L&#39;esame dei fenotipi host in<em&gt; affinis Gambusia</em&gt; In seguito a trattamento antibiotico

Sommario

Questo studio coinvolge i metodi per rivelare gli effetti su un host modello di pesce seguito alterazione della pelle e intestino composizione delle comunità microbiome da un antibiotico.

Abstract

La comunanza dell'uso degli antibiotici in medicina significa che comprendere le conseguenze che ne derivano per l'ospite è vitale. Gli antibiotici spesso riducono la diversità della comunità del microbioma ospite e alterano la composizione della comunità microbica. Molte malattie come l'enterocolite associata agli antibiotici, le malattie infiammatorie intestinali e i disturbi metabolici sono state collegate a un microbiota interrotto. La complessa interazione tra ospite, microbioma e antibiotici necessita di un modello trattabile per studiare le interazioni ospite-microbioma. I nostri pesci vertebrati d'acqua dolce fungono da modello utile per studiare gli aspetti universali della struttura e della funzione del microbioma della mucosa, nonché per analizzare gli effetti dell'ospite derivanti dall'alterazione della comunità microbica. I metodi includono le sfide dell'ospite come l'infezione da un noto patogeno dei pesci, l'esposizione a microbi fecali o del suolo, lo stress osmotico, la tossicità dei nitrati, l'analisi della crescita e la misurazione della motilità intestinale. Queste tecniche dimostrano un sistema di modelli flessibile e utile per la determinazione rapida dei fenotipi dell'ospite.

Introduzione

È stato stabilito che gli antibiotici possono disturbare il microbioma umano che porta a disbiosi, il che significa uno squilibrio comunità microbica. Alterazione della composizione del microbiota dopo trattamenti antibiotici ha dimostrato di ridurre la diversità della comunità, di ridurre i membri chiave, e alterare il metabolismo della comunità, in particolare nell'intestino ^{1, 2.} Disturbi antibiotico del microbioma intestinale in grado di ridurre la resistenza colonizzazione da Clostridium difficile ^{3, 4} e ⁵

Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in corso di approvazione dei protocolli IACUC, numerate 14-05-05-1018-3-01, 13-04-29-1018-3-01, e 14-04-17-1018-3-01.

1. Animal Collection, manipolazione, e cura etico

1. Raccogliere Gambusia affinis dal sito campo (guida di identificazione a http://www.sms.si.edu/irlspec/Gambusia_affinis.htm) utilizzando un piccolo tuffo rete e posto in 19 L secchi. Utilizzare ispezione visiva per identificare le specie.
2. pesce Riposo per 1 - 2 d in un secchio con acqua di stagno. In seguito, il trasferimento del pesce in 76 o 189 carri armati L acquario riempiti con acqua acqua di rubinetto me....

Risultati

Un diagramma schematico generale del sistema sperimentale utilizzato per studiare gli effetti ospitanti pesci da esposizione ad antibiotici ¹³ è rappresentata nella Figura 1A e comprende la tecnica per estrarre la pelle (Figura 1B) e dell'intestino (Figura 1C) microbiomes dal pesce. Tre giorni è stato selezionato come il periodo di esposizione agli antibiotici, perché dati precedenti rivela che, mentre il nume.......

Discussione

Alcune sfide richiedono un periodo di riposo in PMU pulita dopo il trattamento antibiotico per il farmaco ad esaurirsi nei tessuti dei pesci. Se viene saltato il periodo di riposo poi presenza antibiotico può confondere i risultati, soprattutto quando il saggio comporta l'esposizione ai batteri. Al fine di esaminare gli effetti di una composizione microbiome alterato senza grandi variazioni nel numero totale di microbi sul padrone di casa, esperimenti preliminari monitoraggio della composizione microbiome (16S profi.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Rifampicina	Calbiochem	557303-1GM
Nitrato di sodio	Sigma Aldrich	S5506
Destrano anionico da 70 kDa marcato con fluoresceina	ThermoFisher Scientific	D1823
Soluzioni saline tamponate con fosfato (PBS)	di Calbiochem	6500-OP	sciolgono in acqua per produrre PBS

Le compresse si