Articolo metodologico
La scarsa comprensione delle prestazioni in vivo delle nanomedicine ostacola la loro traduzione clinica. Qui sono descritte le procedure per valutare il comportamento in vivo dei nanofarmaci antitumorali a livello sistemico, tissutale, di singola cellula e subcellulare in topi immunocompetenti portatori di tumore. Questo approccio può aiutare i ricercatori a identificare promettenti nanofarmaci antitumorali per la traduzione clinica.
Ispirato dal successo delle precedenti nanomedicina cancro nella clinica, i ricercatori hanno generato un gran numero di nuove formulazioni negli ultimi dieci anni. Tuttavia, solo un piccolo numero di nanomedicine sono stati approvati per l'uso clinico, mentre la maggior parte dei nanomedicine sotto sviluppo clinico hanno prodotto risultati deludenti. Uno dei principali ostacoli alla traduzione clinica di successo di nuovi nanomedicina cancro è la mancanza di una comprensione accurata delle loro prestazioni in vivo. Questo articolo presenta una procedura rigorosa per caratterizzare il comportamento in vivo della nanomedicina in topi portatori di tumore al sistemico, tessuti, cella singola, e livelli subcellulare tramite l'integrazione di emissione di positroni tomografia tomografia-computerizzata (PET-CT), metodi di radioattività di quantificazione , citometria a flusso, e microscopia a fluorescenza. Usando questo approccio, i ricercatori possono valutare con precisione le formulazioni su scala nanometrica romanzo in modelli murini pertinenti cator. Questi protocolli possono avere la capacità di identificare i nanomedicine cancro più promettenti ad alto potenziale o traslazionale per aiutare nella ottimizzazione della nanomedicine cancro per la traduzione futuro.
Nanomedicina si sta spostando il paradigma dello sviluppo trattamento del cancro 1. Ispirato al tremendo impatto clinico di precedenti nanomedicina cancro, come liposome- e nanotherapies albumina a base di 2, 3, molte nuove formulazioni sono state prodotte negli ultimi dieci anni. Tuttavia, recenti analisi del successo di traduzione clinica di questi nanomedicina cancro indicano che solo pochi di essi sono stati approvati per l'uso clinico 4, 5. Uno dei principali ostacoli alla traduzione clinica di nuovi nanomedicina cancr....
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La procedura consiste nella etichettatura duplice radioattiva e fluorescenti di nanoparticelle, imaging in vivo PET-CT, ex vivo misure biodistribuzione, e ex vivo immunostaining e citometria a flusso analisi. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali del Memorial Sloan Kettering Cancer Center.
1. Preparazione di liposomi Dual-etichettati
NOTA: singenico B16 melanoma può essere indotta da iniezione di 300.000 cellule B16-F10 nei fianchi posteriori di topi C57BL / 6 sotto anestesia da inalazione di 2% di ossigeno -isof....
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La Figura 1 mostra una panoramica della procedura. Figura 2 presenta la procedura di sintesi schematica dei liposomi dual-marcato descritte nel passaggio 1 10. La figura 3 mostra un rappresentante PET-CT immagine (Figura 3a), la radioattività quantificazione da immagini PET (figura 3b), il sangue emivita (Figura 3c), e biodistribuzione (figura 3d).......
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I passaggi critici all'interno del protocollo:
La qualità dei liposomi dual-marcato è la chiave per produrre risultati costanti per un lungo periodo di tempo. Coloranti fluorescenti liberi o 89 ioni Zr possono generare totalmente diversi modelli di targeting e devono essere completamente rimosso durante la fase di purificazione. Inoltre, se il sistema immunitario influisce significativamente sperimentale prestazioni cancro nanomedicina, l'utilizzo di modelli di topo immunocom.......
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Gli autori non hanno alcuna divulgazione da fare.
Gli autori desiderano ringraziare le dottoresse Helene Salmon e Miriam Merad della Icahn School of Medicine del Mount Sinai per aver fornito le cellule B16-F10-YFP e per la loro consulenza esperta sui modelli murini di melanoma. Gli autori ringraziano inoltre l'Animal Imaging Core Facility, la Radiochemistry and Molecular Imaging Probes Core Facility e la Molecular Cytology Core Facility presso il Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSK) per il loro supporto. Questo lavoro è stato sostenuto dalle sovvenzioni del National Institutes of Health NIH 1 R01 HL125703 (W.J.M.M.), R01CA155432 (W.J.M.M.), K25 EB016673 (T.R.) e P30 CA008748 (MSK Center Grant). Gli autori rin....
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DPPC | Avantilipids | 850355 | |
| Colesterolo | Sigma-Aldrich | C8667 | |
| DSPE-PEG2000 | Avantilipids | 880120P | |
| DSPE-DFO | Fatto in casa | 110634 | Perez-Medina et al., JNM, 2014 |
| DiIC12[5]-DS | AAT Bioquest | 22051 | |
| Filtro centrifugo | Vivaproducts | VS2061 | |
| Evaporatore rotante | Buchi | R-100 | |
| Radio-HPLC | Shimadzu HPLC con 2 pompe LC-10AT | N/A | |
| 89Zr-ossalato | MSKCC | Sintetizzato in casa | TR19/9 ciclotrone a fascio variabile (Ebco Industries Inc.) |
| Micro PET-CT | Siemens | Inveon Micro-PET/CT | |
| Contatore gamma | PerkinElmer | 2470-0150 | |
| Citometria a flusso | BD Biosciences | Fortessa | Qualsiasi analizzatore di citometria a flusso multiparametrico sarebbe sufficiente |
| Topi C57BL/6 | Jackson Laboratories | ||
| melanoma B16-YFP | Fatto in casa | N/A | Salmone et al., Immunità, 2016 |
| Ly6C (clone HK1.4)--APC-Cy7 | 128025 | Biolegend | |
| MHCII (M5/114/152)--APC | 107613 | Biolegend | |
| CD45 (30-F11)--BV510 | 103137 | Biolegend | |
| CD64 (X54-5/7.1)--PE-Cy7 | 139313 Biolegend | ||
| CD11b (M1/70)--BV605 | 101237 | Biolegend | |
| CD3 (17A2)--BV711 | 100241 | Biolegend | |
| CD31 (13.3)--PE | 561073 Biolegend | ||
| CD11c (M418)--PerCP-Cy5.5 | 117327 | BD Biosciences | |
| CD31 (13.3) senza fluoroforo | 550274 | BD Biosciences |
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