Identificazione di progenitori eritromieloidi e loro progenie nell&#39;embrione del mouse dalla citometria del flusso

Lorea Iturri; Javier Saenz Coronilla; Yvan Lallemand; Elisa Gomez Perdiguero

doi:10.3791/55305

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Articolo metodologico

Identificazione di progenitori eritromieloidi e loro progenie nell'embrione del mouse dalla citometria del flusso

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DOI:

10.3791/55305

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17 luglio 2017

Lorea Iturri¹^,² , Javier Saenz Coronilla¹ , Yvan Lallemand¹ , Elisa Gomez Perdiguero¹

¹Department of Developmental and Stem Cell Biology, CNRS UMR3738, Department of Immunology, Institut Pasteur, ²Cellule Pasteur UPMC, University Pierre et Marie Curie

In questo articolo

Sommario

Mentre i macrofagi infiltranti vengono reclutati continuamente nei tessuti adulti da precursori circolanti, i macrofagi residenti seminano il loro tessuto durante lo sviluppo, dove vengono mantenuti senza ulteriori input da progenitori. I progenitori per i macrofagi residenti sono stati recentemente identificati. Qui presentiamo metodi per la mappatura genetica dei fenomeni genetici dei progenitori macrofagi.

Abstract

I macrofagi sono fagociti professionali dal braccio innato del sistema immunitario. In steady state, i macrofagi sessili si trovano nei tessuti adulti dove agiscono come sentinelle di linea frontali di infezione e danni ai tessuti. Mentre altre cellule immunitarie sono continuamente rinnovate da staminali ematopoietiche e cellule progenitrici (HSPC) situate nel midollo osseo, una linea di macrofagi, conosciuta come macrofagi residenti, è stata dimostrata autopulita nei tessuti senza l'ingresso di HSPC di midollo osseo. Questa linea è esemplificata da microglia nel cervello, cellule Kupffer nel fegato e cellule di Langerhans nell'epidermide tra gli altri. La lamina propria intestinale e colon è l'unico tessuto adulto privo di macrofagi residenti indipendenti da HSPC. Recenti indagini hanno identificato che i macrofagi residenti provengono dall'emotopoiesi extra-embrionale di tuorlo da progenitori distinti dalle cellule staminali ematopoietiche fetali (HSC). Tra l'ematopoiesi definitivo del sacco di tuorlo, eI progenitori ritmicoeloidi (EMP) danno origine a cellule eritroidiche e mieloide, in particolare macrofagi residenti. EMP vengono generati solo all'interno del sacco di tuorlo tra E8.5 e E10.5 giorni di sviluppo e migrano verso il fegato fetale già quando la circolazione è collegata, dove si espandono e si differenziano fino a almeno E16.5. La loro progenie comprende eritrociti, macrofagi, neutrofili e mastociti, ma solo i macrofagi derivanti da EMP persistono fino all'età adulta nei tessuti. La natura transitoria dell'emergere dell'EMP e la sovrapposizione temporale con la generazione HSC rendono difficile l'analisi di questi progenitori. Abbiamo stabilito un protocollo di mappatura dell'induzione di tamoxifene-indottabile basato sull'espressione del promotore di Csf1r del recettore dei citocinosi del macrofago per caratterizzare in vivo le cellule EMP e le cellule EMP mediante citometria a flusso.

Introduzione

Ci sono diverse ondate successive ma sovrapposte di progenitori ematopoietici durante lo sviluppo, la cui progenie mieloide rimane nell'età adulta. Innanzitutto, i progenitori "primitivi" unipotenti emergono nel sacco di tuorlo del topo ¹ ^, ² tra E7.5-E8.25 e danno origine a macrofagi embrionali senza alcuna intermedia monocitica. Sia che i macrofagi derivati da progenitori primitivi persistano nel cervello adulto come microglia rimane un soggetto di indagine attiva. In secondo luogo, i precursori eritro-mieloidi (EMP) sorgono nel sacco di tuorlo all'E8.5, entrano nel flusso sanguigno e colonizzano ....