Il modello orecchio del mouse SKH1-Hr hr hairless consente intravitale microscopia a fluorescenza del microcircolo e fototossico induzione trombo senza previa preparazione chirurgica nel letto microvascolare esaminato. Pertanto, l'orecchio del topo glabro è un eccellente modello in vivo per studiare le complesse interazioni durante la formazione di trombi microvascolare, l'evoluzione del trombo, e trombolisi.
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Articolo metodologico
Intravitale Microscopia e Trombo induzione nel lobo di un mouse Hairless
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
complicanze trombotiche di malattie vascolari sono una delle principali cause di morbilità e mortalità nei paesi industrializzati. A causa delle complesse interazioni tra cellule ematiche e non cellulari durante la formazione di trombi, studi affidabili della fisiologia e fisiopatologia della trombosi possono essere eseguite solo in vivo. Pertanto, questo articolo presenta un modello orecchio nei topi senza peli e si concentra sull'analisi in vivo del microcircolo, formazione di trombi, e l'evoluzione del trombo. Utilizzando intravitale microscopia a fluorescenza e la via endovenosa (iv) l'applicazione dei rispettivi coloranti fluorescenti, un'analisi ripetitiva di microcircolazione del padiglione auricolare può facilmente realizzabile, senza la necessità di preparazione chirurgica. Inoltre, questo modello può essere adattato per studi in vivo su temi diversi, tra cui la guarigione delle ferite, danno da riperfusione, o di angiogenesi. In sintesi, l'orecchio di topi glabri è un modello ideale per la a vivo studio della microcircolazione cutanea in condizioni fisiologiche o fisiopatologiche e per la valutazione della sua reazione a differenti trattamenti sistemici o topici.
Introduzione
Lo scopo del presente articolo è quello di descrivere la tecnica della microscopia intravitale applicata al padiglione auricolare del mouse senza peli per l'osservazione diretta e l'analisi del microcircolo, formazione di trombi, ed evoluzione trombo. Con un'incidenza di 1 a 1.000, trombosi venosa è ancora una causa comune di morbidità. Anche se la diagnostica, le strategie di prevenzione e le terapie sono stati sviluppati negli ultimi anni, un terzo di trombosi venosa si manifesta come un'embolia polmonare 1. trombosi arteriosa gioca un ruolo fondamentale nelle malattie cardiovascolari, che sono la causa più comune di morte ne....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti in vivo (7221.3-1-006 / 15) sono state condotte in conformità con la legislazione tedesca in materia di protezione degli animali e la Guida NIH per la cura e l'uso di animali da laboratorio (Istituto di laboratorio risorse animali, Consiglio Nazionale delle Ricerche).
1. Mantenere generale degli animali
- Eseguire gli esperimenti con i topi hr SKH1-Hr maschi di età compresa tra 4 a 6 settimane. Utilizzare gli animali con un peso compreso tra 20 e 25 g.
- Tenere gli animali in un impianto privo di patogeni e in condizioni standardizzate di 24 a 26 ° C e circa il 60% di umidità ....
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Risultati
Effetti del trattamento cannabinoidi su trombogenesi
Sull'iniezione di 0,05 mL di FITC-destrano, fototossica induzione trombo porta ad una lesione endoteliale e la formazione di un tappo di piastrine parietale (figure 2 e 3). Nel presente studio, induzione trombo dopo l'iniezione ip di cannabinoidi (5 mg / kg di peso corporeo) o un veicolo determinato un'occlusione trombotica recipien.......
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Discussione
Ci sono diversi passaggi critici per l'induzione trombo successo nel lobo di topi hr SKH1-HR. Per problemi, le rispettive fasi del protocollo sono indicati tra parentesi.
condizioni di esame sono ideali in animali giovani all'età di 4 - 6 settimane ed a basso cheratinizzazione dell'epidermide. Negli animali più vecchi, la qualità di visualizzazione dei vasi è peggiore e meno paragonabili a causa della distanza maggiore tra la superficie della pelle e dei vasi bersaglio.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori non hanno riconoscimenti.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| SKH-1/hr topi | Charles River | 477 | può essere acquistato da altri fornitori |
| sniff per alimenti da laboratorio standard | Spezialdiaeten | V1594-0 | può essere acquistato da altri fornitori |
| stereomicroscopio operativo | Leica | M651/M655 | può essere acquistato da altri fornitori |
| microscopio intravitale | Zeiss | Axiotech Vario 100 | può essere acquistato da altri fornitori |
| obiettivo (20X/0,95) | Zeiss | 20x/0,50 W; Piano-NEOFLUAR | può essere acquistato da altri fornitori |
| obiettivo (63X/0,95) | Zeiss | 63x/0,95 W; ACHROPLAN | può essere acquistato da altri fornitori |
| telecamera CCD in bianco e nero | Pieper | FK 6990 IQ-S | può essere acquistato da altri fornitori |
| Registratore DVD | Panasonic | DMR-EX99V | può essere acquistato da altri fornitori |
| cloruro di sodio | Braun | 5/12612055/1011 | può essere acquistato da altri fornitori |
| Ketamina 10% | Bela pharm | F3901-6 | può essere acquistato da altri fornitori |
| Xilazina 2% | Bayer | 6293841.00.00 | può essere acquistato da altri fornitori |
| FITC-destrano 5% | Sigma | 46945-100MG-F | può essere acquistato da altri fornitori |
| dexapantenolo 5% unguento per gli occhi | Bayer | 6029009.00.00 | può essere acquistato da altri fornitori |
| formaldeide 4% | Sigma | HT501128-4L | può essere acquistato da altri fornitori |
| DMSO | Sigma | 472301 | può essere acquistato da altri fornitori. |
| vetrini coprioggetti 5 x 5 x 1 mm | Menzel | L4339 | possono essere acquistati da altri fornitori |
| Le strisce adesive | Leukosilk | 4683400 | possono essere acquistate da altri fornitori. |
| centrifuga | Beckman Coulter | CLGS 15 | può essere acquistata da altri fornitori |
| analizzatore ematologico | Sysmex | KX-21 A6980 | può essere acquistato da altri fornitori |
| Provetta per sangue EDTA | Sarstedt | 201.341 | può essere acquistata da altri fornitori |
| i tamponi di cotone | Sanyo | 604-A-1 | possono essere acquistati da altri fornitori |
| la luce infrarossa | Beurer | 5/13855 | può essere acquistata da altri fornitori. |
| monouso synringe | Braun | 2020-08 | può essere acquistato da altri fornitori |
| siringa da insulina | Braun | 9161502 | può essere acquistata da altri fornitori |
| aghi ipodermici usa e getta | Braun | 465 7640 | possono essere acquistati da altri fornitori |
| capillare end-to-end | Sarstedt | 19.447 | può essere acquistato da altri fornitori |
| piastra riscaldante | Klaus Effenberg | OP-T 185/03 | può essere acquistata da altri fornitori |
| forbici 14,5 cm | Aesculap | BC259R | può essere acquistato da altri fornitori |
| porta aghi | Aesculap | BM081R | può essere acquistato da altri fornitori |
| micropinze | Aesculap | BD331R | può essere acquistato da altri fornitori |
| microforbici | Aesculap | OC496R | può essere acquistato da altri fornitori |
| bisturi 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | può essere acquistato da altri fornitori |
| Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | può essere acquistato da altri fornitori |
| Prolene 6-0 | Ethicon | XN8706. P33 | può essere acquistato da altri fornitori |
| elettrocauterizzazione | Servoprax | H40140 | può essere acquistato da altri fornitori |
| Pad in acrilico Riscaldamento | integrato, 0,5 cm di piano alto |
Riferimenti
- White, R. H. The epidemiology of venous thromboembolism. Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).
- Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. The hairless mouse in skin research. J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).
- Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B.
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Ristampe e permessi
