Attraverso l'inoculazione con perline, la tecnica descritta consente la stimolazione della risposta di melanizzazione della zanzara nel sistema circolante dell'emolinfa. La quantità di melanina che ricopre le perle può essere misurata dopo la dissezione come misura della risposta immunitaria.
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In questo articolo
Sommario
Abstract
La stimolazione della risposta immunitaria è un attrezzo comune negli studi invertebrati per esaminare l'efficacia ei meccanismi di immunità. Questa stimolazione è basato sull'iniezione di particelle non patogeni in insetti, come le particelle vengono rilevati dal sistema immunitario e indurrà la produzione di effettori immunitari. Ci concentriamo qui sulla stimolazione della risposta melanizzazione nella zanzara Anopheles gambiae. I risultati di risposta melanizzazione nel incapsulamento di particelle estranee e parassiti con uno strato scuro di melanina. Per stimolare questa risposta, le zanzare vengono inoculati con perline all'interno della cassa toracica utilizzando tubi di vetro microcapillari. Poi, dopo 24 ore, le zanzare sono sezionati per recuperare le perline. Il grado di melanizzazione del cordone viene misurata utilizzando il software di analisi delle immagini. Beads non hanno gli effetti patogeni di parassiti, o la loro capacità di eludere o sopprimere la risposta immunitaria. Queste iniezioni sono un modo per misure efficacia immunitario e l'impatto della stimolazione del sistema immunitario su altri tratti della storia di vita, come ad esempio la fecondità e la longevità. Non è esattamente lo stesso di studiare direttamente le interazioni ospite-parassita, ma è uno strumento interessante per studiare l'immunità e la sua ecologia evolutiva.
Introduzione
Gli insetti si basano su risposte immunitarie per proteggersi contro i parassiti e patogeni 1 - 3 che violano attraverso la loro cuticola o il loro midgut dell'epitelio 4. In zanzare, queste risposte sono efficaci contro i batteri, virus 5 6, nematodi filarial 7, e parassiti della malaria 1,8,9. In zanzare, una risposta immunitaria chiave è l'incapsulamento di corpi estranei con la melanina 10 - 12. Questo incapsulamento può accadere nel midgut o in emolinfa sistema di circolazione 10 - 12. Questa risposta m....
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Protocollo
1. soluzione salina per l'iniezione e la dissezione
- Preparare la soluzione salina aggiungendo NaCl, KCl, e CaCl 2 per acqua distillata per ottenere 1,3 mM NaCl, 0,5 mM KCl, e 0,2 mM CaCl 2 a pH = 6,8.
- Aggiungere 1 ml di 0,1% di metil soluzione verde a 99 ml della soluzione salina per colorare le perle trasparenti. Questo è il metile verde "soluzione per l'iniezione" 0,001%.
- Quindi, aggiungere 5 ml di 0,1% di metil soluzione verde a 45 ml di soluzione salina. Questa metil verde "soluzione dissezione" 0,01% è 10 volte più concentrato in verde metile per facilitare la colorazione delle perle e la loro osservaz....
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Risultati
Zanzare non tutti hanno melanize le sfere nello stesso modo, come alcuni perle sono state coperte con meno melanina di altri (Figura 1). Infatti, alcune perle rimaste blu a causa di una mancanza di melanizzazione, mentre altri sono stati completamente scuro (Figura 1). Il valore melanizzazione stato standardizzato mediante interpolazione lineare per un valore compreso tra 0 (che corrisponde ad un cordone blu e unmelanized) e 100 (corrispondente ad .......
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Discussione
Questa tecnica di iniezione è utile per stimolare e studiare la risposta melanizzazione in zanzare. Ad esempio, qui abbiamo studiato l'effetto del carico stimoli immunitario.
Il passo fondamentale in questa procedura è per inoculare correttamente la zanzara. Qualsiasi danni eccessivi ai muscoli del volo o per la zanzara si può impedire la zanzara da alimentazione o può uccidere prima della dissezione. Un secondo passo fondamentale è quello di mantenere le zanzare sul ghiaccio abbastanza .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata possibile grazie al finanziamento dell'Università di Neuchâtel. Vorremmo ringraziare tutti gli studenti che hanno contribuito a migliorare questa tecnica, in particolare il nostro collega Kevin Thievent. Ringraziamo anche i membri del Thomas Lab per aver messo a disposizione il loro laboratorio. Vorremmo ringraziare Janet Teeple per il suo aiuto nell'allevamento delle zanzare. Vorremmo anche ringraziare Loyal Hall nel laboratorio del Pr. Tom Baker per il suo aiuto nella preparazione dei tubi di vetro micro capillari.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Tubi di vetro microcapillari GB120TF-10 | science-products.com | GB120TF-10 | http://www.science-products.com/Products/CatalogG/Glass/Glass.html |
| Microcaps Bulbo per pipetta capillare | Drumond | 1-000-9000 | |
| perline Sephadex CM C-25 caricate negativamente | Sigma-Aldrich, Steinheim, Germania | C25120 SIGMA | ne servono pochi per iniziare |
| Verde | metileSigma-Aldrich | 323829 ALDRICH | hanno bisogno di pochi per avviare |
| Software ImageJ | opensource | Versione 1.47f7 o successiva |
Riferimenti
- Dong, Y., Aguilar, R., Xi, Z., Warr, E., Mongin, E., Dimopoulos, G. Anopheles gambiae immune responses to human and rodent Plasmodium parasite species. PLoS pathog. 2 (6), e52(2006).
- Sadd, B. M., Schmid-Hempel, P. PERSPECTIVE: Principles of ecological immunology. Evolution....
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Ristampe e permessi
