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Articolo metodologico

Metodi di acuta e subacuta murino arti posteriori ischemia

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DOI:

10.3791/54166

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21 giugno 2016

In questo articolo

Sommario

L'induzione chirurgica dell'ischemia degli arti posteriori nel topo è utile per esaminare l'angiogenesi, tuttavia questa è compromessa in alcuni ceppi di topi consanguinei che mostrano una marcata necrosi tissutale indotta da ischemia. Vengono descritti metodi per indurre l'ischemia subacuta degli arti utilizzando costrittori ameroidi per aggirare questo problema attraverso l'induzione di un'occlusione arteriosa graduale.

Abstract

malattia periferica arteriosa (PAD) è una delle principali cause di morbilità e mortalità cardiovascolare nei paesi sviluppati, e modelli animali che riproducono in modo affidabile la malattia umana sono necessarie per lo sviluppo di nuove terapie per questa malattia. Il modello di topo hindlimb ischemia è stato ampiamente utilizzato per questo scopo, ma la pratica standard di indurre ischemia dell'arto acuta mediante legatura dell'arteria femorale può provocare la necrosi tissutale sostanziale, compromettere la capacità degli investigatori di studiare le risposte vascolari e tessuto muscolare scheletrico all'ischemia . Un approccio alternativo alla legatura dell'arteria femorale è l'induzione di progressiva occlusione dell'arteria femorale attraverso l'uso di costrittori AMEROID. Quando posizionato intorno femorale uguali o differenti posizioni come i siti di legatura dell'arteria femorale, questi dispositivi occludono l'arteria più di 1 - 3 giorni con conseguente più graduale, subacuta ischemia. Ciò si traduce in meno consistente necrosi dei tessuti muscolo scheletrico, which può imitare più da vicino le risposte visto in PAD umana. Perché background genetico influenze esiti in entrambi i modelli di ischemia acuta e subacuta, considerazione del ceppo di topi in fase di studio è importante nella scelta del modello migliore. Questo documento descrive la procedura corretto posizionamento anatomico di legature o costrittori AMEROID sul mouse arteria femorale per indurre subacuta o ischemia degli arti posteriori acuta nel topo.

Introduzione

Malattia periferica arteriosa (PAD) è una delle principali cause di morbilità e mortalità cardiovascolare nei paesi sviluppati 1. risultati PAD da ostruzione aterosclerotica delle arterie periferiche che porta a ischemia con conseguente dolore da sforzo o di riposo e, occasionalmente, ulcere e cancrena che necessitano di amputazione degli arti non-guarigione. Terapie mirate PAD sono dirette principalmente verso endovascolare 2 o rivascolarizzazione chirurgica 3, come essenzialmente terapie mediche efficaci esistono 4.

Purtroppo, la rivascolarizzazione è spesso di beneficio limitato, come bypass ....

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo il protocollo approvato dal Comitato cura e l'uso Duke Istituzionale Animal. topi maschi sono stati utilizzati in questo studio, anche se entrambi i sessi può essere utilizzato come indicato ai fini scientifica dello studio.

1. Depilazione

  1. Prima di induzione di anestesia, impostare una zona di preparazione pre-chirurgica consiste di una piastra elettrica coperta a 37 ° C e una porta nosecone connesso al flusso continuo di isoflurano.
  2. Posizionare il mouse nella camera di induzione dell'anestesia. Impostare il flussometro O 2 a 1 L / min ....

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Risultati

La corretta identificazione del sistema vascolare del mouse arti posteriori è fondamentale per garantire la riproducibilità delle tecniche per indurre sia subacuta e ischemia degli arti posteriori acuta, come descritto qui. Oltre alla variazione intrinseca in studi sugli animali, altri fattori possono introdurre variabilità laser Doppler perfusione (LDPI), compreso il tipo di anestesia, la posizione dell'animale (vs supina prona), e la temperatura corporea (vedere Fi.......

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Discussione

Forse il passo più difficile in questa procedura è la separazione dell'arteria femorale dalla vena femorale. Il diametro maggiore e pareti più sottili della vena femorale rispetto a quelli dell'arteria aumentano la suscettibilità alle perforazioni e strappi durante la manipolazione chirurgica. La probabilità di interferire vena può essere ridotto mantenendo la ferita umida utilizzando un tampone sterile inumidito con PBS. È altresì importante garantire che tutti pinze sono affilate, allineate, e priva di interru.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato supportato dalle sovvenzioni NIH R21HL118661, R56HL124444 e R01HL124444 a CDK e dalle sovvenzioni NIH R00HL103797 e R01HL125695 a JMM.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Dumont #5/45 PinzeFine Science Tools11251-35Dumoxel
Dumont Style 5 Mini PinzeFine Science Tools11200-14Forbici
Bonn Extra Fine Inox Fine Science Tools14084-08
7 - 0 Sutura di setaSharpointDA-2527N
5 - 0 Sutura Vicryl rivestitaEthiconJ463G
Graefe PinzeStrumenti per le scienze11053-10
Forbici a molla VannasStrumenti per le scienze15000-03
Lacrime artificiali UnguentoRugby Laboratories0536-6550-91
Nastro chirurgico3M1530-0
Tamponi di cotone finiContecSC-4
Regolatore di temperaturaPhysitempTCAT-2DF
Ameroid ConstrictorsResearch Instruments SWMMC-0.25 x 1.00-SS
Hot Bead Sterilizer
Deltaphase Isothermal PadBraintree Scientific39DP
Needle DriverFine Science Tools
Soluzione salina tamponata con fosfato Gibco10010-023
Moor LDPIMoor InstrumentsmoorLDI2
moorLDI Software di misurazioneMoor Instrumentsv. 6.0
Crema depilatoriaNair

Riferimenti

  1. Criqui, M. H., Aboyans, V. Epidemiology of peripheral artery disease. Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).
  2. Thukkani, A. K., Kinlay, S. Endovascular intervention for peripheral artery disease. Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).
  3. Vartanian, S. M., Conte, M. S.

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Ristampe e permessi

Tag

Legatura dell'arteria femoralecostrittore ameroidimaging della perfusione tramite Laser Dopplermodello di arto posteriore di topoarteriopatia perifericaischemia acutaischemia subacutaprocedura chirurgicaanatomia vascolare