Gli strumenti utilizzati per visualizzare la rigenerazione vascolare richiedono metodi per contrastare gli alberi vascolari. Questo film ha dimostrato una delicata tecnica di iniezione utilizzata per ottenere un contrasto ottimale degli alberi vascolari e illustra i potenziali benefici derivanti da un'analisi dettagliata del campione risultante utilizzando μCT e sezioni istologiche seriali.
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Articolo metodologico
Visualizzazione dei Vascolare e parenchimale rigenerazione dopo il 70% epatectomia parziale in topi normali
In questo articolo
Sommario
Abstract
Una procedura di iniezione silicone modificato è stato utilizzato per la visualizzazione dell'albero vascolare epatica. Questa procedura consisteva di iniezione in vivo del composto siliconico, tramite un catetere di G 26, nel portale o vena epatica. Dopo l'iniezione di silicone, organi sono stati espiantati e preparate per la scansione ex-vivo micro-CT (μCT). La procedura di iniezione di silicone è tecnicamente impegnativo. Il raggiungimento di un risultato di successo richiede una vasta esperienza microchirurgico dal chirurgo. Una delle sfide di questa procedura consiste nel determinare il tasso di perfusione adeguata per il composto di silicone. Il tasso di perfusione per il composto di silicone deve essere definito in base al emodinamica del sistema vascolare di interesse. tasso di perfusione inappropriato può portare ad una perfusione incompleta, la dilatazione artificiale e rottura di alberi vascolari.
La ricostruzione 3D del sistema vascolare era basato su TAC e stata ottenuta utilizzandosoftware preclinica quali HepaVision. La qualità dell'albero vascolare ricostruito era direttamente correlato alla qualità di perfusione silicone. parametri vascolari Successivamente calcolati indicativi di crescita vascolare, come il volume vascolare totale, sono stati calcolati sulla base delle ricostruzioni vascolari. Contrasto dell'albero vascolare con silicone consentito per il successivo work-up istologico del campione dopo la scansione μCT. Il campione possono essere sottoposti a sezioni seriate, analisi istologica e scansione scivolo intero, e successivamente alla ricostruzione 3D degli alberi vascolari basati su immagini istologiche. Questo è il presupposto per la rilevazione di eventi molecolari e la loro distribuzione rispetto alla dell'albero vascolare. Questa procedura di iniezione silicone modificato può anche essere utilizzato per visualizzare e ricostruire i sistemi vascolari di altri organi. Questa tecnica ha il potenziale per essere applica estesamente agli studi riguardanti l'anatomia vascolare e la crescita in vari un animalemodelli di malattia ND.
Introduzione
Rigenerazione epatica è spesso determinato misurando l'aumento del peso del fegato e del volume e valutando il tasso di proliferazione epatociti 16. Tuttavia, la rigenerazione del fegato è non solo induce la rigenerazione parenchimale ma anche la rigenerazione vascolare 6. Pertanto, crescita vascolare debbano esaminare ulteriormente rispetto al suo ruolo nella progressione della rigenerazione epatica. La visualizzazione del sistema vascolare epatico è fondamentale per far progredire la nostra comprensione della rigenerazione vascolare. Numerosi metodi indiretti sono stati sviluppati per studiare i meccanismi molecolari alla base della rigene....
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Protocollo
Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono stati approvati dalla Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz Abteilung Tiergesundheit und Tierschutz, Germania. Poiché il sistema venoso portale è stato visualizzato separatamente dal sistema venoso epatica, erano necessari animali separate per i diversi alberi vascolari.
1. Reagenti Preparazione
- soluzione di eparina-salina
- Aggiungere 0,1 ml di eparina in 10 ml di soluzione salina (5 IU / ml).
- miscela composta silicone
- Aggiungere 2 ml di MV-120 in una provetta da 5 ml. Diluire MV-120 con l'aggiunta di 3 ml MV diluente per ottenere un....
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Risultati
Criteri di qualità
La qualità di iniezione di silicone può essere giudicato ad occhio nudo durante la procedura. I piccoli vasi sulla superficie del fegato riempiono gradualmente con il composto blu. Se la struttura vascolare normale è stato osservato sulla superficie epatica, la qualità iniezione gomma siliconica era buono. Se il volume di perfusione era insufficiente, i piccoli vasi sulla superficie epatica .......
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Discussione
Contrasto dell'albero vascolare mediante iniezione di silicone e scansione μCT è stata introdotta in modelli tumorali e modelli di malattie neurologiche frequentemente per studiare la progressione angiogenico 5,7,8,10. Miglioramenti nella metodologia di iniezione di silicone sono state fatte in questo studio per la visualizzazione e la quantificazione di crescita vascolare dopo epatectomia parziale in topi.
Ci sono un certo numero di passaggi critici che richiedono attenzione .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori riconoscono il finanziamento da parte del Ministero tedesco dell'Istruzione e della Ricerca (BMBF) tramite la rete di biologia dei sistemi "Virtual Liver", numero di sovvenzione 0315743 (ExMI), 0315765 (UK Jena), 0315769 (MEVIS). Gli autori ringraziano anche Frank Schubert per il supporto tecnico.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| PERFUSOR® VI | B.BRAUN | 87 222/0 | |
| Pipetus®-akku | Hirschmann | 9907200 | |
| Pipets | Greiner | 606180 | |
| micro forbici | Strumenti di scienze fini (F· S· L) | No. 14058-09 | |
| micro serrefine | Strumenti per le scienze fini (F· S· L) | No.18055-05 | |
| Micro morsetti applicatore | Fine Science Tools (F· S· L) | No. 18057-14 | |
| Micro pinze diritte | Strumenti per la scienza fine (F· S· L) | No. 00632-11 | |
| Micro pinze curve | Strumenti per la scienza fine (F· S· L) | No. 00649-11 | |
| portaaghi | Strumenti per le scienze fini (F· S· L) | No. 12061-01 | |
| Siringa da 1 ml | B.Braun | 9161406V | |
| Siringa da 5 ml | B.Braun | 4606051V | |
| Linee di prolunga e di collegamento | B.Braun | 4256000 | 30 cm, interno ø 1,2 mm |
| 6-0 seta (Perma-Hand Seide) | Ethicon | 639H | |
| 6-0 prolene | Ethicon | 8711H | |
| Microfil® Diluente MV | FLOW TECH, INC | ||
| Microfil® MV - 120 | FLOW TECH, INC | MV - 120 (blu) | |
| Agente indurente VV | FLOW TECH, INC | ||
| Eparina 2500 I.E./5 ml | Rotexmedica | ETI3L318-15 | |
| Soluzione salina | Fresenius Kabi Deutschland GmbH | E15117/D DE | |
| Imalytics Software preclinico | Imaging molecolare sperimentale, RWTH Università di Aquisgrana, Germania | ||
| HepaVision | Fraunhofer MEVIS, Brema, Germania | ||
| NanoZoomer 2.0-HT Scanner digitale per vetrini | Hamamatsu Electronic Press, Giappone | C9600 | |
| Tomoscopio Duo CT | CT Imaging GmbH, Erlangen, Germania | TomoScope® Sinergia |
Riferimenti
- Bearden, S. E., Segal, S. S. Neurovascular alignment in adult mouse skeletal muscles. Microcirculation. 12 (2), 161-167 (2005).
- Brown, R. P., Delp, M. D., Lindstedt, S. L., Rhomberg, L. R., Beliles, R. P. Physiological parameter values for physiologically based pharmacokin....
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Ristampe e permessi
