Infezione di apparato urinario in un modello animale piccolo: cateterizzazione transuretrale di topi maschi e femmine

Sommario

Il modello stabilito di cateterizzazione transuretrale dei topi permette lo studio delle patologie della vescica, compreso l'infezione delle vie urinarie, ma può essere eseguito solo nelle femmine. Un nuovo modello di maschio instillazione transuretrale, qui presentato, consentirà la ricerca in un'area segnata da forti differenze cliniche ed epidemiologiche tra i sessi.

Abstract

Infezioni del tratto urinario (UTI) sono estremamente comuni in tutto il mondo, incorrere in spese associate all'assistenza sanitaria e morbosità significativa. Piccoli modelli animali, che riflettano la progressione e l'istituzione di malattia, consentono la dissezione delle interazioni ospite-patogeno e generazione di immunità all'infezione. Nei topi, instillazione intravescicale di uropathogenic Escherichia coli, l'agente causativo in più dell'85% della Comunità acquisito UTI, ricapitola molte delle fasi di infezione osservati in esseri umani. Fino a poco tempo, tuttavia, UTI potrebbe solo essere modellati in animali di sesso femminile. Questa limitazione ha ostacolato lo studio delle differenze sesso-correlate in UTI, così come altre patologie della vescica, come il cancro. Qui, descriviamo un metodo per infondere di topo maschio che permette il confronto diretto tra gli animali femminili e maschili e fornire un protocollo dettagliato per valutare il tessuto della vescica mediante citometria a flusso come un mezzo per comprendere meglio la risposta dell'ospite all'infezione. Insieme, questi approcci saranno di aiuto nell'identificazione di fattori dell'ospite che contribuiscono a pregiudizi di sesso osservati in UTI e altre malattie della vescica-collegate.

Introduzione

Infezioni del tratto urinario (UTI) sono una delle infezioni più comuni nei paesi sviluppati¹. Tassi di infezione sono simili tra femmine e maschi tra i neonati e gli anziani². Donne di età premenopausa, tuttavia, hanno un'incidenza notevolmente aumentata di comunità-acquistata UTI rispetto a uomini^2,3. Dato che questa malattia influisce principalmente donne, ricerca fondamentale e clinica è prevalentemente concentrata sulla UTI nelle femmine. Tuttavia, UTI negli uomini è una sfida significativa e understudied assistenza sanitaria⁴. Infatt....

Protocollo

Mouse esperimenti sono stati condotti in conformità con l'approvazione di numero di protocollo 2012-0024 dalla Comité d' ' éthique en expérimentation animale Paris Centre et Sud (comitato etico per la sperimentazione animale), in applicazione del europeo direttiva 2010/63 DELL'UNIONE EUROPEA.

1. preparazione dei cateteri

1. Preparare una cannula di accesso endovenoso pediatrica per ogni gruppo di topi infetti. Utilizzando il meccanismo a molla integrato, cedere ogni cannula del suo ago, come indicato dal produttore. Gettare gli aghi, conservando solo la cannula endovenosa di plastica.
2. Sterilizzare i cateteri in cappa a flus....

Risultati

Lo sviluppo del presente protocollo, coorti dei topi C57Bl/6 maschili e femminili all'età di 6-8 settimane sono stati infusi e batterici onere valutato in vesciche a intervalli di tempo che vanno da 1 ora a 30 giorni. I risultati di questi studi sono dettagliati altrove (Zychlinsky Scharff et al., in sospeso). Qui, presentiamo i dati rappresentativi da infezioni di 24 ore. In particolare, la carica batterica era equivalente tra topi maschi e femmine alle 24 ore post-infezione (

Discussione

Transuretrale instillazione di topo maschio offre molte nuove opportunità di ricerca sull'influenza del sesso sui malattia mucosa della vescica, ma anche presenta varie sfide. Innanzitutto, una limitazione è che l'instillazione inizialmente può risultare per essere tecnicamente difficile, con conseguente eccessiva infiammazione durante l'inserimento del catetere. Miglioramento nella tecnica può essere raggiunto tramite l'instillazione di topi morti con una soluzione colorata, come colorante blu di Evans. Per confermare c.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Cateteri IV schermati BD Insyte Autoguard 24 G, diametro esterno 0,7 mm, lunghezza 14 mM	BD Medical	381811 o 381411*	* Il numero di catalogo è
un'ansa di inoculazione	Greiner Bio-One	731171
LB Miller brodo	Difco	244620
LB Miller agar	Difco	244520
Cuvette	Bio-rad	223-9955
siringhe	B Braun	9166017V
Pinze per pollice (Adson)	Fine Science Tools	11006-12
Provette da 5 ml, polipropilene	Falcon	352063
Sonde monouso per tessuti	Qiagen	990890
Provette con tappo a scatto da 15 ml	Thermo Scientific	362694
DNAse	Invitrogen	18047019
Liberase TM	Sigma-Aldrich	5401119001	deve essere aliquotato e conservato a -20 gradi; C per evitare ripetuti geli-disgeli
100 µ M MACS SmartStrainers	Miltenyi	130-098-463	compatibile con tubi da 15 ml, preferito
100 & micro; filtri per cellule m	Falcon	352360	compatibile con provette da 50 ml, se non sono disponibili i filtri intelligenti MACS
Piastra da 96 pozzetti	Falcon	353077
Blocco Fc	BD Pharmingen	553142	anti-CD16/CD32
anti-topo Anticorpo CD45	BD Biosciences	561487	sono disponibili molte diverse opzioni di coniugazione fluorescente
Provette da 5 ml in polistirene con tappo filtrante	Falcon
siringa da insulina	Terumo	BS05M2913
omogeneizzatore portatile	Qiagen	9001272	TissueRuptor
citometro a flusso	BD Biosciences	N/A	Fortessa SORP
software per citometria a flusso	BD Biosciences	N/A	Diva

dipendente dal paese 352235