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Articolo metodologico

Analizzando Effetti benefici dei supplementi nutrizionali sulle funzioni intestinali epiteliali barriera durante Experimental Colitis

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DOI:

10.3791/55095

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5 gennaio 2017

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In questo articolo

Sommario

Gli attuali trattamenti di malattie infiammatorie croniche intestinali (IBD) hanno lo scopo di alleviare i sintomi della malattia, ma possono causare gravi effetti collaterali. Così, strategie alternative sono allo studio in modelli animali colite. Qui, viene spiegato come gli effetti benefici della dieta completa sui segni clinici IBD sono analizzati in un tale modello di colite.

Abstract

malattie infiammatorie croniche intestinali (IBD), tra cui il morbo di Crohn e la colite ulcerosa, sono patologie croniche recidivanti dell'intestino. Essi causano gravi problemi, come crampi addominali, diarrea con sangue, e perdita di peso, in individui affetti. Purtroppo, non vi è ancora alcuna cura, e trattamenti mirano solo per alleviare i sintomi. Gli attuali trattamenti comprendono farmaci anti-infiammatori e immunosoppressori che possono causare gravi effetti collaterali. Questo garantisce la ricerca di opzioni di trattamento alternativi, come integratori alimentari, che non causano effetti collaterali. Prima della loro applicazione negli studi clinici, questi composti devono essere rigorosamente testati per l'efficacia e la sicurezza nei modelli animali. Un modello sperimentale affidabile è il modello di destrano solfato di sodio (DSS) la colite nei topi, che riproduce molti dei segni clinici della colite ulcerosa negli esseri umani. Recentemente abbiamo applicato questo modello per testare gli effetti benefici di un integratore alimentare contenentevitamine C ed E, L-arginina, e gli acidi grassi polinsaturi ω3-(PUFA). Abbiamo analizzato diversi parametri di malattia e abbiamo trovato che questo supplemento è stato in grado di migliorare la formazione di edema, danni ai tessuti, l'infiltrazione dei leucociti, stress ossidativo, e la produzione di citochine pro-infiammatorie, che porta a un miglioramento complessivo dell'indice di attività della malattia. In questo articolo, si spiega in dettaglio la corretta applicazione di supplementi nutrizionali che utilizzano il modello di colite DSS in topi C57BL / 6, e come parametri di malattie come l'istologia, lo stress ossidativo e l'infiammazione sono valutati. Analizzando gli effetti benefici dei diversi integratori alimentari può poi eventualmente aprire nuove strade per lo sviluppo di strategie terapeutiche alternative che alleviano i sintomi IBD e / o che prolungano le fasi di remissione senza causare gravi effetti collaterali.

Introduzione

La colite è una condizione infiammatoria del colon che può causare diarrea e dolore addominale. Colite può essere acuta, in risposta a infezione o allo stress, o può svilupparsi come una malattia cronica, come nella colite ulcerosa (UC), che appartiene al gruppo di malattie infiammatorie croniche intestinali (IBD). Anche se i segni clinici di UC sono stati ben descritti, la patogenesi è ancora poco conosciuta 1. E 'accettato tra gli esperti che UC è una malattia multifattoriale, con mutazioni genetiche e le risposte immunitarie aberranti che giocano un ruolo importante 2. Tuttavia, i fattori ambientali, come ad esempio lo stile di vita e l&#....

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali di Cinvestav.

1. Preparazione del DSS acqua potabile e l'induzione della colite

  1. Preparare un 3,5% w / v soluzione di destrano solfato di sodio (DSS) in acqua potabile autoclavato. DSS scioglie facilmente e non è necessario filtrare la soluzione finale.
    NOTA: 7 giorni di trattamento DSS induce grave colite. Se inducendo la colite lieve, 3 - sono raccomandati 4 giorni di trattamento. Finché l'acqua potabile DSS rimane chiara, non è necessario cambiare l'acqua. Tuttavia, se diventa torbida, deve essere sostituito.

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Risultati

Dieta Supplementi possono proteggere dal DSS colite

supplementi dietetici anti-infiammatorie e antiossidanti, come la vitamina C, vitamina E, l'ossido nitrico (NO) -source L-arginina, e acidi grassi polinsaturi ω3-(ω3-PUFA), sono stati utilizzati con successo variabile in animali modelli per alleviare i segni di malattie infiammatorie 3,6,15. Malnutrizione, stress ossidativo, e la produzione di citochine pro-infiam.......

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Discussione

Per poter utilizzare integratori alimentari negli studi clinici, i benefici e la sicurezza di tali supplementi devono essere attentamente valutati in vivo negli studi sugli animali. Nel caso di colite, diversi modelli animali appropriati che ricordano i segni clinici di IBD sono state stabilite, compresi i modelli chimici utilizzando DSS, TNBS, o acido acetico; modelli (KO), come IL10-KO out knock-; e la colite immuno-mediata dalle cellule utilizzando il trasferimento adottivo di cellule T 19-21. Il .......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal Consiglio messicano per la Scienza e la Tecnologia (Conacyt, 207.268 e 233.395 a Michael Schnoor). KFCO è un destinatario di una borsa di studio Conacyt (396.260) per ottenere una laurea magistrale.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
0,3% di gelatinaBioxon158
10% formaldeideJ.T. Baker2106-03
Piastra a 96 pozzetti con fondo piattoCorning3368
Etanolo assoluto J.T. Baker9000-03
Xilene assolutoJ.T. Baker9490-03
ABTSSigma AldrichH5882
Albumina sierica bovinaSigma-Aldrich9048-46-8
ColoScreenHelena Laboratories5072
Corabion (gentilmente fornito da Merck, Naucalpan, Messico)Merck
Destrano solfato sale di sodioAffymetrix9011-18-1(M.W. 40.000-50.000)
DiidroetidioLife TechnologyD11347
Eosin-Y J.T. BakerL087-03
Evans bluSigma-Aldrich314-13-6
Ago di alimentazioneCadence Science Inc.9921
Rack per vetrini in vetro con manigliaMicroscopia elettronica70312-16
Vetrini in vetroCorning2947
Ematossilina di HarrisSigma-AldrichH3136
Esadeciltrimetiammonio (HTAB)Sigma AldrichH6269
Histosette (cassetta di inclusione)SimportM498.2
Acido cloridrico 1 MJ.T. Baker9535-62
Perossido di idrogenoSigma AldrichH3410
KetaminaPiSA AgropecuariaQ-7833-028
Paraffina liquidaParaplast39501-006
Carbonato di litio Sigma-Aldrich2362
N,N-dimetilformammideJ.T. Baker68-12-2
N-acetilcisteinaSigma-AldrichA9165
Cubi di plastica Microscopiaelettronica70181
Soluzione di poli-L-lisinaSigma-Aldrich25988-63-0
Prisma 5 statistico softwareGraphPad softwarePrism 5
Soluzione salina 0,9% NaClCS PiSAQ-7833-009
Citrato di sodioSigma-AldrichW302600
Resina sintetica Poly Mont7987
Taq DNA polimerasiInvitrogen11615-010
Tissue-tek. O.C.T CompoundSakura Finetek4583
Siringa tuberculinaBD Plastipak305945
Tween 20Sigma-Aldrich9005-64-5
VECTASHIELD Antifade Mezzo di montaggio con DAPIVector LaboratoriesH-1200
XilazinaPiSA AgropecuariaQ-7833-099

Riferimenti

  1. Souza, H. S., Fiocchi, C. Immunopathogenesis of IBD: current state of the art. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 13, 13-27 (2016).
  2. Xavier, R. J., Podolsky, D. K. Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature. 448, 427-434 (2007).
  3. Neuman, ....

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Ristampe e permessi

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