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Articolo metodologico

Sviluppo di un modello diretto Pulp-capping di valutazione dei polpa dentale guarigione delle ferite e riparativa dentina formazione nei topi

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DOI:

10.3791/54973

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12 gennaio 2017

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In questo articolo

Sommario

Descriviamo un metodo passo-passo di eseguire incappucciamento diretto su topi denti per la valutazione della polpa guarigione della ferita e la formazione dentina riparativa in vivo.

Abstract

La polpa dentale è un organo vitale di un dente completamente protetto da smalto e dentina. Quando la polpa è esposta a causa di lesioni cariogene o iatrogene, viene spesso ricoperta con materiali biocompatibili per accelerare la guarigione delle ferite pulpare. L'obiettivo finale è quello di rigenerare la dentina riparativa, una barriera fisica che funziona come un "sigillo biologico" e protegge il tessuto pulpare sottostante. Sebbene questa procedura di incappucciamento diretto della polpa sia stata a lungo utilizzata in odontoiatria, il meccanismo molecolare alla base della guarigione delle ferite pulpari e della formazione riparativa della dentina è ancora poco compreso. Per indurre la dentina riparativa, l'incappucciamento della polpa è stato eseguito sperimentalmente in animali di grandi dimensioni, ma meno nei topi, presumibilmente a causa delle loro piccole dimensioni e delle conseguenti difficoltà tecniche. Qui, presentiamo un metodo dettagliato e passo dopo passo per eseguire una procedura di incappucciamento della polpa nei topi, inclusa la preparazione di una cavità simile a quella di Classe I, il posizionamento di materiali per l'incappucciamento della polpa e la procedura di restauro utilizzando il composito dentale. Il nostro modello murino di polp-capping sarà determinante nello studio dei meccanismi molecolari fondamentali della guarigione delle ferite pulpali nel contesto della dentina riparativa in vivo, consentendo l'uso di topi transgenici o knockout che sono ampiamente disponibili nella comunità di ricerca.

Introduzione

Le carie dentali sono una delle malattie orali più diffuse e la principale causa di interventi chirurgici alla dentizione in quasi tutti gli individui1,2. La prognosi degli interventi chirurgici e dei restauri di un dente dipende in gran parte da una corretta risposta pulpare e da una guarigione della ferita. Infatti, le carie dentali che penetrano in profondità attraverso lo smalto e la dentina portano spesso all'esposizione del tessuto pulpare sottostante che è spesso "tappato" con materiali dentali, come l'idrossido di calcio (Ca(OH)2) o i cementi idraulici calcio-silicato (HCSC), compresi gli aggregati di triossido minerale (MTA). L'obiettivo....

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Protocollo

I topi sono stati acquistati da Jackson Laboratory e conservati in un Vivarium priva di agenti patogeni e la Divisione di Medicina di Laboratorio UCLA animali (àlam). Gli esperimenti sono stati eseguiti secondo le linee guida istituzionali approvate dal comitato per la ricerca degli animali del Cancelliere (ARC # 2016-037).

1. mouse anestesia

  1. Utilizzare otto settimane di età femminile topi C57 / BL6 (n = 3).
  2. Anestetizzare i topi utilizzando soluzioni (5 mg / kg di peso del mouse) ketamina (80-120 mg / kg di peso del mouse) / xilazina e somministrare per via intraperitoneale (ip) alla dose di 10 ml / kg.
  3. Preparare ketamina (80 - ....

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Risultati

Qui, abbiamo dimostrato le procedure passo-passo per eseguire polpa di tappatura su topi denti. Uno degli aspetti chiave della polpa di tappatura nei topi è di avere l'apparato adeguato. A questo proposito, avendo il microscopio con un ingrandimento di potenza 10X è essenziale (Figura 1A). Per creare una preparazione di Classe-I-come nel dente, abbiamo utilizzato una fresa da ¼ di giro in un manipolo elettrico ad alta velocità a 200.000 giri al minuto (Figura 1B).......

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Discussione

Attualmente, ci sono diversi modelli sperimentali differenti disponibili per convalidare gli effetti in vivo di materiali dentali, ponteggi, o fattori di crescita sulla differenziazione delle cellule staminali odontogena polpa dentale (DPSCs) 13. Questi modelli includono ectopica trapianto autologo di DPSCs in un organo, come la capsula renale, o il trapianto sottocutaneo di DPSCs in topi immunocompromessi con ponteggi 14,15. Tuttavia, questi metodi sono limitate dal fatto che il loro effe.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sostenuto da R01DE023348 (RHK) da NIDCR / NIH e la Research Grant Facoltà (RHK) dal Consiglio per la ricerca del Senato Accademico della divisione di Los Angeles della University of California.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Stereomicroscopio BM-LEDMEIJI TechnoMicroscope 
Optima MCX-LED Bien Air Dental1700588-001Motore elettrico a motore
isofluranoHenry schein salute animaleNDC 11695-0500-2
Fresa rotonda da 1/4Brasseler001092T0
Lima K endodonticaRoydent98947
ProRoot MTADentsplyPROROOT5WMTA
Punto cartaHenry schein100-3941
Ultra-EtchUltradent prodotto Inc.Mordenzante all'acido fosforico
OptiBond SoloPlusKerr29669Adesivi
Coltolux LEDColtene/whaledent Inc.C7970100115Unità di illuminazione polimerizzante
Tinta di caratterizzazioneBiscoT-14012Composito fluido
SkyscanBreuker1275uCT scanner
MicromThermoHM355SMicrotomo
Ematossilina-1Thermo Scientific7221
Eosin-YThermo Scientific7111
Cytoseal 60Thermo Scientific8310-16Soluzione di montaggio

Riferimenti

  1. Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197(2015).
  2. Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent<....

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