Metodi per studiare lipidiche Alterazioni nei neutrofili e la formazione successiva di neutrofili extracellulare Traps

Graham Brogden; Ariane Neumann; Diab M. Husein; Friederike Reuner; Hassan Y. Naim; Maren von Köckritz-Blickwede

doi:10.3791/54667

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Articolo metodologico

Metodi per studiare lipidiche Alterazioni nei neutrofili e la formazione successiva di neutrofili extracellulare Traps

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DOI:

10.3791/54667

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29 marzo 2017

Graham Brogden^*¹^,² , Ariane Neumann^*¹^,³ , Diab M. Husein¹ , Friederike Reuner¹^,⁴ , Hassan Y. Naim¹ , Maren von Köckritz-Blickwede¹^,⁴

¹Department of Physiological Chemistry, University of Veterinary Medicine Hannover, ²Fish Disease Research Unit, University of Veterinary Medicine, ³Department of Clinical Sciences, Biomedical Center, Lund University, ⁴Research Center for Emerging Infections and Zoonoses (RIZ), University of Veterinary Medicine Hannover

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

I lipidi sono noti per svolgere un ruolo importante nelle funzioni cellulari. Qui, si descrive un metodo per determinare la composizione lipidica di neutrofili, con enfasi sul livello di colesterolo, utilizzando sia HPTLC e HPLC per ottenere una migliore comprensione dei meccanismi alla base di neutrofili extracellulare formazione trappola.

Abstract

analisi dei lipidi eseguita da cromatografia su strato sottile ad alta prestazione (HPTLC) è un metodo relativamente semplice e conveniente di analizzare una vasta gamma di lipidi. La funzione dei lipidi (ad esempio, nelle interazioni ospite-patogeno o voce host) è stato segnalato per svolgere un ruolo cruciale nei processi cellulari. Qui mostriamo un metodo per determinare la composizione dei lipidi, con una particolare attenzione per il livello di colesterolo neutrofili emoderivati primari, da HPTLC rispetto a cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC). L'obiettivo era quello di indagare il ruolo delle alterazioni dei lipidi / colesterolo nella formazione di neutrofili trappole extracellulari (NET). rilascio NET è noto come un meccanismo di difesa dell'ospite per impedire la diffusione di agenti patogeni all'interno dell'ospite. Pertanto, neutrofili umani derivati dal sangue sono stati trattati con metil-β-ciclodestrina (MβCD) per indurre alterazioni lipidiche nelle cellule. Utilizzando HPTLC e HPLC, abbiamo dimostrato che il trattamento MβCD delle cellule porta alla lipidicaalterazioni associate con una significativa riduzione del contenuto di colesterolo della cella. Allo stesso tempo, il trattamento MβCD dei neutrofili ha portato alla formazione di reti, come dimostrato da immunofluorescenza. In sintesi, qui vi presentiamo un metodo dettagliato per studiare alterazioni lipidiche neutrofili e la formazione di reti.

Introduzione

I lipidi hanno dimostrato di svolgere un ruolo importante nella omeostasi cellulare, morte cellulare, interazioni ospite-patogeno, e di citochine rilascio ^1. Nel corso del tempo, l'interesse e la conoscenza sull'impatto dei lipidi nelle interazioni ospite-patogeno o infiammazioni sono aumentati, e diverse pubblicazioni confermano il ruolo centrale di alcuni lipidi, in particolare il colesterolo di steroidi, in risposte cellulari. trattamento farmacologico con statine, che vengono utilizzati come inibitori della biosintesi del colesterolo bloccando 3-idrossi-3-metilglutaril-Coenzima-A-reduttasi (HMG-CoA reduttasi), può agire come ....