L'infusione del dotto pancreatico è una tecnica importante che può consentire il tracciamento del lignaggio, l'introduzione del gene e il targeting specifico della linea cellulare. Qui viene presentata una tecnica di infusione del dotto pancreatico per la somministrazione di farmaci e virali alle cellule pancreatiche.
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Articolo metodologico
Infusione del dotto pancreatico: un metodo efficace e selettivo di somministrazione di farmaci e virus
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il pancreas è un organo bifunzionale con componenti sia endocrini che esocrini. Un certo numero di patologie possono affliggere il pancreas, tra cui diabete, pancreatite e cancro al pancreas. Tutte e tre queste malattie segnano aree di studio attive, non solo per sviluppare una terapia immediata, ma anche per comprendere meglio la loro fisiopatologia. Ci sono pochi strumenti per promuovere queste aree di studio. L'infusione del dotto pancreatico è una tecnica importante che può consentire il tracciamento del lignaggio, l'introduzione del gene e il targeting specifico della linea cellulare. La tecnica richiede l'intricata dissezione della seconda porzione del duodeno e dell'ampolla, seguita dall'occlusione del dotto biliare e dalla cannolazione del dotto pancreatico. Sebbene la tecnica sia tecnicamente impegnativa all'inizio, le applicazioni sono miriadi. L'ambiguità nelle specifiche della procedura tra i gruppi ha evidenziato la necessità di un protocollo standard. Questo lavoro descrive l'espressione di una proteina fluorescente verde (GFP) all'interno del pancreas dopo l'infusione del dotto pancreatico di un vettore virale che esprime GFP rispetto a un intervento chirurgico fittizio. L'infusione e quindi l'espressione è specifica per il pancreas, senza espressione presente in nessun altro tipo di tessuto.
Introduzione
Il pancreas è un organo bifunzionale, con componenti sia endocrini che esocrini. Un certo numero di patologie possono affliggere il pancreas, tra cui diabete, pancreatite e cancro al pancreas1. Tutte e tre queste malattie segnano aree di studio attive, non solo per sviluppare una terapia immediata, ma anche per comprendere meglio la loro fisiopatologia.
Un metodo di somministrazione terapeutica mirato sarebbe utile. Abbiamo sviluppato una tecnica di infusione del dotto pancreatico che è un metodo efficace e selettivo per la somministrazione di farmaci e virus alle cellule pancreatiche. In questo modello, il dotto pan....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la ricerca e la cura degli animali presso l'Ospedale pediatrico di Pittsburgh e dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Pittsburgh.
1. Preparazione preoperatoria
- Somministrare isoflurano per via inalatoria (1 - 3% per il mantenimento e fino al 5% per induzione) attraverso un cono nasale ad un livello anestetico appropriato. Monitorare l'adeguatezza dell'anestesia con il pizzico della dita con una pinza. La mancanza di una risposta è considerata adeguata e assicurarsi di non sovramedicare, poiché può verificarsi depress....
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Risultati
Con la pratica e un'attenta tecnica chirurgica, il tasso di sopravvivenza di questi topi dovrebbe essere superiore al 95%. Una settimana dopo l'infusione, l'effetto desiderato dovrebbe essere evidente nel pancreas. I topi a 10-12 settimane di età sono stati utilizzati per le infusioni del dotto pancreatico. Qui usiamo un sierotipo 8 del virus adeno-associato (AAV8) con un promotore CMV per esprimere la proteina fluorescente verde (GFP), rispetto a un intervento chirurgico fittizio. I panc.......
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Discussione
Questo lavoro descrive in dettaglio la metodologia alla base dell'infusione del dotto pancreatico, un modello murino efficace per la consegna di geni e altre molecole in modo specifico ed efficace al pancreas. L'ambiguità nelle specifiche della procedura tra i vari gruppi ha evidenziato la necessità di un protocollo standardizzato8,9,10.
Ci sono diversi passaggi critici della procedura, a partire dall.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori non hanno riconoscimenti. I finanziamenti sono stati ricevuti dalla Foundation of Health and Family Planning Commission della provincia di Zhejiang (Grant 20146242) e dalla Foundation of Wenzhou Science & Technology Bureau (Grant Y20140248).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Topi (25-30 g, 8-12 settimane) | Jackson Laboratory | ||
| Ketofen | Henry Schein Inc. | 5487 | |
| Etanolo (70%) | Sigma-Aldrich | 34923 | |
| Soluzione salina sterile | Baxter Healthcare Corp. | 2B-13-00 | |
| Dispositivi | |||
| la depilazione | Nair o rifinitore | ||
| Garze 2 pollici x 2 pollici | Fisher Healthcare | 22-362-178 | |
| Aghi (30,5 G e 25 G) | Becton Dicksinson e Co. | Siringa 305106 e 305122 | |
| per Ketofen e soluzione salina | Becton Dicksinson and Co. | ||
| Siringa per pompa | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 | |
| Pompa per infusione | Pump Systems Inc. | NE-1000 | |
| World Precision Instruments | CMF31G | ||
| Morsetti Bulldog curvi (2) | Roboz | RS-7439 | |
| Arruga Pinze | Roboz | RS-5163 | |
| Pinza Adson | Roboz | RS-5234 | |
| Porta aghi | Roboz | RS-7882 | |
| Forbice | Roboz | RS-5982 | |
| Applicatori con punta in cotone | Vendite e servizi | 22-9988 | |
| per microscopio | |||
| Owens e | SXMD1B402 |
Riferimenti
- Gittes, G. K. Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review. Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).
- Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are disti....
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Ristampe e permessi
