Allevamento la mosca della frutta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sotto axeniche e Gnotobiotic Condizioni

Melinda L. Koyle; Madeline Veloz; Alec M. Judd; Adam C.-N. Wong; Peter D. Newell; Angela E. Douglas; John M. Chaston

doi:10.3791/54219

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Articolo metodologico

Allevamento la mosca della frutta

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DOI:

10.3791/54219

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30 luglio 2016

Melinda L. Koyle¹ , Madeline Veloz¹ , Alec M. Judd¹ , Adam C.-N. Wong²^,⁴ , Peter D. Newell²^,⁵ , Angela E. Douglas²^,³ , John M. Chaston¹^,²

¹Department of Plant and Wildlife Sciences, Brigham Young University, ²Department of Entomology, Cornell University, ³Department of Molecular Biology and Genetics, Cornell University, ⁴Division of Infectious Diseases, Boston Children's Hospital, Harvard Medical School, ⁵Biological Sciences, SUNY Oswego

In questo articolo

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Sommario

Un metodo per l'allevamento di Drosophila melanogaster in condizioni axeniche e gnotobiotic è presentato. Fly embrioni vengono dechorionated in ipoclorito di sodio, trasferiti asetticamente alla dieta sterili, e allevati in contenitori chiusi. Inoculando dieta ed embrioni con i batteri porta ad associazioni gnotobiotic, e la presenza di batteri è confermata dalla placcatura di tutto il corpo omogenati Drosophila.

Abstract

L'influenza dei microbi su una miriade di tratti e comportamenti animali è stata sempre più riconosciuta negli ultimi anni. Il moscerino della frutta Drosophila melanogaster è un modello per la comprensione delle interazioni microbiche con gli ospiti animali, facilitato da approcci per allevare campioni di grandi dimensioni di Drosophila in condizioni prive di microrganismi (axenici) o con comunità microbiche definite (gnotobiotici). Questo lavoro delinea un metodo per la raccolta di embrioni di Drosophila, la deteroionazione e la sterilizzazione con ipoclorito e il trasferimento a una dieta sterile. Gli embrioni sterilizzati vengono trasferiti in una dieta sterile in provette da centrifuga da 50 ml e le larve e gli adulti in via di sviluppo rimangono privi di microbi esogeni fino all'apertura delle fiale. In alternativa, i moscerini con un microbiota definito possono essere allevati inoculando dieta sterile ed embrioni con specie microbiche di interesse. Descriviamo l'introduzione di 4 specie batteriche per stabilire un microbiota gnotobiotico rappresentativo in Drosophila. Infine, descriviamo gli approcci per confermare la composizione della comunità batterica, compreso il test se la Drosophila axenica rimane priva di batteri nell'età adulta.

Introduzione

La maggior parte degli animali sono intimamente associati con i batteri ( 'microbiota') dalla nascita alla morte ^1. I confronti di ( 'convenzionale') gli animali privi di microrganismi ( 'axeniche') e di microrganismi-associati hanno dimostrato microbi influenzano diversi aspetti della salute degli animali, tra cui metabolica, nutrizionale, vascolari, epatiche, respiratorio, immunologico, endocrino, e la funzione neurologica ^2. La mosca della frutta Drosophila melanogaster è un modello chiave per comprendere molti di questi processi in presenza di microbi ^3,4 e per studiare l'influenza microbiota s....