Comportamenti olfattive analizzati da Computer di monitoraggio di Drosophila In un Olfattometro quattro quadranti

Sommario

Descriviamo qui un metodo di configurazione comportamentale e di analisi dei dati per analizzare le risposte olfattive di un massimo di 100 mosche dell'aceto (Drosophila melanogaster). Questo sistema può essere utilizzato con stimoli olfattivi singoli o multipli e può essere adattato per l'attivazione optogenetica o il silenziamento di sottogruppi neuronali.

Abstract

Una sfida chiave in neurobiologia è capire come i circuiti neurali funzionano per guidare i comportamenti appropriati su animali. Drosophila melanogaster è un sistema eccellente modello per tali indagini a causa dei suoi comportamenti complessi, potenti tecniche genetiche, e del sistema nervoso compatto. Laboratorio analisi comportamentale sono da tempo utilizzati con Drosophila per simulare le proprietà dell'ambiente naturale e studiare i meccanismi neurali alla base dei comportamenti corrispondenti (ad es fototassi, chemiotassi, l'apprendimento sensoriale e memoria) ^1-3. Con la recente disponibilità di grandi collezioni di linee di Drosophila transgeniche che un'etichetta specifica sottoinsiemi neurali, test comportamentali hanno assunto un ruolo di primo piano per collegare i neuroni con i comportamenti ^4-11. paradigmi versatili e riproducibili, insieme con le routine di calcolo alla base per l'analisi dei dati, sono indispensabili per test rapidi di linee di volo candidati con varie Genotypes. Particolarmente utili sono configurazioni che sono flessibili in numero di animali esaminati, la durata degli esperimenti e la natura degli stimoli presentati. Il dosaggio di scelta dovrebbe generare dati riproducibile che è facile da acquisire ed analizzare. Qui, presentiamo una descrizione dettagliata di un sistema e protocollo per saggiare risposte comportamentali di Drosophila vola in una grande arena quattro campi. La messa a punto è qui utilizzato per saggiare le risposte di mosche a un singolo stimolo olfattivo; Tuttavia, la stessa impostazione può essere modificata per testare olfattiva multipla, stimoli visivi o optogenetic, o una combinazione di questi. La configurazione olfattometro registra l'attività delle popolazioni di mosca che rispondono agli odori, e metodi di analisi computazionali vengono applicate per quantificare i comportamenti mosca. I dati raccolti vengono analizzati per ottenere una rapida lettura su una corsa sperimentale, che è essenziale per la raccolta di dati efficiente e l'ottimizzazione delle condizioni sperimentali.

Introduzione

La capacità di adattarsi e rispondere all'ambiente esterno è critico per la sopravvivenza di tutti gli animali. Un animale ha bisogno di evitare i pericoli, cercare cibo e trovare i compagni, e imparare dalle esperienze precedenti. sistemi sensoriali funzione di ricevere una varietà di stimoli, come visiva, chimiche e meccanosensoriali, e inviare questi segnali al sistema nervoso centrale per interpretare e decodificato. Il cervello dirige quindi comportamenti motori appropriati in base all'ambiente percepito, come la ricerca di cibo o di fuga da un predatore. Capire come sistemi sensoriali rilevano il mondo esterno, e come il cervello decodifica e dirige le decisioni, è una sfida importante in neurobiologia.

Drosophila melanogaster è un sistema potente modello per indagare come neurale comportamenti circuiti di guida. Oltre ad essere semplice e poco costoso da mantenere, Drosophila presentano molti comportamenti diversi e complessi stereotipati, ma farlo con un compact sistema nervoso di circa 100.000 neuroni. Esistono tecniche genetiche potente per manipolare il genoma di Drosophila, e migliaia di linee transgeniche sono stati generati che selettivamente e riproducibile etichettare gli stessi sottoinsiemi di neuroni ^10-13. Queste linee transgeniche possono essere utilizzati per manipolare selettivamente l'attività dei neuroni marcati (attivare o inibire), e queste manipolazioni possono essere utilizzati per studiare come neurale comportamenti funzioni di guida.

Molteplici test comportamentali sono stati sviluppati per lo studio dei vari comportamenti di Drosophila. Drosophila, come molti animali, usano il loro senso dell'olfatto per guidare molte scelte comportamentali, come trovare cibo, trovare compagni, ed evitando i pericoli. L'olfatto è quindi un buon sistema sensoriale per indagare come gli stimoli esterni vengono rilevati e interpretati dal sistema nervoso di un animale per guidare scelte appropriate. Come tale, un certo numero di saggi sono stati sviluppati per investigating larvale e comportamenti olfattive adulti. Tradizionalmente, i comportamenti olfattive in Drosophila sono stati analizzati da una a due scelta paradigma T-labirinto, che può essere utilizzato per saggiare innata e comportamenti appresi olfattive ^3. In questo saggio, a circa 50 mosche sono date una scelta tra due tubi: un tubo contiene l'odore in questione e l'altro contiene un odorizzante di controllo (di solito il solvente odore). Le mosche sono dati un determinato periodo di tempo per fare una scelta, e quindi il numero di mosche che si trovano nelle varie camere sono contati. Sebbene il T-labirinto è un semplice saggio per molti esperimenti, ci sono diverse limitazioni. Ad esempio, i comportamenti olfattivi sono misurati in un solo punto di tempo e differenti scelte effettuate prima di questo punto di tempo vengono scartati. Allo stesso modo, i singoli comportamenti delle mosche all'interno della popolazione sono trascurate. Inoltre, il T-maze richiede conteggio manuale di mosche, che potrebbe introdurre errori. Infine, poiché ci sono solo due scelte misurati, questoriduce la potenza statistica spesso richiesto per rilevare cambiamenti comportamentali sottili. Un'alternativa a due scelta T-labirinto è un quattro quadranti (quattro campi) olfattometro ^14-18. In questo test, gli animali esplorano un'arena in cui ciascuno dei quattro angoli del campo è riempito con una potenziale sorgente di aria odorizzata. Lo stadio ha una forma increspata stella per ottimizzare la formazione di quattro quadranti odore sperimentalmente definiti. Se l'odore è fornito in uno degli angoli, allora è contenuto solo in quella quadrante. I comportamenti degli animali possono essere monitorati in quanto entrano ed escono dal quadrante odore e facilmente rispetto al loro comportamento nei tre quadranti di controllo. Il saggio olfattometro a quattro quadranti, quindi, record risposta comportamentale spaziale e temporale agli stimoli odore oltre una grande arena sperimentale.

Il olfattometro a quattro quadranti è stato sviluppato da Pettersson et al. ¹⁵ e Vet et al. ¹⁷ per indagare sulla OLfabbrica risposte comportamentali dei singoli Imenotteri parassiti. Faucher et al. ¹⁸ e Semmelhack e Wang ¹⁶ adattato il setup per monitorare le risposte olfattive dei singoli Drosophila. Il olfattometro a quattro quadranti è altrettanto sensibile alle risposte attrazione e di repulsione, consentendo una vasta gamma di odoranti e condizioni di prova. Custom-scritto software di monitoraggio fly, sviluppato da Alex Katsov ¹⁹ e attualmente mantenuto da Julian Brown (descritto nei materiali), ha introdotto ulteriori vantaggi per le implementazioni più recenti dei quattro quadranti olfattometro ^14,20-23. È ora possibile saggiare fino a 100 mosche contemporaneamente ad alta spaziale (27,5 pixel / cm) e temporale (30 fotogrammi al secondo) risoluzione, che consente l'estrazione di vari parametri, quali la posizione, velocità e accelerazione di mosche in qualsiasi punto nel tempo. Ciò consente indagini sulle dinamiche di risposte comportamentali delle mosche 'agli odori ²⁰ . Va notato, tuttavia, che l'identità di mosche individuali all'interno della popolazione durante l'intero periodo di monitoraggio non viene mantenuta. Invece, ogni traccia volo viene registrata per la durata di due tracce mosca non si intersecano. A quel punto, le nuove tracce vengono assegnate dopo le mosche divergono. Incorporando altri software di video-cattura (dettagliato nella tabella Materials), la stessa configurazione consente periodi di monitoraggio flessibile e può essere utilizzato per monitorare le mosche per un massimo di 24 ore, prendendo le immagini ad un frame rate inferiore. Questa opzione è stata utilizzata per studiare i comportamenti di deposizione delle uova di mosche e confrontare le loro posizioni del corpo con le preferenze ovipositional ^14. Il olfattometro a quattro campo può essere usato anche per studiare le risposte a multimodali (ad esempio, olfattivi e visivi) stimoli, o combinare optogenetic ⁹ o ²¹ thermogenetic stimolazione con presentazioni di stimoli sensoriali. Inoltre, l'alta risoluzione temporale permette l'estrazione di traiettorie for ogni singolo volo nel set di dati insieme. Pertanto, il metodo permette di indagine in comportamenti di popolazione olfattive-guidato e anche singoli interazioni sociali. I dati generati da questo test sono robusti e altamente riproducibili, consentendo l'uso del olfattometro quattro campi per schermi comportamentali.

Descriviamo qui il gruppo di installazione per un olfattometro a quattro quadranti. Dimostriamo ulteriormente il suo uso in saggiare attrazione olfattiva in risposta ad aceto di mele e repulsione in risposta a propionato di etile altamente concentrata. Infine, descriviamo e fornire codice di esempio per l'analisi dei dati di rilevamento fly registrati.

Protocollo

1. Setup Assembly

1. Fabbricazione l'arena a forma di stella (19,5 cm x 19,5 cm x 0,7 cm) di politetrafluoroetilene (PTFE), secondo le previste disegno (materiali supplementari, SupplementalSketch_StarShapedArena.pdf). L'arena può essere prodotto da una pubblicità o di un impianto personalizzato.
2. Acquisire due lastre di vetro (20,25 cm x 20,25 cm con spessore di 2 mm), ed un foro (~ 0,7 cm di diametro) esattamente al centro di una delle lastre di vetro con una punta diamantata.
3. Fabbricazione di una scatola di comportamento a tenuta di luce per l'arena comportamentale. Produciamo anche una scatola di macchina fotografica a tenuta di luce per la videocamera CCD a raggi infrarossi in base ai disegni forniti (materiali supplementari, SupplementalSketch_LightTightBox.pdf). Le scatole possono essere fabbricati da un commerciale o di un impianto personalizzato.
4. Montare il condizionatore sulla parete posteriore e le matrici LED sulle pareti laterali della scatola comportamento. Posizionare la sonda di temperaturanella casella comportamento attraverso un foro laterale per risposte tempo reale della temperatura e regolazione (vedi figure 1 e 2 per i dettagli).
5. Attaccare il filtro IR e polarizzatore circolare per la fotocamera e montare il gruppo nella casella di fotocamera. La casella di comportamento e la scatola della fotocamera sono separati da una finestra di vetro per un migliore controllo della temperatura della scatola comportamento (vedi figure 1 e 2 per i dettagli).
6. Collegare la fotocamera CCD ad infrarossi ad un adattatore fotocamera. Collegare l'adattatore fotocamera a un convertitore USB. Collegare il convertitore USB ad una porta USB del computer per l'acquisizione dei dati.
7. Installare il driver per il convertitore video sul computer in base alle istruzioni del produttore. Facoltativamente, installare il software di elaborazione delle immagini fornite dal produttore del convertitore video USB per accedere a una gamma più ampia di impostazioni della fotocamera e parametri di acquisizione.
8. Collegare il condizionatore (attraverso "l'uscita"Sul retro del regolatore di temperatura) e la sonda di temperatura (tramite" termocoppia "sul retro del regolatore di temperatura) al controllore di temperatura. Posizionare la sonda nella casella comportamento.
   Nota: Il sistema di controllo della temperatura nel nostro layout è in grado di mantenere la temperatura di dialogo fra 18 ° C e 30 ° C. Temperature ambiente superiori o inferiori potrebbero essere utili per thermogenetic (dTrpA1, TRPM8 o shibire ^ts) esperimenti per manipolare l'attività neuronale o inibire la trasmissione sinaptica. Per la maggior parte degli esperimenti, la temperatura viene mantenuta a 25 ° C.
9. Assemblare il sistema di erogazione degli odori nei passaggi successivi (si veda la Figura 1B per gli schemi dettagliati e raccordi di collegamento):
   1. Utilizzare il regolatore di pressione dell'aria per controllare l'ingresso aria dal sistema d'aria centrale. Collegare un filtro dell'aria in carbonio (riempito con carbone) al regolatore di pressione per purificare l'aria dalla zona centralesistema di ir.
   2. Assemblare il sistema di controllo di flusso costituito da più canali regolati da tubi flussimetro ad alta risoluzione.
   3. Collegare l'uscita dal filtro dell'aria carbonio ai tubi flussometro tramite un collettore come mostrato in figura 1B e 2F. Dirigere l'uscita dei tubi di misuratori di portata attraverso elettrovalvole a 3 vie a comando elettronico per regolare se l'aria pulita lasciando i misuratori di portata viene espulsa nella stanza o è entrato in camere odore misura ^24.
   4. Installare il controller elettrovalvola secondo il manuale del costruttore.
10. Installare il misuratore di flusso d'aria elettronica collegandolo ad un dispositivo di acquisizione dati (DAQ) e un alimentatore secondo il manuale del costruttore. Installare il software di interfaccia DAQ per verificare portate uguali in ogni quadrante della scena prima di ogni esperimento.

2. olfattiva stimoli Preparazione

1. Preparare 5 odoricamere formica ²⁴ che consistono in un contenitore esterno di plastica, vetro contenitore interno, un PTFE coperchio inserto misura, coperchio del contenitore originale con parte centrale rimossi, e due valvole unidirezionali.
   Nota: Un O-ring intorno al coperchio PTFE potrebbe essere utilizzata per impedire la perdita di aria dalla camera dell'odore durante odore perfusione. Vedere la Figura 1 per schematica e la Figura 2 per le foto delle camere.
2. Utilizzare quattro camere odoranti per controlli con solvente, e una camera per un odorizzante test. Riempire i contenitori di vetro con 1.000 ml di diluizione solvente o odorizzante (test odoranti + opportuni solventi, mescolare accuratamente prima di esperimenti), posizionare il contenitore di vetro all'interno della camera di plastica corrispondente (non fuoriuscire il liquido nella camera di plastica) e serrare il coperchio . Assicurarsi di utilizzare sempre una camera pulita per l'odorizzante di test e controlli con solvente.
   Nota: attrazione olfattivo può essere innescato da 1/16 di diluizione di aceto di mele (5% acidità) in wAter. Al contrario, il comportamento repulsione olfattivo può essere studiata utilizzando una diluizione 10% di etil propionato in olio minerale. stimoli di controllo in questi casi sono camere odore di olio minerale puro.

3. Preparazione Fly

1. Posteriore vola su medie farina di mais standard. Mettere 30 maschi e 30 femmine mosche genitori in una bottiglia standard, e far loro deporre le uova per 5 giorni a 25 ° C oa temperatura ambiente.
2. Per ogni esperimento, raccogliere nuova eclosed (<1 giorno di età) 25 maschi e 25 donne vola sotto brevi _di CO ₂ l'anestesia.
3. Tenere mosche in un flaconcino con il mezzo mosca standard per 2-4 giorni.
4. 40-42 ore prima dell'esperimento, trasferire le mosche senza CO ₂ anestesia   in una fiala con ~ gel 10 ml 1%. Ciò manterrà le mosche umidificate senza cibo, che contribuisce ad aumentare la loro attività locomotoria.
   Nota: Più del 90% delle mosche deve sopravvivere alla fame. Alcuni genotipi sono meno guarireil tuo e non può farlo attraverso una fame di 40 ore. In tali casi, periodi più brevi come 24-28 hr sono accettabili, ma dovrebbero essere mantenuti gli stessi per tutte le condizioni sperimentali e ripete.

4. risposte comportamentali alla attraenti e repellenti Sostanza odorante

1. Accendere il regolatore di temperatura e impostarlo a 25 ° C.
2. Collegare camere di odorizzante (controllo e test odoranti) inserendo il tubo all'uscita della camera di odorizzante e al push-to-connect montaggio sulla scatola comportamento.
3. Controllare la portata in ogni quadrante utilizzando il debimetro per assicurarsi che il controllo e correnti d'aria olfattivi sono pari a 100 ml / min.
4. Pulire l'arena PTFE volo e le lastre di vetro con il 70% di etanolo 2-3 volte e lasciare asciugare completamente all'aria (~ 3-4 minuti).
5. Fissare le lastre di vetro per l'arena con fascette.
6. Trasferimento vola senza CO ₂ anestesia nell'arena attraverso il foro in una delle lastre di vetro. A poppaer il trasferimento, posizionare una maglia circolare sul foro per evitare la fuoriuscita mosche.
   Nota: CO ₂ anestesia ha mostrato di influenzare il comportamento Drosophila ²⁵ e non deve essere utilizzato entro 24 ore di un esperimento comportamentale.
7. Posizionare l'arena con le mosche nella camera a tenuta di luce, collegare i flussi d'aria quattro controllo collegando il tubo collegato al raccordo sulla scatola comportamento verso gli angoli dello stadio push-to-connect, chiudere la porta della camera e attendere 10- 15 minuti per consentire le mosche acclimatarsi al nuovo ambiente. Se possibile, attivare le luci nella stanza in cui vengono eseguiti gli esperimenti, per evitare possibili perdite di luce minima che può pregiudizio il risultato sperimentale.
8. Eseguire un esperimento di controllo 5-10 minuti, in cui le mosche sono esposti a correnti d'aria 4 di controllo.
9. Analizzare i dati immediatamente (vedere la sezione di analisi dei dati di seguito) per fare in modo che le mosche sono distribuite in modo uniforme in campo, e l'attrazione indice è vicino0. Questo passaggio è essenziale, poiché verifica che non vi siano fonti incontrollate di preferenza o evasione all'interno dell'arena (ad esempio la luce che fuoriesce dall'esterno, distribuzione di temperatura uniforme, un'arena irregolare, contaminazione odori, etc.). Se le mosche sono distribuite inegualmente o la loro attività locomotoria è bassa, scartare le mosche, pulire nuovamente l'arena (Passo 4.4) e utilizzare un nuovo lotto di mosche di ripetere l'esperimento.
10. Collegare la camera di prova odorizzante per la messa a punto inserendosi valvole a 3 vie o ri-collegare i tubi di collegamento.
11. Eseguire esperimento di prova per 5-10 minuti e analizzare i dati come discusso nella sezione 5 di seguito (vedi anche Riferimento 14 e Figura 3). Le registrazioni più lunghe di 20 minuti può risultare in file di dati che possono essere difficili da trattare computazionalmente. Se le registrazioni più sperimentali sono desiderati, rapidamente fermare e riavviare il programma di monitoraggio. Ciò si traduce in un vuoto ~ 10 sec tra le registrazioni sperimentali.
12. Discard mosche.
13. Piastre pulite arena e vetro con il 70% di etanolo (passo 4.4) e sostituire i tubi di collegamento all'interno del contenitore a tenuta di luce. Per accelerare esperimenti, una nuova arena pulito può essere utilizzato, e l'arena sporca pulita durante l'esecuzione di prove sperimentali.
14. Eseguire un altro esperimento con un nuovo lotto di mosche, se necessario. Se diversi esperimenti vengono eseguiti nello stesso giorno, prestare la massima attenzione per garantire che nessun odorizzante viene lasciato nel sistema da una precedente prova. Questo non è normalmente un problema con basse concentrazioni di odoranti o con CO _2, ma può essere necessaria per stimoli altamente concentrate fino ad un gap 24 ore tra prove sperimentali. Inoltre, tutti i tubi dopo le portate tubi può essere sostituito se la contaminazione odorizzante è sospettata durante esperimenti di controllo. lasciare sempre l'aria secca su tra gli esperimenti per irrigare continuamente il sistema

Analisi 5. I dati

Nota: La mosca suggerito acquisizione di monitoraggio software (descritto nei materiali), tiene traccia mosche in tempo reale durante l'acquisizione, e consente di risparmiare il timestamp e le coordinate di tutte le mosche rilevati in formato * .dat. Abbiamo sviluppato una routine misura Matlab per convertire i dati in un formato Matlab, e analizzare i dati. Esempi di codice sono forniti in materiali supplementari, ma i dettagli di implementazione dipenderanno dal software utilizzato per l'acquisizione dei dati.

1. Caricare i dati grezzi. Creare una maschera spaziale che segue i contorni del campo e applicare la maschera per i dati grezzi per rimuovere tutti i punti di dati che non rientrano dell'arena in quanto rappresentano il rumore (Figura 4A, supplementare Codice MaskSpatialFiltering.m, Score.m, DrawCircularMask. m).
2. Rimuovere tutti i punti di dati che si muovono ad una velocità inferiore 0.163 cm / s per più di 3s, come questi dati è probabile che sia rumore o generato da mosche non-movimento (Figura 4B, complementare Codice TemporalFiltering.m).
3. Visualizzare i dati rimanentipunti da loro tracciando fuori tutto in una volta o come singole traiettorie (Figura 3, Codice supplementare SingleTrajectoryViewer.m).
   Nota: La posizione dei confini odore in quattro campi probabilmente dipende da una serie di fattori, quali le caratteristiche di ogni odorizzante e le portate in uso. Ad esempio, odoranti altamente volatili probabilmente riempire il quadrante odore più completo rispetto odoranti meno volatili. Quindi è probabile che ogni odorizzante può mostrare leggermente diversi confini odore. L'uso di un rivelatore fotoionizzazione per misurare confini odore può essere problematico in quanto utilizza un vuoto per campionare l'aria da un determinato luogo, e quindi interrompe la concentrazione di odorizzante in quel punto. Tuttavia, i confini odore può essere rapidamente stimati sulla base di dati comportamentali mosca. Ad esempio, un confine odore base di tracce fly cumulate in risposta a diversi odori può osservare chiaramente nelle figure 3C e 3D.
4. Calcolare un indice attrazione per determinare se esperimenti di controllo generano alcuna risposta preferenza, e anche per accedere alla risposta ad un odorizzante (o optogenetic ⁹⁾ stimolo. Per calcolare un indice di attrazione (AI), utilizzare gli ultimi 5 minuti di un controllo o di registrazione di prova. Per ottenere una misura di attrazione che cade tra +1 (attrazione assoluta) e -1 (repulsione assoluta), la seguente formula per calcolare la AI:
   
   dove _prova N è il numero di punti di dati nel quadrante di prova, _{il controllo} N è il numero medio di punti dati tre quadranti di controllo. Questa misura è intuitivo come nessuna preferenza sarebbe indicato da valori prossimi allo zero. Tuttavia, non indica correttamente la proporzione del numero totale di linea che si trovano nel quadrante odorizzante. Per ottenere questa misura, un indice percentuale (PI) può essere utilizzato:
   dove _prova N è il numero di punti di dati nel quadrante test e N _totale è il numero totale di punti di dati in quattro quadranti. Questa formula fornisce una misura che rientra tra 0 e 1, con 0,25 corrispondenti a nessuna preferenza comportamentale (Figura 3E e 4C, complementare Codice AttractionIndex.m).
5. Eseguire 5-10 ripetizioni di ogni condizione sperimentale, utilizzando un nuovo gruppo di mosche per ogni ripetizione. Confrontare gli indici di attrazione tra le condizioni o contro i controlli utilizzando il test di Kolmogorov-Smirnov non parametrico (Figura 3F, la funzione kstest2 in Matlab).

Risultati

I record del test olfattometro a quattro quadranti e analizza le attività ambulanti di molti vola sopra un grande spazio comportamentale. Odoranti possono essere introdotti nelle aeree correnti che entrano uno, due, tre, o tutti i quattro quadranti. In assenza di odori, le mosche muoversi liberamente tra tutti i quattro quadranti. Questo comportamento è fondamentale per osservare in quanto indica che i pregiudizi non intenzionali, non sono state introdotte nel test. Questi pregiudizi pos...

Discussione

Il olfattometro a quattro campi qui descritto è un sistema comportamentale versatile per studiare le risposte olfattive di grandi popolazioni di wild-type e mutante Drosophila mosche. Ogni esperimento prende ~ 1 ora (tra cui l'installazione, prove sperimentali, e pulizia), e 4-6 esperimenti può essere eseguita di routine di ogni giorno. Un tipico saggio usando 40-50 mosche per 5 minuti produce circa 450.000 monitorati punti dati per l'analisi. La configurazione descritta può anche essere utilizzato, con...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Sistema di erogazione dell'aria			(Quantità necessaria)
Tubi e connettori
Collettori termoplastici NPT(F)	Cole-Parmer, IL, USA	R-31522-31	1
Nipplo di riduzione esagonale (1/4MNPT->1/8MNPT)	McMaster-Carr, IL, USA	5232T314	1
Tubo ( ID:1/8)	McMaster-Carr, IL, USA	5108K43	Tubi da 50 piedi
(ID:1/16)	McMaster-Carr, IL, Stati Uniti	52355K41	da 100 piedi
	McMaster-Carr, IL, Stati Uniti	5117K71	1 confezione
raccordi per tubi push-to-connect	McMaster-Carr, IL, Stati Uniti	5779K102	4
raccordi per tubi spinati (1/4MNPT->1/8BF)	McMaster-Carr, IL, Stati Uniti	5463K439	1 confezione (10)
Raccordi per tubi spinati (1/8MNPT->1/8BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5463K438	2 pezzi (10)
Raccordi per tubi spinati (1/8MNPT->1/16BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5463K4	confezione da 2 (10)
Raccordi per tubi spinati (1/4MNPT->1/4BF)	McMaster-Carr, IL, USA&	nbsp; 5670K84	1
tappo a testa esagonale	McMaster-Carr, IL, USA	48335K152	1
Regolatore di pressione dell'aria, filtro dell'aria e flussometri			(Quantità necessaria)
Unità di essiccazione del gas Labatorio	W A HAMMOND DRIERITE CO LTD, OH, USA	Modello: L68-NP-303; stock #26840	1
Telai multitubo per tubi di flusso da 150 mm	Cole-Parmer, IL, USA	R03215-30	1
Telai multitubo per tubi di flusso da 150 mm	Cole-Parmer, IL, USA	R03215-76	1
tubi di flusso da 150 mm	Cole-Parmer, IL, USA	R-03217-15
Cartuccia valvola	Cole-Parmer, IL, USA	R-03218-72	9
Regolatore dell'aria di precisione	McMaster-Carr, IL, USA	6162K13	1
Valvole Soleniod	Automate Scientific, Berkeley, CA	02-10i	4
Controller per elettrovalvole	ValveLink 8.2, Automate Scientific, Berkeley, CA	01-18	1
Misuratore di portata elettronico	Honeywell	AWM3100V	1
DAQ (NI USB-6009, National Instruments) e a	National Instruments	NI USB-6009	1
Alimentatore	Extech Instruments	382200	1
Camere per odori
Polipropilene Vaso a bocca larga 2 oz; 60 ml	Nalgene	562118-0002	Ne sono necessari almeno 5 per esperimento, ma è necessaria una camera separata per ogni diluizione di ciascun odorante. Disponibile presso Container Store, parte # 635114)
Camera degli odori in vetro,	bottiglia Sunburst	LB4B	Ne sono necessari almeno 5 per esperimento.
Valvola "In" per camera di odori	Smart Products, Inc., CA, USA	214224PB-0011S000-4074	1 di queste parti viene utilizzata per camera di odore, ma devono essere sostituite frequentemente
Valvola "Out" per camera di odori	Smart Products, Inc., CA, USA	224214PB-0011S000-4074	1 di queste parti viene utilizzata per camera di odore, ma devono essere sostituite frequentemente
O ring	RT Dygert International, MN, USA	AS568-029 Buna-N O-R	1 confezione (100)
Fly arena, fotocamera e scatole di comportamento			(Quantità necessaria)
Comportamento e materiale della scatola della fotocamera	Plastiche interstatali, CA, USA	ABS estruso nero (https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php)	1803 pollici quadrati
Teflon per inserti per arena di mosche e camere per odori, spessore 3/8", 12" x 12"	McMaster-Carr, IL, USA	8545K27	1
Lastre di vetro, 1/8" di spessore, 9" x 9"	McMaster-Carr, IL, USA	8476K191	numero arabo
Regolatore termoelettrico a doppia azione	WAtronix Inc, CA, USA	DA12V-K-0	1
array di LED IR	Illuminazione avanzata, Rochester, VT, USA	AL4554-88024, PS24-TL	2 array di LED e un alimentatore
Unità di condizionamento d'aria	Melcor Store	MAA280T-12	1
Sistema di imaging			(Quantità necessaria)
Cosmicar/Pentax C21211TH (12,5 mm F/1,4) Obiettivo C-Mount	B E H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	KP	1
CCXC-12P05N Cavo di interconnessione	B E H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	SOCCXC12P05N	1
DC-700 Adattatore per fotocamera	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA		SODC700 1
B+W 40,5 093 Filtro IR	B E H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	65-072442	1
Polarizzatore circolare TiFFEN da 40,5 mm	Amazon		1
IR Videocamera	Industrial Vision Source, FL, USA	Sony XC-EI50 (SY-XC-E150)	1
Convertitore video USB	The Imagingsource, NC, USA	DFG/USB2-It	1
iFlySpy2 (software di tracciamento delle mosche)	Julian Brown, Stanford, Calfornia: julianrbrown@gmail.com	iFlySpy2	1
IC Capture 2.2 software	The Imagingsource, NC, USA (http://www.theimagingsource.com/en_US/products/software/iccapture/)
Varie			(Quantità necessaria)
Utensile rotante Dremel	Dremel, Racine, WI, USA	Dremel 8000-03	1
Punte diamantate per il taglio del vetro	Disponibili presso vari fornitori; MSC Industrial Supply Co, Melville, NY	90606328	1