidilico sale di potassio | SIGMA | P9582 | |
| 0,9% cloruro di sodio INJ. USP | HOSPIRA | NDC 0409-4888-10 | |
| MONOJECT insulina sirinage 3/10 ml 29 G x 1/2" | COVIDIEN | 8881600145 | |
| 50 ml tubi con tappo a vite conico | USA SCIENTIFIC | 1500-1211 | |
| Spettrofotometro Nanodrop 1000 | THERMO SCIENTIFIC | 1000 | |
| Stereomicroscopio | Wild Heerbrugg | M5A | Pinze |
| Dumont #5 opzionali Inox Dimensione della punta .10 X .06 mm | Roboz | RS-5045 | Reagente |
| opzionale per la stabilizzazione dell'RNA RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| Reagente TRIzol | Life Technologies | 15596-026 | opzionale |
| RQ1 DNase | Promega | M610A | |
| iScript cDNA | Bio-Rad | 170-8891 | |
| Miscela master universale SYBR verde FastStart opzionale con ROX | Roche | 4913922001 | PCR |
| in tempo reale | ABI | 7300 | Primer opzionale |
| : Il6 forward | Life Technologies | TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC | Primer opzionale |
| : Il6 Reverse | Life Technologies | TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC | Primer opzionale |
| : beta-actina forward | Life Technologies | AGAGGGAAATCGTGCGTGAC | Opzionale |
| Primer: beta-actina Reverse | Life Technologies | CAATAGTGATGACCTGGCCGT | |
| Piastra di reazione ottica a 96 pozzetti MicroAmp | Technologies | 4306737 | |
| Pellicola adesiva ottica Optionl MicroAmp | Life Technologies | 4311971 | Optionl |
| EthoVision | Noldus | EthoVision | Optionl |
| SR-LAB apparatus (PPI) | San Diego Instruments | SR-LAB | Optionl |
| Marmi | PENN-PLAX | Marmi di pietre preziose blu | Optionl |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (DPBS) | Life Technologies | 21600-069 | Optionl |
| Paraformaldeide | MACRON | 2621-59 | Optionl |
| Vibratome | Leica | VT1000 S | Optionl |
| Sodium azide | Sigma | S2002 | Optionl |
| Triton x-100 | Sigma | X100 | |
| Optionl Soluzione di perossido di idrogeno | Sigma | 18312 | Optionl |
| Siero di capra | Vector Laboratories | S-1000 | Optionl |
| Anticorpo anti-calbindina di coniglio | Abcam | ab11426 | Optionl |
| Capra biotinlata anti-coniglio IgGantibody | Vector Laboratories | BA-1000 | Optionl |
| VECTASTAIN ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | Optionl |
Riferimenti
- Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
- Fatemi, S. H., et al.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
