La valutazione post-mortem dell'infarto del miocardio (MI) nei roditori si basa sulla quantificazione dell'infarto su sezioni di cuore colorate. Descriviamo un metodo accurato per quantificare le dimensioni dell'infarto utilizzando il campionamento sistematico di cuori di ratto raccolti dalla base all'apice e l'analisi delle immagini di sezioni istologiche colorate con tricrombi.
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Articolo metodologico
Quantificazione istologica di cronica Myocardial Infarto in Rats
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'infarto del miocardio è definito come la morte dei cardiomiociti dovuta a ischemia prolungata; una risposta infiammatoria e la formazione di cicatrici (fibrosi) seguono il danno ischemico. Dopo la fase acuta iniziale, il rimodellamento cronico del ventricolo sinistro (LV) modifica la struttura e la funzione del cuore. La legatura coronarica permanente nei piccoli animali è stata ampiamente utilizzata come modello di riferimento per un modello cronico di infarto miocardico. L'assottigliamento della parete infartuata si sviluppa progressivamente in fibrosi transmurale. La valutazione istologica delle dimensioni dell'infarto viene comunemente eseguita; Ciononostante, manca una standardizzazione dei metodi di quantificazione. In effetti, importanti aspetti metodologici, come il numero di sezioni analizzate e i metodi di campionamento e quantificazione, di solito non sono descritti e quindi precludono il confronto tra le indagini. Troppo spesso la quantificazione viene eseguita su una singola sezione ottenuta a livello dei muscoli papillari. Poiché sono in fase di studio nuove strategie volte a ridurre l'espansione e il rimodellamento dell'infarto, vi è un'importante necessità di standardizzare protocolli di campionamento cardiaco accurati. Descriviamo un metodo accurato per quantificare le dimensioni dell'infarto utilizzando un campionamento sistematico di cuore di ratto raccolto e analisi di immagini di sezioni istologiche colorate tricromatiche ottenute dalla base all'apice. Forniamo anche prove che il calcolo dell'indice di espansione (EI) ha permesso di valutare le dimensioni dell'infarto, tenendo conto dei cambiamenti del ventricolo sinistro durante il rimodellamento.
Introduzione
Infarto del miocardio (MI) è una delle principali cause di morte e disabilità in tutto il mondo. La malattia coronarica è la causa principale; MI deriva da ischemia consecutivo a eventi coronarici quali l'occlusione. Quando riperfusione non viene eseguita entro le prime 6 ore, ischemia induce necrosi miocardica irreversibile. Nei pazienti, la caratterizzazione di MI si basa su diversi strumenti diagnostici, tra cui i segni clinici, elettrocardiogramma, valutazione dei livelli plasmatici di biomarcatori, l'ecocardiografia, risonanza magnetica per immagini, e istologica analisi 1. Acuta e cronica MI sono classificati in due diverse fasi di pregiudizi....
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Protocollo
Tutti gli animali hanno ricevuto cura umana nel rispetto della Convenzione europea sulla cura degli animali. Le procedure chirurgiche sono state eseguite in conformità con la legge svizzera sulla protezione degli animali dopo aver ottenuto l'autorizzazione del veterinario di Stato, Friborgo, approvato dal veterinario, la Svizzera federale.
Raccolta 1. Cuore
NOTA: Tutti gli interventi chirurgici sono stati eseguiti in anestesia isoflurano. Gli sforzi sono stati fatti per ridurre la sofferenza degli animali. In particolare, tutti gli animali hanno ricevuto una iniezione sottocutanea di 0,1 mg / kg buprenorfina....
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Risultati
Sei settimane post-LAD legatura, cuori sono state raccolte da ratti di Lewis. sezioni di tessuto 2 mm, sono state ottenute dall'apice alla base. Una procedura di colorazione TTC è stata effettuata per visualizzare l'area infartuale, che appare in bianco, e il miocardio sano, che appare in rosso (Figura 2). A seconda del sito di legatura LAD, le dimensioni dell'infarto varia. Per le grandi MI, infarti transmurale sono stati osservati dal vertice alla base
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Discussione
I passaggi critici all'interno del protocollo
tessuto fibrotico può essere valutata con precisione in un modello di ratto MI cronica con campionamento sistematico del cuore e l'immagine raccolta analisi di sezioni istologiche tricromatiche macchiato ottenuti dalla base all'apice. Due passi sono particolarmente importanti per l'attuazione del protocollo di successo. In primo luogo, l'uso di KCl per la raccolta cardiaca permette il muscolo cardiaco per esse.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Lo studio è stato sostenuto dalla Fondazione Nazionale Svizzera [SNF 310030-149986 a MNG], dall'Università di Friburgo e dall'Ospedale di Friburgo.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Matrice di cuore di ratto in acrilico 2 mm | 72-5015 | Harvard Appartus | |
| Inspira ventilatore avanzato a volume controllato | Harvard Apparatus | 557058 | |
| Catetere Insyte 14 G | BD | 381267 | |
| O.C.T | BDHA361603E | VWR | |
| TTC | T8877-10G | Sigma Aldrich | |
| Mayer ematossilina | MHS32-1L | Sigma Aldrich | |
| Acid Fuchsin CI 42685 | F8129-50G | Sigma Aldrich | |
| Ponceau Xylidin CI 16150 | P2395-25G | Sigma Aldrich | |
| Orange G CI 16230 | O3756-100G | Sigma Aldrich | |
| Verde chiaro CI 42095 | L5382-25G | Sigma Aldrich | |
| KCl | P9333-500G | Sigma Aldrich | |
| Xylol | 10315083 | HoneyWell | |
| Etanolo assoluto | 10303990 | HoneyWell | |
| 2-metilbutano | M32631-1L | Sigma Aldrich | |
| Microscopio stereogico | SM2800 | Nikon | |
| Formaldeide | 99340 | Reactolab | |
| Cassetta di inclusione | K113.1 | Carl Roth | |
| Bersoft Software | Bersoft.com | Software con licenza |
Riferimenti
- Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
- Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A....
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Ristampe e permessi
