Ex vivo dal vivo Imaging di polmone metastasi e il loro micro

Renske J.E. van den Bijgaart; Niwen Kong; Carrie Maynard; Vicki Plaks

doi:10.3791/53741

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Articolo metodologico

Ex vivo dal vivo Imaging di polmone metastasi e il loro micro

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DOI:

10.3791/53741

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3 febbraio 2016

Renske J.E. van den Bijgaart^*¹ , Niwen Kong^*¹ , Carrie Maynard¹^,² , Vicki Plaks¹^,³

¹Department of Anatomy, University of California, ²Hubrecht Institute-Royal Dutch Academy of Science and University Medical Center Utrecht, ³Department of Cell and Developmental Biology, Sackler Faculty of Medicine

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Descriviamo un metodo relativamente semplice per ex vivo l'imaging dal vivo del tumore interazioni cellula-stroma all'interno di metastasi polmonari, utilizzando i reporter fluorescenti nei topi. Utilizzando la microscopia confocale spinning-disk, questa tecnica consente la visualizzazione di cellule vive per almeno 4 ore e potrebbe essere adattato per studiare altre malattie polmonari infiammatorie.

Abstract

Metastasi è una delle principali cause di morbilità e mortalità per cancro. Metastasi è un processo a più fasi e causa della sua complessità, le esatte processi cellulari e molecolari che regolano la diffusione e la crescita metastatica sono ancora sfuggente. Immagini dal vivo permette la visualizzazione delle interazioni dinamiche e spaziali delle cellule e il loro microambiente. I tumori solidi comunemente metastasi ai polmoni. Tuttavia, la posizione anatomica dei polmoni rappresenta una sfida per l'imaging intravitale. Questo protocollo fornisce un metodo relativamente semplice e veloce per ex vivo l'imaging dal vivo delle interazioni dinamiche tra le cellule tumorali e la loro stroma circostante all'interno di metastasi polmonari. Utilizzando questo metodo, la motilità delle cellule tumorali, nonché le interazioni tra cellule tumorali e cellule stromali nel loro microambiente possono essere visualizzati in tempo reale per diverse ore. Utilizzando topi transgenici reporter fluorescente, una linea cellulare a fluorescenza, iniettabili fluorescentemolecole e / o anticorpi, componenti multipli del microambiente polmonare possono essere visualizzati, come i vasi sanguigni e cellule immunitarie. Per immagine diversi tipi cellulari, è stato usato un disco rotante microscopio confocale che permette a lungo termine di imaging continuo con acquisizione delle immagini rapida, a quattro colori. filmati time-lapse compilati da immagini raccolte su più posizioni e piani focali mostrano le interazioni tra metastatico dal vivo e le cellule immunitarie per almeno 4 ore. Questa tecnica può essere ulteriormente utilizzato per testare chemioterapia o terapia mirata. Inoltre, questo metodo potrebbe essere adattato per lo studio di altre patologie polmonari correlati che possono influenzare il microambiente polmonare.

Introduzione

L'aspetto più letale del cancro sono le metastasi, che rappresentano oltre il 90% della morbilità e della mortalità correlate al cancro¹. La metastasi è un processo a più fasi e, a causa della sua complessità, gli esatti meccanismi cellulari e molecolari che governano la disseminazione e la crescita metastatica sono ancora sfuggenti. Per metastatizzare, le cellule tumorali nel tumore primario devono staccarsi dalle cellule vicine e dalla membrana basale, attraversare la matrice extracellulare, intravasare, viaggiare attraverso vasi sanguigni o linfatici, stravasare nel sito secondario e, infine, sopravvivere e stabilire tumori secondari. Oltre alle propriet....